Вияние орхидэктомии на иммунный статус мышей гибридов F1. Монография
.pdf
4.2. Влияние орхидэктомии на количество IgGантителообразующих клеток на Т-зависимый антиген при первичном и вторичном гуморальном иммунном ответе
Уровень первичного (IgG-АОК) и вторичного (IgGАОК) гуморального иммунного ответа на Т-зависимый антиген (ЭБ) исследовали в динамике посткастрационного периода через 5 и 12 недель после операции.
Как видно из рис. 8, количество IgG-антителобразу- ющих клеток у кастрированных самцов увеличивалось в 1,9 раза через 5 недель после гонадэктомии. Через 12 недель после операции отмечалось возрастание IgG-антителобра- зующих клеток в 1,5 раза.
*Р<0,001; **Р<0,05
Рис. 8. Количество IgG-АОК на селезенку при первичном иммунном ответе в динамике посткастрационного периода
На рис. 9 представлены данные о влиянии гонадэктомии на вторичный иммунный ответ (образование IgG-АОК селезенки на тимусзависимый антиген). Количество IgGАОК селезенки у кастрированных животных составляет
61
*Р<0,05
Рис. 9 Количество антителообразующих клеток, синтезирующих антитела класса IgG, при вторичном иммунном ответе
1583652, что в 1,6 раза превышает показатели контрольных животных.
Таким образом, гонадэктомия приводит к стимуляции вторичного иммунного ответа на Т-зависимый антиген in vivo.
По данным D. Edinger and W.J. Garett (1972), продукция
IgG во время первичного гуморального иммунного ответа достоверно не изменялась у гонадэктомированных самцов мышей по сравнению с интактными. При вторичном иммунном ответе на Т-зависимый антиген продукция IgG была выше у животных через 10 недель после кастрации, чем у интактных самцов.
Предполагается, что гиперплазия тимуса способствует усилению антителообразования. Снижение функций супрессорных клеток тимуса после кастрации приводит к усилению антителообразования В-клетками на Т-независимый
62
антиген. Увеличение функциональной активности клеток тимуса играет роль в повышении гуморального ответа на тимусзависимый антиген, тимический гормон обусловливает увеличение ответа на тимуснезависимый антиген (Myers et al., 1972).
Таким образом, отмечается достоверное увеличение количества IgG-антителообразующих клеток на Т-зависимый антиген при первичном и вторичном гуморальном иммунном ответе в динамике посткастрационного периода.
4.3.Влияние орхидэктомии на концентрацию IgE
всыворотке крови
Данные по исследованию уровня сывороточного IgE через 5 и 12 недель после кастрации представлены на рис.10.
IgE, мкг/мл
30 |
|
24,8 |
24,5 |
25 |
|
||
17,7 |
|
|
|
20 |
|
|
|
|
|
|
|
15 |
|
|
|
10 |
|
|
|
5 |
|
|
|
0 |
|
|
|
|
Контроль |
5 недель после |
12 недель |
|
|
GE |
после GE |
*Р<0,05 (для всех значений между опытом и контро-
лем).
Рис. 10. Концентрация IgE в сыворотке крови у животных в динамике посткастрационного периода
63
Содержание IgE в сыворотке крови у гонадэктомированных животных в динамике посткастрационного периода оставалось на одном уровне – 24,8 и 24,5 мкг/мл через 5 и 12 недель после операции соответственно. Значения антител класса E в сыворотке крови были в среднем в 1,4 раза выше по сравнению с интактным контролем.
Эти результаты находят подтверждение в данных других исследований. У кастрированных самцов CBA/J после интраназальной иммунизации PLA2 отмечалась более высокая продукция IgЕ через 14 дней после кастрации, чем у ложнооперированных самцов. Механизмы иммуносупрессивной роли мужских половых гормонов в продукции IgЕ in vivo остаются неясными (Yamamoto et al., 2001).
