Лабораторные животные, используемые для диагностики вирусных болезней. Подбор и методы заражения (примеры).

Основные виды животных:

• Белые мыши (диагностика бешенства, ящура)

• Белые крысы (диагностика гриппа свиней, болезни Ауески)

• Морские свинки (диагностика бешенства, ящура, чумы плотоядных)

• Кролики (диагностика бешенства, миксоматоза кроликов)

• Цыплята 

Основные цели использования:

• Выделение вируса из патологического материала

• Поддержание вируса в условиях лаборатории

• Изучение патогенеза

• Биомодель для наработки иммунных и гипериммунных сывороток

• Биологическая модель для наработки вакцин

• Биологическая модель для определения титра вируса

• Биологическая модель для постановки реакции нейтрализации

Методы заражения животных:

• Скарофикация

• Внутрикожный метод – оттягиваем складку и вводим

• Подкожный метод – в полость между складкой и мышцами

• Внутримышечный метод - введение в бедренную мышцу, птицам в грудную

• Внутривенный метод – кроликам в ухо, птицам в подкрыльцовую вену, крысам в хвостовую

• Внутрибрюшно – животное на спине, зафиксированно и в наркозе. Вводят справа или слево от белой линии живота.

• Интраназальный метод - введение через нос

• Интероцеребральный метод - введение через отверстие в черепе

Требования к лабораторным животным:

• Чувствительность к конкретному вирусу

• Определенный возраст (молодые и новорожденные животные лучше подходят для большинства вирусов)

• Линейность (полученные путем близкородственного скрещивания)

• Здоровое состояние

После заражения животное обязательно метят, изолируют и наблюдают в течение 12 суток. Если гибель в первые сутки – она считается неспецифичной и не учитывается. После гибели животное необходимо вскрыть: сначала грудную клетку, потом брюшную полость. Ищем отклонения от нормы и отбираем материал.

Назначение куриных эмбрионов (кэ) в вирусологии (примеры). Контроль и подготовка эмбрионов к заражению.

Куриный эмбрион - это оплодотворенное куриное яйцо, в котором развивается зародыш (эмбрион). 

Цели заражения куриных эмбрионов:

• Выделение вируса из патмат

• Поддержание вируса в условиях лаборатории

• Биомодель для наработки вакцин

• Биомодель для постановки РН

• Биомодель для определения титра вируса.

Инкубационное яйцо должно соответствовать следующим требованиям:

• Должно быть получено из хозяйства благополучного по инфекционным болезням

• Желательно должно быть от птиц белых пород

• Должно быть чистое

• Должно быть оплодотворено.

Яйца помещают в инкубатор, в котором их выдерживают в течение 5-7 суток. В инкубаторе поддерживают определенную температуру (37 гр. по С) и влажность, периодически меняют угол обогрева, а также проветривают. Через 5-7 суток проводят овоскопию и отбирают брак: неоплод, кровь-кольцо, тумак.

Методы заражения эмбрионов (рисунок куриного эмбриона), сбор вируссодержащего материала.

Методы заражения куриных эмбрионов:

На хорионаллантоисную оболочку (ХАО)

В аллантоисную полость

В желточный мешок

В амнион

В тело эмбриона

В сосуды

Последние 2 метода применяются не часто из-за их травматичности.

Заражение на ХАО

1. Удаляют скорлупу в районе пуги, приподнимают подскорлупную оболочку и шприцом вносят вируссодержащий материал. Сверху одевают колпачок, а края парафинируют.

2. Под контролем овоскопа обводят границы пуги. При помощи скальпеля вырезают треугольное отверстие на границе пуги и ХАО. Пинцетом приподнимают подскорлупную оболочку и вносят вируссодержащий материал. Отверстие заклеивают стерильным пластырем.

3. Создание искусственной пуги. Под контролем овоскопа яйцо помещают горизонтально верхним предлежанием эмбриона. Находят бессосудистый участок и вырезают окошко в скорлупе. Из пуги отсасывают воздух и образуется искусственная пуга. В ранее вырезанном окошке приподнимают подскорлупную оболочку и вносят вируссодержащий материал на ХАО. Отверстие в скорлупе закрывают лейкопластырем или парафинируют.

В аллантоисную полость:

1. Под контролем овоскопа отмечают границы пуги и вводят вируссодержащий материал на 1-2 мм ниже очерченной линии. Отверстие парафинируют.

2. Под контролем овоскопа яйцо кладут горизонтально верхним предлежанием эмбриона, находят бессосудистый участок и вводят вируссодержащий материал на глубину 1-2 мм. Отверстия парафинируют.

В желточный мешок:

1. В верхней части пуги делают отверстие и под контролем овоскопа вводят вируссодержащий материал под углом 45 гр. в желточный мешок. Отверстие парафинируют.

2. Под контролем овоскопа яйцо кладут горизонтально нижним предлежанием эмбриона и находят бессосудистый участок, куда шприцом вводят вируссодержащий материал на глубину 4-5 мм. Отверстие парафинируют.

В амнион:

Удаляют скорлупу в районе пуги, стерильным пинцетом захватывают амнион и подтягивают к отвертию и шприцом вводят вируссодержащий материал. Отверстие в скор­лупе затем закрывают стерильным стеклянным колпачком и края па­рафинируют.

После заражения эмбрион помещают в термостат и каждый день проводят овоскопию в течение 3-4 суток. Гибель эмбрионов в первые сутки считается неспецифической и не учитывается.

Погибшие эмбрионы помещают в холодильник, а на 5 сутки все оставшиеся живые.

Вскрытие погибших зараженных куриных эмбрионов, или изъятых по истечении срока наблюдения, производится со всеми правилами асептики в стерильных условиях бокса. При вскрытии скорлупу обра­батывают спиртом и обжигают, затем срезают пугу. У вскрытого эмб­риона сначала тщательно отсасывают аллантоисную жидкость, затем пинцетом оттягивают амниотическую оболочку и отсасывают амни­отическую жидкость, затем собирают жел­ток, извлекают оболочки и сам эмбрион. Жидкость, оболочки и сам эмбрион тщательно осматривают на наличие изменений. Амниотическая жидкость в норме совершенно прозрачная, при заражении она мо­жет быть мутная, кровянистая. Характерные изменения, вызванные вирусом, бывают наиболее выраженными на хорионаллантоисной обо­лочке: появляются воспалительные очаги, непрозрачные, круглой формы и кровоизлияния. Кровоизлияния могут быть на теле эмбриона. Весь материал собирают в стерильную посуду.