Бактерицидные свойства фагоцитов крови при сочетанной и ожоговой травмах. Учебное пособие

Таким образом, экспрессия рецепторов на мембране НГ и их реорганизация не только отражает процессы, происходящие в течение жизненного цикла клетки, но и позволяет оценить их функциональное состояние.

Многими авторами обсуждается концепция активации нейтрофилов как двухступенчатого процесса (Thelen М. et al., 1993; Doerfler M.E et al., 1994; Coffer et al., 1998). Сначала нейтрофилы взаимодействуют с агентами, которые не активируют клетку, а переводят ее в состояние готовности к ответу. Затем уже подготовленный нейтрофил получает соответствующий стимул, что приводит его к полностью активированному состоянию. Процесс, при котором предварительная обработка клетки агентом приводит к последующему усилению ответа на активацию, называют праймированием (от англ. «priming» - подготовка). Праймирование нейтрофилов формируется под влиянием цитокинов, хемотаксических факторов, осуществляющих регуляцию функций клеток через рецепторы, принадлежащие к разным семействам. В зависимости от рецептора, через который действует праймирующий агент, могут реализоваться разные механизмы праймирования нейтрофилов: изменения в уровне экспрессии адгезивных молекул на поверхности клетки, освобождение содержимого гранул, полимеризация актина, фосфорилирование, синтез белка de novo, модуляция Са2+, активация фосфолипаз, образование биоактивных липидов. Показано, что при праймировании активность различных протеинкиназ, в том числе

MAPKs (англ. mitogen-activated protein kinases - митоген-активируемых протеинкиназ) и тирозиновых киназ может увеличиваться в несколько раз

(McLeish et al., 1998).

Известно, что активация нейтрофилов бактериальным липополисахаридом (ЛПС), основным рецептором которого на НГ считается гликозилфосфатидилинозитол-связанный гликопротеин (CD14) (Ulevitch R.J., Tobias P.S., 1995), сопровождается усилением респираторного взрыва. Резкое увеличение потребления кислорода фагоцитирующей клеткой называется "респираторным взрывом" (Владимиров Ю.А., 1991).

12

Праймирование оксидазной активности нейтрофилов реализуется через активацию фосфолипаз, протеинкиназ и зависит от метаболизма глюкозы.

1.3.Факторы бактерицидности фагоцитов крови

Важнейшим проявлением ранней защиты от повреждения и сопутствующих антигенов является активация клеток врожденного иммунитета - моноцитов, нейтрофильных гранулоцитов, тромбоцитов, натуральных киллеров, обеспечивающих внутри- и внеклеточный киллинг микроорганизмов и измененных клеток организма. Нейтрофилы участвуют в воспалительных реакциях не только как фагоциты, но и как клетки, выделяющие различные гуморальные факторы (эластазу, катепсин, азуроцидин, антимикробные пептиды и др.) (Gudmundsson G.H., 1999).

Одними из основных факторов бактерицидности фагоцитов являются активные формы кислорода, азота и галогенов, активация миелопероксидазы (Молдогазиева Н.Т. с соавт., 2020).

1.3.1. Окислительный метаболизм как фактор бактерицидности

Базовый уровень продукции активных форм кислорода обеспечивается внутриклеточными энергетическими запасами, поступлением глюкозы из внеклеточной среды и зависит от концентрации кальция в цитозоле (Миллер А.В., 2004). Активация кислородзависимых бактерицидных механизмов происходит с участием НАДФ-оксидазы, образованием супероксидного аниона и преобразования его с помощью супероксиддисмутазы в пероксид водорода. Нейтрофильные гранулоциты и моноциты, активированные бактериальными антигенами и медиаторами воспаления, изменяют окислительный метаболизм, что приводит к резкому увеличению поглощения О2, продукции Н2О2, а также катаболизму глюкозы через гексозомонофосфатный шунт (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Владимиров Ю.А., Азизова О.А., 1991; Зенков Н.К. и соавт., 2001; Sarah M., Bors W., 1989). Функционально супероксидный радикал служит для киллинга микроорганизмов, но является одновременно токсичным для самих фагоцитирующих клеток (Арутюнян А.В. с соавт., 2000). Фагоциты содержат энзим супероксиддисмутазу, которая защищает их от повреждающего действияя супероксидного радикала.

