Добавил:
Billar
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Зарипова Фалия Фуатовна. / ПР1_Систематика и номенклатура бактерий. Морфология бактерий и методы ее изучения (1).pdf
Антигенные свойства бактерий
Антигенные свойства бактерий — это способность микроорганизмов (антигенов) специфически
взаимодействовать с факторами иммунитета (антителами, клонами эффекторных лимфоцитов). Это
проявляется в том, что антигены несут признаки генетически чужеродной информации и при попадании
в организм распознаются иммунной системой.
Бактериальная клетка представляет собой сложный комплекс антигенов. Среди бактериальных
антигенов различают структурные, непосредственно связанные с клеткой, и секретируемые
во внешнюю среду. Структурные антигены бактерий по локализации подразделяют на жгутиковые,
соматические и капсульные.
1) Жгутиковые антигены (Н-антигены) имеются у всех подвижных бактерий. Они представляют
собой эпитопы сократительного белка флагеллина.
2) Соматические антигены (О-антигены) связаны с клеточной стенкой бактерий. Ранее полагали, что
О-антиген заключен в содержимом клетки, ее соме, поэтому его и назвали соматическим антигеном.
Впоследствии выяснилось, что этот антиген связан с клеточной стенкой бактерий.
3) Капсульные антигены (К-антигены) содержатся в капсуле бактерий и отличаются от антигенов
клетки. К-антигены располагаются более поверхностно, чем О-антигены, и часто маскируют их, поэтому
для выявления О-антигена нужно кипячением разрушить К-антиген.
Антиген вирулентности, или Vi-антиген – является вариантом капсульного антигена. Он является
поверхностным полисахаридным антигеном, присутствующим на поверхности энтеробактерий,
обладающих высокой вирулентностью. Обнаружение этого антигена или специфичных к нему антител
имеет большое диагностическое значение.
К секретируемым (растворимым) бактериальным антигенам относятся экзотоксины
и экзоферменты, в том числе ферменты агрессии (гиалуронидаза, фибринолизин и др.).
В антигенном составе некоторых бактерий выделяется группа антигенов с сильно выраженной
иммуногенностью, чья биологическая активность играет ключевую роль в формировании патогенности
возбудителя. Связывание таких антигенов специфическими антителами практически полностью
инактивирует вирулентные свойства микроорганизма и обеспечивает иммунитет к нему. Эти антигены
получили название протективных. Очищенные протективные антигены могут быть «идеальными»
вакцинными препаратами.
Локализация основных
бактериальных антигенов,
связанных со структурой клетки
Визуализация микроорганизмов.
Микроскопия
Стереоскопический
микроскоп
Световой
микроскоп
Люминесцентный
микроскоп
Электронный
микроскоп
Микроскопия нативного материала
Приготовление препарата «раздавленная капля»
1. Предметное стекло обезжирьте.
2. Нанесите 1-2 капли исследуемого биоматериала на
предметное стекло.
Если капля не растеклась, осталась капелькой, то можно
приступать к следующему пункту.
3. Аккуратно накройте каплю покровным стеклом.
Если вода при накрывании капли покровным стеклом вышла за
его пределы, аккуратно удалите её фильтрованной бумагой.
4. Микроскопия в проходящем свете на увеличении х10, х40
Приготовление препарата «висячая капля»
Используется стекло со шлифованной лункой.
Края лунки смазать вазелиновым маслом.
1. На покровное стекло в центр нанести каплю
исследуемого материала.
2. Затем предметное стекло перевернуть лункой вниз
и поместить на покровное стекло так, чтобы капля
находилась в центре лунки, не сопри касаясь с ее
краями. Предметное стекло легонько прижать к по
кровному и перевернуть.
3. В об разовавшейся герметичной ка мере капля не
высыхает, что позволяет наблюдать за микро
организмами продолжительное время.
