
- •Лекарственные формы для инъекций
- •Оглавление
- •Контрольные вопросы
- •1. Общая характеристика лекарственных форм для инъекций
- •3. Технологическая схема получения ампулированных лекарственных форм
- •4. Изготовление ампул
- •Стеклодрота
- •Получение безвакуумных ампул
- •5. Подготовка ампул к наполнению
- •Мойки ампул
- •6. Получение и подготовка растворителя
- •Через мембрану
- •7. Проблема исходных лекарственных и вспомогательных веществ
- •8. Дополнительная подготовка лекарственных и вспомогательных веществ
- •1) Очистке от химических примесей
- •2) Очистке от пирогенных веществ
- •9. Изотонирование
- •10. Стабилизация растворов
- •Факторы, влияющие на гидролиз солей
- •Гидролиз солей сильных оснований и слабых кислот
- •Гидролиз солей сильных кислот и слабых оснований
- •Гидролиз солей слабых кислот и слабых оснований
- •Гидролиз сложных эфиров
- •Гидролиз аминов кислот
- •Гидролиз сложных углеводов
- •Гидролиз сердечных гликозидов
- •Стабилизация растворов легкоокисляющихся веществ
- •Комплексообразователи (отрицательные катализаторы)
- •Пути предотвращения окислении лекарственных веществ
- •11. Введение консервантов
- •12. Стандартизация
- •13. Очистка растворов от механических включений
- •При помощи фильтра-грибка
- •14. Ампулирование
- •Раствора из капилляров
- •14. 3. Стерилизация
- •Термические методы стерилизации
- •Химические методы стерилизации
- •Стерилизации фильтрованием
- •Радиационная стерилизация
- •Стерилизация ультрафиолетовой радиацией
- •Ультразвуковая стерилизация
- •14.4. Оценка качества продукции и бракераж
- •1. Герметичность
- •2. Стерильность
- •3. Механические включения
- •Чистоты раствора в ампулах
- •4. Пирогенность
- •4.1.1. Биологический фармакопейный метод
- •15. Маркировка и упаковка
- •16. Регенерация растворов из отбракованных ампул
- •17. Общая аппаратурная схема производства
- •Инъекционных растворов
- •18. Медицинское стекло
- •19. Определение основных показателей качества медицинского стекла
- •20. Выщелачивание стекла
- •Действие на стекло кислых растворов
- •Действие на стекло щелочных растворов
- •Взаимодействие стекла с растворами солей
- •21. Особенности технологии некоторых растворов для инъекций
- •22. Получение угля активированного
- •23. Особенности изготовления масляных растворов в ампулах
- •24. Жировые эмульсии для парентералъного питания
- •Способы изготовления эмульсий:
- •Характеристика наиболее распространенных эмульсий
- •25. Суспензии для инъекционного введения
- •Характеристика наиболее распространенных суспензий для инъекционного введения
- •26. Инъекционные растворы с мечеными радиоактивными атомами
- •27. Порошки лиофильные во флаконах
- •28. Шприц-ампулы
- •29. Шприц-ручки
- •30. Одноразовые шприцы, заполненные лекарствами
- •31. Двойные ампулы
- •Обучающий контролирующий тест с эталонами ответов
- •8) Выберите требования gmp к персоналу, участвующему в производстве инъекционных лекарственных форм.
- •9) Подготовка ампул к наполнению включает операции:
- •Литература
- •Учебное издание
- •Лекарственные формы для инъекций
Чистоты раствора в ампулах
(Л.А. Иванова, 1991)
4. Пирогенность
В связи с опасностью пирогенного эффекта, проверке на пирогенность подвергаются вода для инъекций и растворы, вводимые внутривенно в объёмах 10мл и более. Обязательно должны проверяться 5% раствор глюкозы, изотонический раствор натрия хлорида и раствор желатина. Испытание на пирогенность можно проводить следующими методами:
4.1.Биоологическим:
4.1.1. Рекомендованным ГФ ХI издания (т. 1, с. 183-185)
4.1.2. ЛАЛ – тестом
4.2. Микробиологическим
4.3. Химическим (методом, разработанным ВНИИФ)
4.4.Физико-химическим:
4.4.1. Полярографией
4.4.2. Спектрофотомерией
4.4.3. Люминесцентным методом
Биологический фармакопейный метод испытания на пирогенность является стандартным и обязателен для выполнения. На ЛАЛ-тест составлен проект фармакопейной статьи. Остальные методы находятся на стадии разработки.