Бактерицидное действие в макрофагах также оказывает оксид азота (NO), который образуется под действием фермента NO-синтазы из аргинина. Активность NO-синтазы в макрофагах заметно повышается при фагоцитозе в присутствии γ-интерферона и туморнекротизирующего фактора. Супероксиданион образует с NO соединения, обладающие более сильными бактерицидными свойствами, чем сам NO.

Под действием миелопероксидазы, проникающей в фаголизосому при слиянии фагосомы с лизосомой, из пероксидов в присутствии галогенов

13

(йодидов и хлоридов) образуются дополнительные токсичные окислители - гипойодид и гипохлорит. Все эти молекулы являются сильными окислителями и синергично с активным кислородом оказывают бактерицидное действие. Активные формы кислорода, азота и галогенов инициируют свободнорадикальные реакции, разрушающие липиды клеточных мембран поглощённых фагоцитами бактерий.

Пероксинитрил (ONOO-), оксид азота, диоксид азота, радикал гидроксила вызывают окислительное повреждение белков, нуклеиновых кислот и липидов бактериальных клеток. Оксид азота может непосредственно взаимодействовать с железосерными белками - важнейшими участниками окислительно-восстановительных реакций в клетке. Железосерные кластеры способны принимать или отдавать электроны при участии цепи переноса электронов, ингибируя дыхание и синтез АТФ в бактериях. Белки, содержащие железосерные кластеры, являются эволюционно древними и распространены во всех царствах, включая животных, растения, грибы, бактерии. При взаимодействии NO с О2 образуются нитриты, которые превращаются в нитраты, также обладающие токсическим действием

(Северин Е.С., 2009).

Рисунок 1.

Образование активных форм кислорода фагоцитирующими клетками при респираторном взрыве. Активация NADPH оксидазы, локализованной в мембране клетки, вызывает образование супероксидного аниона. В результате впячивания мембраны супероксид вместе с бактериальной клеткой оказываются в фагосоме. Супероксидный анион генерирует образование других токсичных молекул,

включая Н2О2 и ОН•

Миелопероксидаза, содержащаяся в гранулах фагоцитирующих клеток, секретируется в фагосому, где образует HOCl.

Биоцидную активность фагоцитов крови исследуют, измеряя люминолзависимую хемилюминесценцию (ХЛ) цельной крови, нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов. Резерв окислительного метаболизма клеток оценивают, регистрируя уровень ХЛ, индуцированной различными бактериальными продуктами (токсинами бактерий, компонентами клеточной стенки и др.). Увеличение ХЛ крови является убедительным свидетельством активности воспаления, вызванного

14

бактериальными антигенами. Длительное усиление кислородзависимой бактерицидности активированных полиморфноядерных лейкоцитов, особенно при недостаточном антиоксидантном потенциале клеток крови и тканей, приводит к развитию оксидативного стресса.

1.3.2. Лизоцим

Лизоцим — это протеолитический фермент мурамидаза (от лат. mums

— стенка) с молекулярной массой 14 -16 кДа из класса гидролаз, относится к группе катионных белков с ферментативной активностью. Белок входит в состав азурофильных (первичных) и специфических (вторичных) гранул нейтрофильных гранулоцитов наряду с миелопероксидазой, кислой гидролазой, дефенсинами, лактоферрином и щелочной фосфатазой. Участвует в быстрой и медленной фазах бактериолиза (Ярилин А.А., 2010). Лизоцим обладает бактерицидным и бактериостатическим действием, активирует фагоцитоз и образование секреторного иммуноглобулина А в слизистых оболочках. Механизм действия лизоцима сводится к разрушению гликопротеидов (мурамилдипептида) клеточной стенки как Грам+ так и Грам– бактерий, что ведет к их лизису, способствует фагоцитозу поврежденных клеток.

В организме лизоцим содержится в слизистых оболочках дыхательных путей, полости рта, конъюнктивы глаз, в сыворотке крови, плевральной жидкости, дуоденальном соке, в молоке. Кроме того, лизоцим обнаружен в слюнных железах, в околоушной железе и в их секретах.

Лизоцим устойчив к действию трипсина, но расщепляется пепсином. Оптимум рН действия лизоцима - 5-7. Фермент стабилен в кислой среде, но инактивируется в щелочной. Максимальная активность проявляется при

60°С.