Таким образом, концентрация IgE в сыворотке крови достоверно выше у гонадэктомированных самцов в динамике через 5 и 12 недель после проведения операции.
4.4. Влияние орхидэктомии на реакцию гиперчувствительности замедленного типа
Степень гиперчувствительности замедленного типа у мышей определяли через 7 и 12 недель после проведения гонадэктомии.
Как видно из рис. 11, после кастрации происходило изменение выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа. Через 7 недель после гонадэктомии у опытных мышей гиперчувствительность замедленного типа достоверно увеличивалась − в среднем в 1,7 раза по сравнению с контролем. Через 12 недель после кастрации гиперчувствительность замедленного типа у опытных мышей была в среднем в 1,5 раза выше, чем в контроле.
Существуют данные, свидетельствующие о действии тимуса на развитие реакции гиперчувствительности
64
*Р<0,001;**Р<0,01
Рис. 11. Влияние гонадэктомии на гиперчувствительность замедленного типа у самцов мышей BDF в динамике посткастрационного периода
замедленного типа, которое реализуется через растворимые медиаторы (Miller et al., 1979). Можно предположить, что развивающаяся гиперплазия тимуса после кастрации приводит к усилению гиперчувствительности замедленного типа у гонадэктомированных животных.
Таким образом, отмечается усиление клеточного иммунного ответа в исследуемые сроки после кастрации.
65
5. ОСОБЕННОСТИ ХРОНИЧЕСКОЙ РЕАКЦИИ ТРАНСПЛАНТАТ ПРОТИВ ХОЗЯИНА
У ИНТАКТНЫХ И ОРХИДЭКТОМИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ
Одной из моделей для изучения аутоиммунных нарушений служит индуцированная хроническая реакция трансплантат против хозяина (РТПХ) в полуаллогенной системе
DBA/2(C57BL/6 × DBA/2)F1 (Via et al., 1991). Детальное изучение хронической РТПХ на самках показало, что в зависимости от преобладающего соотношения Th1/Th2 лимфоцитов в ключевой момент развития реакции течение хронической РТПХ может направляться по двум оппозитным вариантам: Th1-зависимой иммунопатологии (группа nonlupus, клинически мыши без поражения почек) и Th2зависимой иммунопатологии (группа lupus, клинически мыши с поражением почек – иммунокомплексным гломерулонефритом – ИКГ) (Сафронова, 2001; Кудаева, 1993). По данным И.В. Сафроновой (2001), развитие ИКГ у самокреципиентов (при переносе клеток селезенки от самокдоноров) и появление протеинурии зависят от количества введенных клеток (частота возникновения мышей lupus составляет 45% при внутривенном переносе 100-120 х 106 клеток селезенки; частота возникновения мышей lupus составляет 60% при внутривенном переносе 130-150 х 106 клеток. Добавление к клеткам самок-доноров клеток от самцов резко снижает частоту развития ИКГ. Подобный эффект оказывает экзогенное введение самкам тестостерона-
деканоата (Van Greinsven et al., 1997).
Имеются данные, что перенос в полуаллогенной модели DBA/2->BDF1 лимфоидных клеток реципиентам-самцам не приводил к развитию аутоиммунного гломерулонефрита; введение андрогенов снижало уровень протеинурии и у ре- ципиентов-самок. Добавление гонадэктомированным самцам эстрогенов не приводило к появлению протеинурии и
66
развитию нефрита. Данные опыты проводились на гибридах
(С57Вl/10хDBA/2)F1 В10D2F1 (Van Greinsven et al., 1997).
Вопрос о возможности проявления РТПХ-индуцированного развития иммунопатологии у самцов В6D2F1 остается неясным.
В связи с этим представляло интерес изучить роль тестостерона в возникновении иммунокомплексного гломерулонефрита на самцах-гибридах (С57Вl/6хDBA/2)F1 В6D2F1. Во всех опытах гонадэктомированным и интактным самцам переносили внутривенно 150·106 клеток селезенки от самокдоноров.
