Цель, сущность, техника постановки и учет реакции гемагглютинации (рга).

РГА – это не серологическая реакция.

Цель: выяснение является ли вирус гемагглютинирующим; определение титра вируса.

Компоненты: АГ и эритроциты.

Сущность метода состоит в том, что у гемагглютинирующих вирусов имеется фермент, а у эритроцитов имеются рецепторы той же природы и при взаимодействии вируса с эритроцитами наблюдается агглютинация последних в виде зонтика, в ином случаем агглютинации не происходит и эритроциты оседают на дно в виде пуговки.

Существует 2 варианта постановки:

• На предметное стекло наносят каплю вируса и каплю эритроцитов, перемешивают и если вирус гемагглютинирующий, то образуются хлопья. Это качественная реакция.

• Используют специальные планшетки с лунками. В лунки вносят 0,2 мл физраствора и в первую лунку 0,2 мл вируссодержащего материала и делаем ряд последовательных 2-кратных разведений. Потом вносим в каждую лунку по 0,2 мл эритроцитов и оставляем на контакт 20-30 минут.

За титр вируса принимают то его максимальное разведение, которое вызывает агглютинацию 50% эритроцитов (наклоняем планшетку под углом 45 градусов и, где зонтики стекает как слёзка. Это принимаем за 1 ГАЕ).

Цель, сущность, техника постановки и учет реакции задержки (торможения) гемагглютинации (рзга, ртга).

РЗГА – серологическая реакция.

Цель: выявление и идентификация вируса, определение титра АТ в сыворотке крови и динамика их нарастания.

Компоненты: АГ (неизвестный – определяем титр в РГА/известный; берём 4 ГАЕ), сыворотка (известная положительная или отрицательная/неизвестная), 1% эритроциты.

Постановка:

В лунках делаем ряд последовательных 2-кратных разведений сыворотки в физрастворе (0,2 мл физраствора + 0,2 сыворотки). Количество разведений зависит от предпологаемого титра сыворотки. В каждую лунку вносят предварительно оттитрованный вирус 4 ГАЕ в объеме 0,2 мл. Оставляем на контакт в течение 20-30 минут. После чего в каждую лунку вносят по 0,4 мл эритроцитов.

Параллельно ставят контроли:

Контроль с известной + сывороткой и вирусом. Сыворотка не должна давать агглютинации;

Контроль и с нормальной сывороткой и вирусом. Агг­лютинация должна быть;

На самоагглютинацию эритроцитов – эритроциты и физраствор. Агглюти­нации не должно быть.

В положительных случаях при учете РЗГА будет отсутствовать аг­глютинация эритроцитов, в то время как этот же вирус без добавления сыворотки и с нормальной сывороткой будет вызывать четкую гемаг­глютинацию. 

Данную реакцию ставят при диагностике чумы и гепатита плотоядных, оспе, гриппе и др.

Цель, сущность, техника постановки и учет реакции непрямой гемагглютинации (рнга).

Целый ряд вирусов способны адсорбироваться на эритроцитах и при этом не вызывать их агглютинацию. Если же к таким эритроци­там, сенсибилизированным антигеном, т. е. несущим на себе адсорби­рованный вирус, добавить иммунную специфическую сыворотку про­исходит агглютинация эритроцитов с помощью антител иммунной сы­воротки.

Компоненты реакции: АГенный эритроцитарный диагностикум (АГЭД), исследуемая сыворотка.

Цель реакции: определение титра АТ и динамики их нарастания, выявление вируса в патмат (тогда используют эритроцитарный диагностикум с адсорбированными антителами)

АГЭД вырабатывают на биокомбинатах. Используют эритроциты барана, быка или человека (1 группа), их обрабатывают формалином, потом танинном, а затем сенсибилизируют с вирусом. Оставляют на контакт на 2 ч. АГЭД разливают по флаконам и формируют наборы, в состав которых входит + и – сыворотка крови.

В лунках полистироловых планшетов готовят ряд последовательных разведений сыворотки. Затем во все лунки добавляют АГЭД и ставят в термостат на контак 20-30 минут. Параллельно ставятся контроли с положительной и отрицательной сывороткой.

В положительном случае эритроциты оседают в виде зонтика, в отрицательном в виде пуговки.