Условия хранения и культивирования вирусов в лаборатории

Для всех вирусологических лабораторий установлен единый порядок обращения с вирусами, предусматривающий правила их хранения, регистрации, передачи внутри лаборатории и за ее пределы.

В каждой лаборатории приказом директора определяют лицо, ответственное за учет культур, а также за соблюдение порядка их хранения и уничтожения. Штаммы вирусов регистрируют в специальном журнале, где отмечают их расходование, автоклавирование и пр. Отдельные вируссодержащие материалы в пробирках, флаконах и других сосудах непременно снабжают этикетками с указанием наименования вируса, штамма, даты получения, номера пассажа, объема и других сведений.

Штаммы вирусов хранят в холодильнике под замком с пломбой или печатью. Выделенные изоляты, как и штаммы стандартных вирусов, необходимые для сравнения и серологических исследований, следует хранить в условиях, обеспечивающих им максимально длительную жизнеспособность. При рН среды 7,0 - 7,4 и внесении в нее определенных добавок вирус можно хранить при 4°С в течение нескольких недель, а некоторые виды - в течение года. Применяют следующие методы консервации вирусов:

• при хранении плотного вирусного материала (кусочки органов или тканей) часто используют глицерин (50%-ный раствор);

• чаще всего вирусы хранят в холодильниках, обеспечивающих температуру -20, -30, -70 °С. Размораживать вирусы можно как при комнатной температуре, так и в водяной бане при температуре +37 °С. Во избежание частого замораживания и оттаивания одного и того же вируссодержащего материала необходимо хранить его маленькими порциями, достаточными для одноразового титрования или использования.

• лиофилизация, т. е. высушивание в замороженном состоянии в условиях вакуума. Для лиофилизации необходимы соответствующая аппаратура, определенный (в зависимости от вида вируса) наполнитель и тщательное выполнение процедуры сушки. В лиофилизированном виде вирусы могут храниться несколько лет.

Культивирование вирусов:

• на восприимчивых домашних и лабораторных животных (биопроба) (телята, мыши, белые крысы, кролики, морские свинки, хомяки, цыплята)

• на куриных эмбрионах (7-12 дней). Заражать могут на ХАО, в аллантоисную полость, в желточный мешок, в амнион, в тело эмбриона и в сосуды.

• в культурах клеток

Виды взаимодействия вирусов с клетками

Острое взаимодействие (продуктивное). Внедрившийся вирус активно размножается, происходит взрывной выход, и клетка гибнет.  Под микроскопом заметно цитопатогенное действие вируса. Клетка округляется, появляется зернистость

Латентное – при хроническом течении заболевания. Вирус постепенно накапливается в клетке и выходит, не разрушая ее

Онкогенное взаимодействие.  Вирусная НК встраивается в геном клетки и получается дополнительный генетический материал. Меняется набор хромосом, и клетка трансформируется из доброкачественной в злокачественную. 

Вирогения. Внедрившийся вирус встраивается в геном клетки и как бы исчезает (т. е. вирус находится в состоянии провируса). При вирогении не происходит автономной репродукции вируса. При делении клетки на дочерние НК вируса реплицируется совместно с ДНК клетки–хозяина. Таким образом идет передача вирусного генетического материала.