Понятие о культурах клеток. Назначение культур клеток в вирусологии, условия их приготовления.

Культурой ткани называют кусочки ткани млекопитающих и воз­никающие из них участки клеточного роста, находящиеся в специаль­ной питательной среде вне организма. Культурой клеток принято называть систему более или менее однородных клеток, полученных из ткани какого-либо органа и выращенных на стенке пробирки, фла­кона или матраца.

Цели заражения:

• Выделение вируса из патмат

• Поддержание вируса в условиях лаборатории

• Биомодель для наработки вакцин

• Биомодель для постановки РН

• Биомодель для определения титра вируса

Для получения культур ткани очень важно правильно подобрать и подготовить посуду, пробки, питательные (ростовые) и поддержива­ющие среды, солевые растворы.

Требования к посуде: чистота, нейтральность, стерильность.

Примерами сред является среда Хенкса, Игла, 199 и др. Среды могут быть ростовыми (т.е. содержащими сыворотку) и поддерживающими (сыворотки нет или её очень мало).

Среда имеет красный цвет из-за индикатора. В норме среда красная – клетки живы, если жёлтая – клетки погибли, желтая и мутная – бактериальный пророст, малиновая – защелачивание среды.

Первично-трипсинизированные культуры клеток, методы их получения. Оценка клеточного монослоя.

Первично-трипсинизированные культуры клеток относятся к монослойным растущим культурам. В таких культурах клетки находятся в виде 1-ого слоя.

Готовить можно из любых органов и тканей, на чаще всего применяют клетки куриных фибробластов. Куриным эмбрионам возрастом 9 суток удаляют конечности, потрошат и получают кожно-мускульный мешок, который измельчают до гомогенного состояния, отмывают от форменных элементов и помещают в специальную колбочку. В неё же добавляют 0,25% раствор трипсина и магнит. Получившуюся смесь ставят на магнитную мешалку.

Трипсин разъединяет клетки. Через 20-30 минут сливают жидкость и фильтруют, а оставшиеся ткани опять заливают трипсином и ставят на мешалку.

Получившуюся жидкость центрифугируют, чтобы освободить от трипсина. Получившийся осадок разводят ростовой средой.

При помощи камеры Горяева доводят до определенной концентрации. Разливают в посуду и помещают в термостат. Каждый день просматривают под микроскопом. На 3-4 сутки клетки оседают, прикрепляются и начинают размножение. Образуется монослой.

Классификация культур клеток. Этапы получения субкультур

Культуры клеток можно разделить на:

• Переживающие. Клетки в таких культурах живые, но не способны к размножению. Их получают из любых органов и тканей, которые измельчают, отмывают от форменных элементов, заливают специальной питательной средой, в которой клетки находятся во взвешенном состоянии. Например, культура клеток из эпителия КРС для изготовления противоящурной вакцины.

• Растущие. Клетки в таких культурах способны к размножению. Их в свою очередь можно разделить на плазменные и монослойные. Для получения плазменных органы или ткани измельчают в чашку Кореля и размещают кусочки в виде островков, осторожно вносят плазму крови кур и эмбриональный куриный экстракт. Плазма сворачивается и превращается в гель. После чего заливаем получившиеся ростовой средой (и радуемся жизни) и помещаем в термостат. На 2-3 сутки от островков начинают расти в сторону клетки в виде паучков. Монослойные культуры клеток, это те культуры, в которых клетки располагаются в один слой. К ним относятся первично-трипсинизированные, субкультуры, диплоидные и перевиваемые.

Субкультура (вторичная культура клеток). Получается из первично-трипсинизированной культуры тканей. Для этого выросший клеточный монослой снимают со стенки пробирки или матраца путем соскабливания или воздействия раствором версена, затем подвергают трипсинизации для разделения клеток, центрифугируют, надосадоч­ную жидкость сливают, осадок клеточный ресуспензируют, разлива­ют и вновь выращивают в другой посуде и в новой порции питатель­ной среды. В этом случае вырастает вторичная культура (субкультура).