Устойчивость вирусов к физическим и химическим факторам, консервирование вирусов

Устойчивость вирусов животных, сравнительно хорошо изучена при воздействии внешних факторов: температуры, излучения, ультразвука давления, Рн среды, формалина, органических растворителей фенола и другого. Для защиты от этих воздействий у вирионов имеется белковая оболочка. Различное строение, химический состав белковых оболочек, характер связи между составными частями вирионов обуславливают неодинаковую устойчивость вирусов. В зависимости от этих особенностей 1 и тот же фактор может разрушать одни вирионы полностью другие частично, а на 3 совершенно не оказывать влияние. Например, те вирионы, в оболочках которых нет липидов устойчивы к органическим растворителям, а липидосодержащие вирусы быстро разрушаются при их воздействии.

Если лаборатория рядом, ма­териал отправляют неконсервированным и обычно в термосах со льдом. Если же материал нужно транспортировать далеко, то его обычно кон­сервируют и тщательно упаковывают (особенно, если отправляют по почте или самолетом). Кусочки органов консервируют в 50% стериль­ном глицерине или насыщенном растворе хлористого натра и допол­нительно помещают в термос со льдом, инфекционность сохраняется до одного года. Жидкий материал консерви­руют замораживанием и сохраняют при -20° С (в термосе с сухим льдом). Также применяется метод лиофилизации – процесс высушивания вируссодержащего материала в вакууме из замороженного состояния. Высушенный вирус запаивают в ампулах и в таком состоянии хранят несколько лет при температурном оптимуме 4...18°С.

(Повтор предыдущего вопроса и объединение его со следующим, потому что особо и нечего нового рассказывать. Воть)

Методы консервирования вирусов.

Если лаборатория рядом, ма­териал отправляют неконсервированным и обычно в термосах со льдом. Если же материал нужно транспортировать далеко, то его обычно кон­сервируют и тщательно упаковывают (особенно, если отправляют по почте или самолетом). Кусочки органов консервируют в 50% стериль­ном глицерине или насыщенном растворе хлористого натра и допол­нительно помещают в термос со льдом, инфекционность сохраняется до одного года. Жидкий материал консерви­руют замораживанием и сохраняют при -20° С (в термосе с сухим льдом). Также применяется метод лиофилизации – процесс высушивания вируссодержащего материала в вакууме из замороженного состояния. Высушенный вирус запаивают в ампулах и в таком состоянии хранят несколько лет при температурном оптимуме 4...18°С.

Методы очистки и концентрации вирусов.

Доля вируса в материале очень незначительна в 1 литре аллантоисной жидкости содержится 0,02 г вируса и существует ряд методов, позволяющих сконцентрировать и очистить материал.

Физический.

• Термолизис – замораживание и быстрое размораживание материала. В результате холодового шока клетки разрушаются и вирус выходит в межклеточное пространство.

• Фильтрация. используют специальные фильтры из нитроцеллюлозы мелкие поры и вирусы абсорбируются

• Центрифугирование основано на разделении частиц по массе. Вирус, содержащийся в материале, центрифугируются при 3000-4000 оборотов в мин. В течении 30 минут. Далее собираем надосадочную жидкость помещаем в другую центрифужную пробирку и центрифугируем при 5000-6000 оборотах в минуту в течение 30 минут. Затем вынимаем пробирку, берем на достаточную жидкость разводим физраствором и центрифуги при 20000 оборотах в минуту. Необходимо использовать центрифугу с охлаждением. Вирус находится в осадке.

• Центрифугирование в гардине плотности основано на разделение частиц в вязкой среде (20% сахароза). Вируссодержащий материал центрифугируют при 3000-4000 оборотах в минуту 30 минут. В результате вирус находится в верхней части пробирки остальное ниже послойно.

• Метод адсорбции с последующей элюцией. Вирусы могут адсорбироваться на гидроокись алюминия, гипсе, эритроцитах и на поверхности непатогенных культур. Элюция происходит при низких температурах либо при изменении Рн. Вирус гриппа адсорбируется на эритроцитах при температуре 2-4°С, затем центрифугируют, постепенно повышает температуру до 37°С и снова центрифугируют. При повторном центрифугировании элюцируют и вирус располагается в надосадочной жидкости.

Химический. Вирус осаждают различными химическими веществами и вирус находится в осадке.

• Метанолом. Соединяют вирус с метанолом доводят его концентрацию до 35% помещают в холодильник на 4 часа после чего центрифугируют (3-4 тыс 30 мин).

• В изоэлектрической точке. Изоэлектрическая точка вирусов - это значение pH, при котором вирусные частицы не имеют электрического заряда и выпадают в осадок. Изоэлектрическая точка в пределах 3,5-6,5 Рн. К вирусодержащему материалу добавляют 1 нормаль соляной кислоты и под контролем phметра доводит его концентрацию до изоэлектрической точки данного вируса. Затем помещают в холодильник на 4 часа, центрифугируют, надосадочную жидкость убирают, а осадок разводят слабощелочным буфером.

• Осаждение вирусов солями в полиэтиленгликоле. Сульфат аммония или полиэтиленгликоль добавляют в пат материал, доводит концентрацию до 35% или 7,5% соответственно. Помещают в холодильник на 4 часа, центрифугируют. Вирус находят в осадке.

• Метод Ильенко. Основан на выделении вируса из жиросодержащих тканий, а именно головного мозга. В основе метода лежит использование органических растворителей - хлороформа или эфира, которые позволяют эффективно отделить вирусные частицы от других компонентов образца. В ступке растирают головной мозг, добавляют эфир или хлороформ, растирают и переливают в центрифужную пробирку. Выдерживают в холодильнике 4 часа и центрифугируют.

Биологический. Использование антибиотиков, которые убивают чувствительные микроорганизмы, не действуя на вирусы. К биологическому методу также относиться заражение куриных эмбрионов и культур клеток с целью накопить вирус.