Антимикробный эффект лизоцима значительно усиливается в комбинации с некоторыми антибиотиками. Взаимное усиление антимикробной активности происходит при совместном влиянии лизоцима и полимиксина В на грамотрицательные бактерии, что связано с облегчением доступа мурамидазы к пептидогликановому слою мембраны. Наблюдаются синергетический эффект в действии лизоцима с некоторыми антибиотиками в отношении высокоустойчивых к антибиотикам бактерий: E.coli ML-35p (с гентамицином) и MRSA ATCC 33591 (с гентамицином, оксациллином и полимиксином В) и других грамположительных микрорганизмов (Жаркова М.С., 2016). Комплексный препарат лизоцима с метициллином эффективно действует на золотистый стафилококк.

Помимо антимикробного действия, фермент обладает регенерирующими и обезболивающими свойствами. Анальгезирующие свойства лизоцима отмечены при лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. При лечении ожогов с помощью лизоцима наблюдалось быстрое очищение тканей от некроза, стимуляция образования

15

грануляций и эпителизации ожоговых ран (Инструкция по применению, утвержденная Фармакологическим комитетом Минздрава СССР 29 марта 1991г. Справочник лекарств 2010-2011). Необходимо отметить противовоспалительное действие лизоцима (Chung J. et al., 2016). Лизоцим способствует уменьшению проницаемости сосудистой стенки, снижению активации воспалительных биомаркеров, в том числе ТНФ и ИЛ-6. Этот фермент нашел широкое применение в терапии заболеваний уха, горла и носа и бронхолегочной системы, патологии женской половой сферы

1.3.3. Эластаза нейтрофилов

Эластаза - основная сериновая протеиназа человека, присутствующая главным образом в азурофильных гранулах нейтрофилов. Этот фермент способен расщеплять широкий спектр субстратов экстрацеллюлярного матрикса, включая эластин, протеогликаны, коллаген, фибронектин, фибрин. Активность эластазы контролируется ингибиторами сериновых протеиназ, которые присутствуют во внеклеточной жидкости. При воспалении высвобождение эластазы из клеток сопровождается быстрой инактивацией её ингибиторными макроглобулинами с образованием комплексов «эластаза – ингибитор».

Продолжительная секреция эластазы в очагах воспаления может вызывать серьезные повреждения тканей. Считается, что эта протеиназа играет важную роль в развитии разнообразных хронических воспалительных заболеваний, включая эмфизему легких, артриты, нефриты и некоторые заболевания кожи. Нормальное содержание эластазы в плазме крови составляет ~55 нг/мл (29–86 нг/мл). (www.biochemmack.ru). Увеличение концентрации эластазы может быть проявлением острой воспалительной реакции после механической и ожоговой травмы (Яровая Г.А. 2006; Доценко В.Л. и соавт., 2001; Галкин А.А., Демидова В.С., 2015). При развитии посттравматических септических осложнений концентрация эластазы в крови и тканях может многократно возрастать. Увеличение концентрации эластазы рассматривают как предиктор летального исхода у септических больных (Kaufman T. et al., 2017).

1.3.4. Лактоферрин

Лактоферрин - белок из семейства трансферринов, является глобулярным гликопротеином с молекулярной массой около 80 кДа. Было показано, что этот белок содержится не только в молоке, но и в плазме крови и в нейтрофильных гранулоцитах. Лактоферрин является одним из основных белков практически всех экзокринных секретов млекопитающих, таких как слюна, желчь, слёзная жидкость, секреты носовых желез, поджелудочной железы (Birgens H., 1985). Главные биологические функции белка — это связывание и транспорт ионов железа. Лактоферрин связывает трехвалентное железо - продукт ферроксидазной активности церулоплазмина (Назаров П.Г.,

16

2001). При связывании ионов железа образуется вещество красного цвета, что определило первоначальное обозначение лактоферрина как «красного белка»

(Ярилин А.А., 2010).