5.1.Частота развития люпус-нефрита
уинтактных и орхидэктомированных животных
Степень выраженности такого поражения почек, как гломерулонефрит, коррелирует с уровнем протеинурии; при этом наиболее характерные для иммунокомплексного гломерулонефрита изменения почечной ткани проявляются при протеинурии более 3 г/л. В наших опытах развитие иммунокомлексного гломерулонефита наблюдалось всегда только у части животных. Основным диагностическим критерием развития гломерулонефрита считается стойкое появление белка в моче более 3 г/л при опеределении не менее 3 раз подряд с интервалом в неделю. Основываясь на концентрации белка в моче, мы формировали группы животных со стойкой протеинурией (группа lupus) и без протеинурии
(группа nonlupus).
В ходе исследования было определено, что аутоиммунный гломерулонефрит с Th2-зависимым вариантом хронической РТПХ (группа lupus) у интактных самцов при переносе клеток селезенки от самок развивался в 72,4% случаев
(рис. 12).
67
Рис. 12. Частота развития lupus-нефрита после индукции хронической РТПХ у интактных животных
В первой серии опытов индукцию РТПХ у самцов проводили на 5-й неделе после кастрации – сроке максимального увеличения массы тимуса.
Как видно из данных рис. 13, у гонадэктомированных животных после трансплантации полуаллогенных лимфоидных клеток отмечалось преобладающее влияние Th1ответа (группа nonluрus), в этом случае гломерулонефрит развивался в 38,4% случаев.
Во второй серии опытов, напротив, кастрацию проводили после индукции РТПХ. Как показано на рис. 14, у мышей, которым провели гонадэктомию через неделю после переноса полуаллогенных лимфоидных клеток, иммунокомплексный гломерулонефрит встречается у 33% особей.
Известно, что развитие хронической РТПХ может идти в направлении того или иного варианта (Th1 или Th2), для чего используются различные препараты: гормон сетчатой доли надпочечников дегидроэпиандростерон сульфат (DHEA-S) и компонент клеточной бактериальной стенки мурамилдипептид, обладающие, согласно литературным
68
Рис. 13. Частота развития lupus-нефрита после индукции хронической РТПХ у гонадэктомированных животных
Рис. 14. Частота развития lupus-нефрита после индукции хронической РТПХ у гонадэктомированных животных (операция проведена через 7 дней после РТПХ)
данным, способностью приводить к девиации иммунного ответа в Th1- и Th2-сторону соответственно (Rook et al.,1994; Сафронова, 2001; Кудаева, 2005; Ткачев, 2009).
Мурамилдипептид увеличивает относительное количество самок B6D2F1 с аутоиммунным гломерулонефритом и, следовательно, на модели хронической РТПХ способствует Th2-поляризации иммунных реакций (Ткачев, 2009). В ли-
69
тературе недостаточно представлено данных о влиянии MDP на течение хронической РТПХ у самцов B6D2F1.
Для модуляции развития хронической РТПХ у самцов в сторону Th2-варианта был использован компонент клеточной бактериальной стенки мурамилдипептид.
Введение МDP, который стимулирует выработку провоспалительных цитокинов, в момент индукции РТПХ на 5- й неделе после кастрации увеличивает число животных с ИКГ с 38 до 60% (см. рис. 13, 15).
Рис. 15. Влияние MDP на частоту развития lupus-нефрита после индукции хронической РТПХ у гонадэктомированных животных
Бактериальные антигены обладают адъювантным эффектом в развитии аутоиммунного заболевания (Lane et al.,1991; Esquivel et al., 1977) и опосредствуется этот эффект отчасти повышением уровней провоспалительных цитокинов (Aderem et al., 2000). Так, билатеральная гонадэктомия приводит к повышению ЛПС-зависимой секреции ФНОα. Терапия тестостероном в полной мере отменяла повышение ЛПС-индуцированного высвобождения ФНОα у гона-
70