Микроскопия фиксированного материала
1. Приготовление препарата
2. Фиксация
3. Окрашивание
4. Микроскопия
Приготовление фиксированного материала для дальнейшей микроскопии
Фиксация мазка является обязательной процедурой, в результате которой микроорганизмы погибают, прочно прикреп ляются к
стеклу и значительно лучше воспринимают окраску.
Способы фиксации препарата:
•
Тепловая (в пламени горелки)
•
Химическая (эфир; этиловый или метиловый спирт; смесь спирта с эфиром (смесь Никифорова) в соотношении 1:1)
•
Среды для заключения, допускающие длительное хранение мазков
Фиксированный мазок – основа большинства методов окраски
1. На обезжиренное предметное стекло наносят бактериальной петлей каплю исследуемой жидкости; воды или стерильного
физиологического раствора и бактериологической петлей переносят в нее небольшое количество исследуемого материала.
Полученную суспензию равномерно распределяют тонким слоем на площади 1 – 2 см петлей.
2. Препарат высушивают при комнатной температуре на воздухе.
3. Высушенный мазок фиксируют в пламени горелки или химическим фиксатором.
Красители, красящие и вспомогательные растворы
Цвет
Красный и
розовый
Голубой
(синий)
Фиолетовый Желто-
коричневый
Зеленый Черный
Основные
красители
фуксин основной,
нейтральный
красный,
сафранин,
тионин,
гематоксилин;
метиленовый
синий;
«Виктория»
кристаллический
фиолетовый,
метиленовый
фиолетовый,
генциан
фиолетовый;
хризоидин,
везувин
янус зеленый,
малахитовый
зеленый,
метиленовый
зеленый
индулин
Кислые
красители
фуксин кислый,
эозин, эритрозин;
пикриновая
кислота, конго,
флуоресцин
нигрозин
Окраска микроорганизмов позволяет изучить морфологические особенности микробов
●
В нативном (естественном) состоянии бактерии имеют такой же коэффициент преломления, как и стекло, поэтому они
невидимы при микроскопическом исследовании.
●
Для окрашивания микроорганизмов применяют анилиновые красители. По химическим свойствам их разделяют на
оснОвные и кислые. У основных красителей хромофором (ион, придающий окраску) является катион, у кислых – анион.
●
ОснОвные красители более интенсивно связываются с ядерными (кислыми) компонентами клеток.
●
Кислые красители хорошо окрашивают цитоплазматические (основные) компоненты клеток.
●
В микробиологической практике красители используются в виде солей: основные – чаще в виде солей соляной, реже уксусной
и серной кислот; кислые - в виде натриевых или калиевых солей.
●
Большинство микроорганизмов быстро и хорошо окрашиваются водными растворами красителей.
●
Для окраски трудно окрашивающихся или совсем не окрашивающихся видов микроорганизмов применяют протравливание
веществами (протравами).
Методы окраски
Простые Сложные
Один этап
Один краситель
Можно оценить форму, размеры и взаимное
расположение клеток
Несколько этапов
Несколько красителей
Протравы
Дифференцирующие вещества
Позволяют отличить одну группу бактерий от другой или
выявить определенные структуры бактериальной клетки
Систематика занимается всесторонним описанием видов организмов, выяснением степени родственных отношений между ними и
объединением их в различные по уровню родства классификационные единицы (таксоны).
Классификация — составная часть систематики. Занимается распределением организмов в соответствии с их общими
признаками по различным таксонам.
Таксономия — наука о принципах и методах распределения (классификации) организмов в иерархическом плане.
Таксономические категории
В таксономическом отношении микроорганизмы очень разнообразны. Они включают прионы, вирусы, бактерии, водоросли, грибы,
простейшие и даже микроскопические многоклеточные животные.
Высшие таксоны Низшие таксоны
царство
отдел
класс
порядок
семейство
род
вид
морфовар
хемовар
биовар
патовар
серовар
фаговар
Основной таксономической единицей в биологии является вид (species).
Вид – это эволюционно сложившаяся совокупность микроорганизмов, имеющих единое происхождение, сходный генотип и
максимально близкие фенотипические признаки и свойства.
Классификация и систематика микроорганизмов