4.1.1. Биологический фармакопейный метод
Испытание проводят на здоровых кроликах обоего пола, не альбиносах массой 2-3,5 кг, содержащихся на полноценном рационе. Каждый кролик должен находиться в отдельной клетке в помещении с постоянной температурой. Колебания температуры не могут превышать ±3%. При уборке клеток, взвешивании животных их оберегают от возбуждения (избегать шума и резких движений). В течение недели, предшествующей опыту, кролики не должны терять в массе. Животные, теряющие в массе, к опыту не пригодны. В течение 3 суток перед испытанием у каждого подопытого кролика измеряют температуру. Исходная температура подопытных кроликов должна быть в пределах 38,5-39,5 оС. Животные с более высокой или более низкой температурой для опыта непригодны. Кроме того, кроликов, впервые предназначаемых для испытания, проверяют на реактивность путем внутривенного введения 10 мл/кг 0,9% стерильного непирогенного раствора натрия хлорида, соответствующего требованиям фармакопейной статьи. В случае изменения температуры у кроликов более чем на ±0,4 оС животные считаются непригодными для опыта. Не позднее, чем за 16 ч до опыта кроликов переводят в помещение, в котором осуществляют испытание на пирогенность.
Оно должно проводиться в отдельной комнате с постоянной температурой, не отличающейся от температуры помещения, в котором кролики постоянно содержались до опыта, более чем на ±2 0С, и с колебаниями во время испытания, не превышающими 2 0С, изолированной от шума, в спокойной обстановке. Вечером накануне опыта у животных отбирают остаток корма. До и вовремя опыта животные корма не получают (воду дают без ограничения).
Если нет других указании в частной статье, для испытания отбирают не менее 2 флаконов или ампул от каждой серии, содержащей от 1000 до 10000 флаконов или ампул. При количестве в серии флаконов или ампул более 10000 отбирают по 3 флакона или ампулы от каждой серии. Из отобранных флаконов или ампул готовят общий раствор (смешанная проба). От серии, содержащей до 1000 флаконов или ампул, отбирают по 1 флакону или ампуле. Испытуемые инъекционные растворы должны быть стерильны. Их подогревают до 37 оС и вводят кроликам в ушную вену в количествах, предусмотренных соответствующими частными статьями, в течение 2 минут.
Испытуемый раствор проверяют на 3 кроликах. Группа должна состоять из животных, близких по массе (отличающихся не более чем на 0,5 кг). Перед введением раствора у кролика с интервалом 30 минут измеряют температуру. Различия в показателях температуры не должны превышать 0,2 оС. В противном случае кролик для испытания не используется. Результат последнего измерения принимают за исходную температуру. Раствор вводят не позднее, чем через 15-30 минут после последнего измерения температуры. Последующее измерение температуры проводят 3 раза с промежутками в один час. Раствор считают непирогенным, если сумма повышений температуры у 3-х кроликов меньше или равна 1,4 оС. Если эта сумма превышает 2,2 оС, то раствор считают пирогенным. В случае, когда сумма повышений температуры у 3-х кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,2 оС, испытание повторяют дополнительно на 5 кроликах. В этом случае раствор считают непирогенным, если сумма повышения температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,7 оС. Если же эта сумма равна 3,8 оС или больше, раствор считают пирогенным.
Несмотря на специфичность, данный метод имеет ряд недостатков:
а) необходимость содержания животных и yxoд за ними;
б) невозможность повторного, использования кроликов для определения пирогенности в последующих объектах;
в) широкий диапазон биологических функциональных колебаний и ответной реакции кроликов на одну и ту же дозу пирогена;
г) невозможность определения дозы пирогена в исследуемом препарате, лекарственной форме;
д) возможность несоответствия величины пирогенных доз для кролика и человека. Описаны случаи апирогенности раствора для кролика и пирогенной реакции у человека.
4.1.2. Существует еще один биологический метод определения пирогенности инъекционных растворов, так называемый ЛАЛ-тест. Впервые он был предложен фармакопеей США и носил название Limulus-тест». В его основе лежит процесс физико-химического взаимодействия эндотоксинов с лизатом клеток (амебоцитов) крови мечехвостов, в результате которого происходит образование геля различной плотности. Поскольку первые исследования проводились на мечехвоста, Limulus polyphemus реактив, пригoтoвленный из их крови, был назван «Лизат Амебоцитов ЛИМУЛЮС», или сокращенно ЛАЛ-реактив, а метод, в котором он используется, получил название ЛАЛ-теста.
Для проведения ЛАЛ-теста необходимы:
а) ЛАЛ-реактив;
б) Рабочий стандартный образец (РСО) эндотоксина, т.е. препарат эндотоксина, оттитрованный фирмой-производителем по Американскому национальному стандарту эндотоксина RSE (ЕС-5). Содержание эндотоксина выражается в единицах эндотоксина (ЕДЭ).
Эндотоксин, включенный в набор для анализа по ЛАЛ-тесту, может быть в виде раствора или сублимационно высушенного вещества. В последнем случае его разводят водой для ЛАЛ-теста в соответствии с указаниями фирмы-производителя.
При хранении не допускается замораживание раствора эндотоксина. Рабочие разведения эндотоксина хранению не подлежат, за исключением тех случаев, когда способ хранения описан фирмой-производителем.