Лактоферрин является белком острой фазы воспаления (Белоконева К.П., 2016) и принимает участие в реализации механизмов врожденного иммунитета. Наиболее изученным является механизм антибактериальной активности лактоферрина. Антибактериальные свойства белка обусловлены способностью связывать железо плазмы и других биологических сред. В связи с этим бактериальная микрофлора испытывает дефицит железа, необходимый для её роста и жизнедеятельности (Zakharova E.T et al., 2000; Farnaud S., Evans R.W. 2003). Бактерицидные свойства белка также обусловлены наличием лактоферриновых рецепторов на клеточной поверхности микроорганизмов. За связывание лактоферриновых рецепторов бактериальной стенкой ответственен лактоферрицин - пептид, расположенный на N-конце молекулы лактоферрина (Kuwata H. et al., 1998).

Показано, что лактоферрин связывает ЛПС бактериальных стенок, а входящая в состав белка окисленная форма железа инициирует их перекисное окисление. Это приводит к изменению проницаемости мембраны и последующему лизису клеток (Farnaud S., Evans R.W., 2003).

Также, в организме лактоферрин связывается с церулоплазмином в молярном соотношении 2:1. Естественные комплексы лактоферрина и церулоплазмина содержатся в норме в молоке, слезной жидкости, в слюне, в семенной жидкости.

1.3.5. Церулоплазмин

Церулоплазмин – гликопротеин плазмы, относится к транспортным белкам и связывает медь. Церулоплазмин синтезируется в гепатоцитах; синтез его регулируется ионами меди. Церулоплазмин называют «голубым белком», так как зрелый продукт - это белок голубого цвета, который появляется в сыворотке и находится во фракции α2-глобулинов как гликопротеин с молекулярной массой около 132 кДа.

Известны четыре его функции: транспорт меди и поддержание ее баланса в организме, ферроксидазная, аминоксидазная и супероксиддисмутазная активность. 95% меди плазмы находится в связанном состоянии с церулоплазмином. При связывании меди в молекуле церулоплазмина возникают радикалы и индуцируется каскад передачи электронов, который ведет к повышению каталитической активности белка. Церулоплазмин связывает также ионы серебра, образуя комплекс, не обладающий оксидазной активностью (Назаров П.Г., 2001).

Ферроксидазная каталитическая активность церулоплазмина связана с окислением вредного для организма двухвалентного железа до безопасного трехвалентного и поддержанием концентрации ионов Fe+2 на низком уровне. Этот процесс обусловливает антимикробный эффект церулоплазмина. В

17

очаге воспаления усиленно выделяется содержимое секреторных гранул лейкоцитов, в том числе лактоферрин. Повышенное содержание церулоплазмина способствует усилению передачи трехвалентного железа лактоферрину и препятствует его использованию патогенной микрофлорой (Zakharova E. T. et al., 2000). Медиаторы воспаления, в частности ИЛ-6, усиливают синтез церулоплазмина (Banks R.E. et al., 1995).

Церулоплазмин обладает заметной антиоксидантной активностью: участвует в нейтрализации перекисей, дисмутирует супероксидные радикалы, препятствуя перекисному окислению липидов (Закирова А.Н. и

соавт., 1994).

Концентрация церулоплазмина в крови здорового человека составляет 0,3-0,6 г/л. Повышается при аутоиммунных, инфекционных, опухолевых заболеваниях, в острой фазе стресса. Дефицит церулоплазмина наблюдается при гепатолентикулярной дегенерации (болезни Вильсона-Коновалова).

1.3.6. Дефенсины

Широким спектром биологической активности обладают антимикробные пептиды нейтрофильных гранулоцитов - α-дефенcины, HNP (Ganz T., 2002). Дефенсины являются катионными пептидами, которые присутствуют в азурофильных гранулах нейтрофилов и содержат около 30 аминокислотных остатков, богатых цистеином и аргинином. Они составляют от 30 до 50% всех белков гранул. В зависимости от расположения дисульфидных связей остатков цистеина выделяют α-, β-, θ – дефенcины. У человека описано 6 разновидностей α-дефенcинов. Дефенcины группы α - важный компонент фаголизосом нейтрофилов, на долю которых приходится 5-7% общего белка нейтрофилов. Нейтрофилы содержат 5 разновидностей α- дефенcинов. В эпителиальных клетках слизистой оболочки кишечника присутствуют 2 разновидности α-дефенcинов. Альфа-дефенcины HNP 1-3 синтезируются только нейтрофилами, поэтому считаются специфическими маркерами этих клеток. У человека известны также 2 разновидности β- дефенcинов, локализованных в эпителии дыхательных путей и слизистой оболочке тонкой кишки, но не в лейкоцитах (ЯрилинА.А., 2010).

