Кто придумал fish метод?

Метод флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) был разработан Джозефом Галлом и Мэри-Лу Пардью в 1969 году. Исследователи описали новый подход к окрашиванию препаратов, основанный на комплементарном связывании нуклеотидного зонда, меченного радиоактивной меткой, со специфическими мишенями — последовательностями нуклеиновых кислот внутриклеточных структур.

Со временем метод совершенствовался, сфера применения расширялась. Его использовали для изучения эволюции хромосом, анализа хромосом в целом, в том числе для диагностики различных онкологических заболеваний, а также метод нашёл широкое применение в цитогенетических исследованиях.

Окончательно метод был введён в бактериологию в 1988 году, когда были использованы радиоактивно меченные рРНК-направленные олигонуклеотидные зонды для микроскопического обнаружения бактерий.

Что такое FISH метод?

FISH-метод (или же флуоресцентная гибридизация in situ) — цитогенетический метод, который применяют для детекции и определения положения специфической последовательности ДНК на метафазных хромосомах или в интерфазных ядрах in situ.

In situ с латинского означает «на месте». Это термин, обозначающий наблюдение феномена точно в том месте, где он происходит (не извлекая его и не перемещая). К примеру, изучение экспрессии генов внутри клетки на срезе ткани под микроскопом.

Что является материалом исследования?

Материалом для исследования являются:

• Кровь

• костный мозг

• биопсия опухоли

• плацента

• эмбриональные ткани

• амниотическая жидкость.

Образцы для исследования должны доставляться в лабораторию в свежем виде. Препараты (слайды) готовятся непосредственно из образцов ткани или после их культивирования. Могут использоваться как метафазные, так и интерфазные препараты клеток. Меченные флуоресцентными метками специфические ДНК-зонды гибридизуюся с хромосомной ДНК, причем можно одновременно использовать множественные зонды к разным локусам.

Что такое ДНК-зонды и какие виды существуют?

При флуоресцентной гибридизации in situ используют ДНК-зонды (ДНК-пробы), которые связываются с комплементарными мишенями в образце. В состав ДНК-зондов входят нуклеозиды, меченные флюорофорами (прямое мечение) или такими конъюгатами, как биотин или дигоксигенин (непрямое мечение). При прямом мечении связавшийся с мишенью ДНК-зонд можно наблюдать при помощи флуоресцентного микроскопа сразу по завершении гибридизации. В случае непрямого мечения необходима дополнительная процедура окрашивания, в ходе которой биотин выявляют при помощи флуоресцентно-меченного авидина или стрептавидина (стрептавидин обладает такими же способностями связывать биотин, как и авидин, но в отличие от него он не имеет заряда в нейтральной среде, не связывается с эндогенным ферментами и намного меньше с эндогенным биотином, замена авидина на стрептавидин позволила резко уменьшить фоновое окрашивание и повысить чувствительность метода приблизительно в 8 раз), а дигоксигенин — при помощи флюоресцентно-меченых антител. Хотя непрямой вариант мечения ДНК-проб требует дополнительных реактивов и временных затрат, этот способ позволяет добиться обычно более высокого уровня сигнала за счёт присутствия на молекуле антитела или авидина 3—4 молекул флюорохрома. Кроме того, в случае непрямого мечения возможно каскадное усиление сигнала.