в) Вода для ЛАЛ-теста должна быть свободна от бактериальных эндотоксинов. Такого качества вода (содержание эндотоксинов ≤ 0,001 ЕД/мл) обычно входит в состав наборов для анализа по ЛAЛ-тecту.
Следует помнить, что рН раствора испытyемогo препарата должна находится в пределах 6,7-7,5. Для коррекции этого показателя в раствор препарата следует добавлять стерильные, свободные от эндотоксинов растворы NaOH, НСI или подходящий буфер.
Качественный ЛАЛ-тест проводится следующим образом: содержимое ампулы или флакона разводят водой. Кратность предельного максимального разведения (К) определяют по формуле:
К=А/λ,
где: А – максимально допустимое содержание эндотоксина в препарате, указанное в частной фармакопейной статье;
λ – чувствительность ЛАЛ-реактива, указанная фирмой производителем на этикетке упаковки.
Определение проводят в 2-х параллельных пробах. Полученный раствор препарата по 0,1 мл помещают в две стеклянные пробирки диаметром 10 мм и добавляют по 0,1 мл ЛАЛ-реактива. В 2-х других пробирках проводят контроль ингибирования испытуемым препаратом реакции эндотоксина с ЛАЛ-реактивом. Для этого к раствору испытуемого препарата добавляют стaндaртный эндотоксин в концентрации вдвое превышающей чувствительность ЛАЛ-реактива.
Одновременно ставят положительный и отрицательный контроль опыта. Для проведения положительного контроля в две пробирки помещают по 0,1 мл ЛАЛ-реактива и по 0,l мл раствора РСО эндотоксина в концентрации в два раза превышающей чувствительность ЛАЛ-теста. Для проведения отрицательного контроля в 2 пробирки помещают по 0,1 мл ЛАЛ-реактива и по 0,1 мл воды для ЛАЛ-теста.
Все реакционные смеси аккуратно перемешивают и одновременно помещают на 60 минут в водяную баню или термостат с температурой 37± 1 °С. По истечении указанного срока результаты регистрируются только как положительные или отрицательные. Положительная реакция характеризуется образованием плотного геля, который не разрушается при перевороте пробирки на 180 °С. При отрицательной реакции такой гель не образуется.
Результаты испытания лекарственного препарата с помощью ЛАЛ-теста можно оценивать лишь в том случае, когда в обеих пробирках с отрицательным контролем реакция отрицательна, а в обеих с положительным контролем – положительна.
Если в контpoле ингибирования испытуемым препаратом взаимодействия эндотоксина с ЛАЛ-реактивом реакция отрицательна, это означает, что данный препарат способен препятствовать указанной реакции. В этом случае результаты ЛАЛ-теста признаются недействительными.
Препарат считают выдержавшим испытания, если реакция отрицательна в обеих параллельных пробах. Если реакция положительна хотя бы в одной из проб, испытание повторяют с помощью полуколичественного теста, суть которого приводится ниже.
Испытуемый препарат проверяют в ряду последовательных двукратных разведений водой для ЛАЛ-теста. Условия проведения полуколичественного tecta такие же, как и для качественного теста. Определение проводят в 2-х повторностях. Контроль ингибирования испытуемым препаратом реакции эндотоксина с ЛАЛ-реактивом готовят для каждого разведения и также повторяют дважды. Отрицательный и положительный контроли ставят для всех серий разведений. Bce пробирки инкубируются одновременно.
Для расчета количества эндотоксина в испытуемом препарате отмечается наиболее высокое разведение, дающее плотный гель, хотя бы в одной повторности. Содержание бактериальных эндотоксинов (С) определяется по формуле:
С=Т· λ ,
где: Т – титр наиболее высокого разведения препарата, дающего плотный гель;
λ – чувствительность ЛАЛ-реактива, указанная фирмой производителем на этикетке упаковки.
Препарат считается выдержавшим испытания, если полученное при определении количественное содержание эндотоксина в нем не превышает максимально допустимую величину, указанную в частной фармакопейной статье.
4.2. Микробиологическим, суть которого заключается в следующем: определенный объем инъекционного раствора до стерилизации фильтруют через мембранный фильтр, который затем подращивают на поверхности питательного агара 18-20 часов. Затем ведут подсчет выросших колоний и определяют их принадлежность к грамположительной и грамотрицательной флоре. При количестве 103-104 микроорганизмов в 1 мл пирогенность присуща всем видам бактерий.
4.3. Во ВНИИФ разработан более простой, чувствительный метод, основанный на способнocти грамотрицательных микроорганизмов (основных продуцентов пирогенных веществ) образовывать гель в 3% растворе калия гидроксида.
4.4. Проводят также исследования по разработке физико-химических методов анализа пирогенных веществ, преимуществом которых является большая чувствительность, простота, доступность, сокращение экономических затрат и времени исследований (полярография; люминесцентный метод, спектрофотомерия).