Биосинтез дефенcинов может быть инициирован как провоспалительными цитокинами, так и антигенными детерминантами самих микроорганизмов (Акалович С.Т. и соавт., 2005). Продукция NHP 1-3 происходит на этапе костномозгового созревания нейтрофильных гранулоцитов на стадии промиелоцитов (Mikkel F. et al., 2005).

Имеются сведения об изменении количества нейтрофильных гранулоцитов, содержащих HNP1-3, при различных заболеваниях. Было отмечено повышение содержания α-дефенсинов при воспалительных заболеваниях (пиелонефриты, эмпиемы, сепсис, неонатальные пневмонии, гастриты) (Будихина А.С., Пинегин Б.В., 2008; Багненко С.Ф. и соавт., 2012), а также при механической и термической травме (Малышев, М.Е. и соавт.,

18

2015; Пивоварова Л.П. и соавт., 2017). Высокий уровень растворимых дефенсинов - до 10 мг/мл и выше - обнаружен при сепсисе (Panyutich A.V., 1993).

Увеличение продукции дефенсинов отмечено при диффузном панбронхите, псориазе, красном плоском лишае. Снижение концентрации HNP1-3 наблюдали при атопическом дерматите, ВИЧ-инфекции (Будихина А.С., Пинегин Б.В., 2008).

При стимуляции нейтрофилов дефенсины выделяются во внеклеточное пространство и накапливаются в биологических жидкостях организма. Дефенсины вызывают образование ионных каналов в мембране микробной клетки сразу же после образования фаголизосомы, ингибируют синтез бактериальных протеинов и нуклеиновых кислот и тем самым способствуют её уничтожению. Обладая цитотоксической активностью, эти катионные белки способны оказывать не только защитное, но и повреждающее действие на организм хозяина (Klotman M. E., 2006; Yang D., 2004).

Как показали проведенные ранее исследования, дефенсины являются мощными хемоаттрактантами для моноцитов, активируют миграцию и фагоцитоз нейтрофилов и макрофагов, увеличивают местную проницаемость сосудов (Кокряков В.Н. и соавт., 2006; Comstedt P., 2009).

Описан противовирусный эффект дефенсинов в отношении оболочечных вирусов, например, вирусов простого герпеса, в меньшей степени - цитомегаловируса, связанный с влиянием на репликацию вирусов

(Daher K., 1986).

Бактерицидные белки дефенсины относится к аларминам - особой группе веществ, которые запускают эндогенные сигналы опасности. У здоровых лиц в плазме очень низкий уровень дефенсинов (от неопределяемых величин до 100 нг/мл), однако при бактериемии и тяжелом сепсисе содержание этих пептидов может возрастать до 1000 нг/мл и выше.

Установлено, что пациенты, у которых отсутствуют α-дефенсины (синдромом недостаточности специфических гранул), страдают частыми и тяжелыми бактериальными инфекциями (Ковальчук Л.В. и соавт., 2004.).

При определении содержания внутриклеточных факторов бактерицидности (дефенсинов, лизоцима, лактоферрина, активных форм кислорода, эластазы) очень важно соблюдать правила забора крови и доставки проб в лабораторию (т.е. правила преаналитического этапа исследования), т. к. активация нейтрофилов во время свертывания крови или при длительном хранении проб с антикоагулянтом приводят к высвобождению антимикробных пептидов.

2. ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА БАКТЕРИЦИДНЫЕ СВОЙСТВА ФАГОЦИТОВ КРОВИ

Нарушения фагоцитоза у взрослых людей могут быть первичными и вторичными. Первичные нарушения (изолированные врожденные нарушения

19

фагоцитоза) встречаются редко. К их числу относятся хроническая гранулематозная болезнь (1 случай на 100 000 населения), синдром нарушения экспрессии адгезионных рецепторов (β2-интегринов) (1 на 500 000 населения), синдром гипериммуноглобулинемии Е и гиперэозинофилии в сочетании с нарушением хемотаксиса нейтрофильных гранулоцитов (Гэллин Д.И., 1993).

Вторичные нарушения фагоцитоза чаще всего связаны с влиянием на функциональные характеристики фагоцитов различных лекарственных препаратов. Известно, что препараты, действие которых направлено на купирование воспалительных процессов или предупреждение гиперкоагуляции и тромбообразования, реализуют эти эффекты посредством ограничения активности рецепторов внутриклеточных мембран и наружной клеточной мембраны (Гэллин Д.И., 1993). К их числу относятся цитостатики, нестероидные противовоспалительные препараты, глюкокортикоиды, моноклональные антитела к медиаторам воспаления и их рецепторам, применяющиеся при лечении хронических воспалительных и аутоиммунных заболеваний. Длительное применение препаратов, обладающих дезагрегантным действием, приводит к снижению способности клеток к межклеточному взаимодействию как этапу распознавания и связывания инфекционных антигенов, адгезии к эндотелию и эмиграции в очаг инфекции, способности к проведению сигнала активации в клетку для выполнения функций противомикробной защиты.

3.БАКТЕРИЦИДНЫЕ СВОЙСТВА ФАГОЦИТОВ КРОВИ

УПОСТРАДАВШИХ С СОЧЕТАННОЙ И ОЖОГОВОЙ ТРАВМАМИ

Нарушение противоинфекционной резистентности после экстремального воздействия, в частности при сочетанной механической (Селезнев С.А. и соавт., 2004; Галкин, А.А., Демидова В.С., 2015) и ожоговой (Пивоварова Л.П. и соавт., 2005; Шень Н.П., 2011) травмах, рассматривается как одна из наиболее важных причин развития инфекционных осложнений при травматической и ожоговой болезни. Антибактериальная защита при тяжелых травмах и ожогах в значительной степени обусловлена активацией нейтрофильных гранулоцитов и моноцитов крови и эффективностью различных этапов миелопоэза у пострадавших (Ayala A. et al., 2003).

В ГБУ СПб НИИ скорой помощи им. И.И.Джанелидзе были проведены исследования факторов бактерицидности фагоцитов крови у пациентов с сочетанной травмой и тяжелой термической травмами. Тяжесть сочетанной травмы определяли по сумме баллов шокогенности травмы (Цибину Ю.Н., 1980) (19,4; 16; 22) и баллов по шкале ISS (Baker S. P. et al.,1974) (23; 20,5;29).

Тяжесть ожоговой травмы оценивали по величине индекса Франка (H.Frank, 1960) (79,0; 54,3; 92,3). Исследования функциональной активности фагоцитов крови проводили при поступлении, на 1, 3, 10 сутки.

20

3.1. Содержание в крови дефенсин-положительных нейтрофильных гранулоцитов при сочетанной и ожоговой травмах

Упострадавших с СТ содержание дефенсин+НГ (Def+ НГ) при поступлении умеренно возрастало по сравнению с нормой, а в последующие сутки было различным в зависимости от характера течения

посттравматического периода. Так, при развитии тяжелого сепсиса количество дефенсин+НГ возрастало в 1,5-2 раза по сравнению с исходным

уровнем, а при летальном исходе – в 3 и более раз. Выявлена положительная корреляционная зависимость между содержанием дефенсин+НГ и тяжестью

повреждений у пострадавших по БШТ (r=0,366, р<0,05) и ISS (r=0,564, р<0,05). Также, количество дефенсин+НГ коррелировало с концентрацией ИЛ-6 в сыворотке крови (r=0,538, P<0,05) и уровнем оксидативной активности полинуклеаров, оцененной по уровню их хемилюминесценции

(r=0,325, р<0,05).

Упациентов с тяжелой ОжТ содержание Def+ НГ многократно возрастало (в 8,6 раза) уже в момент поступления и плавно снижалось до уровня нормы к 3 суткам наблюдения. Как и у пациентов с сочетанной

травмой, отмечена положительная корреляция между содержанием дефенсин+НГ и хемилюминесценцией полинуклеаров крови (r=0,322, р<0,05) (рис. 2).

Рисунок 2. Содержание Def+ НГ (·109/л) у пострадавших с сочетанной и ожоговой травмами

Полученные данные свидетельствуют о немедленной мобилизации бактерицидного потенциала нейтрофильных гранулоцитов при СТ и ОжТ, основанного на секреции эндогенных антимикробных пептидов – дефенсинов - и продукции активных форм кислорода.