6 курс / Кардиология / СЕРДЕЧНАЯ НЕДОСТАТОЧНОСТЬ
.pdfГлава 6. Клинико генетические аспекты влияния полиморфизма...
ность оба белка подавляли клеточный рост, однако бо лее низкие антипролиферативные свойства установле ны у белка, содержащего пролин, в то время как проте ин, содержащий аргинин, продемонстрировал более быстрое эффекторное проапоптотическое действие. В других работах доказана высокая апоптотическая активность полиморфизма p53Arg за счет существен ного преобладания белка в митохондриях, а также бо лее высокой продукции (в 5–10 раз) белков апоптоза р21, MDM 2, каспаз 3 и 9 в первые 15 ч реакции. Таким образом, белок, кодируемый геном р53 и содержащий аргинин в кодоне 72, в большей степени индуцирует программируемую клеточную гибель, чем белок с про лином в этой же позиции [158, 213, 430].
Нами исследован полиморфный локус гена белка апоптоза р53 Arg72Pro экзон 4, который может быть представлен тремя генотипами (Arg/Arg, Arg/Pro,
Pro/Pro) в результате однонуклеотидной замены гуа нина (G) на цитозин (C) (CGC – аргинин, ССС – про лин).
Распределение частот встречаемости генотипов по лиморфного локуса Arg72Pro экзон 4 гена p53 в группе больных и в контрольной группе соответствовало ожи даемому при равновесии Харди–Вайнберга. Результа ты исследования гена p53 в группе контроля и в группе больных представлены в таблице 6.1.
Оказалось, что у больных ХСН по сравнению с груп пой контроля частота встречаемости генотипа Arg/Arg была выше (55,6 против 44,9%). Следовательно, с этим генотипом Arg/Arg полиморфного локуса Arg72Pro
251
252
Таблица 6.1
Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса G634C гена VEGF в группе больных ХСН и в группе контроля
Выборка |
|
|
|
Аллели |
|
|
|
|
|
|
|
|
Генотипы |
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
Arg |
|
|
Pro |
Arg/Arg |
|
Arg/Pro |
|
Pro/Pro |
||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Группа контроля |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(n=136) |
179 |
65,8 |
93 |
34,2 |
61 |
44,9 |
57 |
41,9 |
18 |
13,2 |
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Группа больных |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(n=277) |
409 |
73,8 |
145 |
26,2 |
154 |
55,6 |
101 |
36,5 |
22 |
7,9 |
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
недостаточность Сердечная .Н.С Шилов ,.Н.Е Березикова ,.Т.А Тепляков
Таблица 6.2
Встречаемость генотипов и аллелей полиморфного локуса Arg72Pro ех4 гена p53 в зависимости от ФК ХСН (n, %)
Генотипы |
ФК II |
ФК III |
ФК IV |
рII–III |
pIII–IV |
pII–IV |
|||
и аллели |
(n=112) |
(n=101) |
(n=64) |
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Arg/Arg |
51 |
(45,5) |
59 |
(58,4) |
44 |
(68,8) |
0,091 |
0,278 |
0,008 |
Arg/Pro |
52 |
(46,4) |
34 |
(33,7) |
15 |
(23,4) |
0,95 |
0,165 |
0,011 |
Pro/Pro |
9 |
(8,0) |
8 |
(7,9) |
5 |
(7,8) |
0,825 |
0,786 |
0,814 |
Arg |
154 (68,8) |
152 (75,2) |
103 (80,5) |
0,223 |
0,444 |
0,055 |
|||
Pro |
70 |
(31,3) |
50 |
(24,8) |
25 |
(19,5) |
0,223 |
0,444 |
0,055 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
253
...полиморфизма влияния аспекты генетические Клинико .6 Глава
Тепляков А.Т., Березикова Е.Н., Шилов С.Н. Сердечная недостаточность
экзон 4 гена p53 ассоциируется развитие ХСН у боль ных ИБС, и в связи с этим генотип Arg/Arg (ОШ=2,1, 95%ДИ=1,036–4,118, p=0,037) является фактором риска развития ХСН.
Результаты исследования взаимосвязи полиморфиз ма гена белка p53 со степенью тяжести функциональ ного класса ХСН (по NYHA) представлены в таблице 6.2. Установлены достоверные различия по частоте встре чаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса Arg72Pro экзон 4 белка p53 в зависимости от тяжести ФК ХСН. Так, частота встречаемости генотипа Arg/Arg в 3 й группе больных ХСН IV ФК (68,8%) преобладала над таковой во 2 й (58,4%, нд) и 1 й группах (45,5%, р=0,008). Частота встречаемости генотипа Arg/Pro достоверно чаще регистрировалась в 1 й по сравнению с 3 й группой (46,4 против 23,4%, р=0,011). Таким об разом, носительство генотипа Arg/Arg полиморфного
локуса Arg72Pro экзон 4 белка p53 является фактором риска тяжелого течения ХСН.
6.2. Полиморфизмы гена каспазы88 (–652(6N)I/D и D302H как предикторы риска развития и тяжести течения ХСН у больных ИБС
Каспазы непосредственно принимают участие в про цессе апоптоза. Данные белки, входящие в семейство цистеиновых протеаз, обладают полной специфичнос тью по аспарагиновой кислоте в позиции Р1. В резуль тате активации каспаз происходит расщепление клеточ ных субстратов, что приводит к серьезным структурным
254
Глава 6. Клинико генетические аспекты влияния полиморфизма...
изменениям клеток в процессе запрограммированной гибели последних.
На вершине апоптозного каскада находится каспа за 8, именно этот белок в процессе апоптоза, запущен ного CD95 (Fas/APO 1) и ФНО α , напрямую связывает эффекторный домен смерти с каспазами. Ген каспа зы 8 имеет не менее 11 экзонов, которые перекрывают около 30 кб участка 2q33 34 человеческой хромосомы.
Нами исследованы два полиморфных локуса гена каспазы 8: –652(6N)I/D и D302H.
Распределение частот встречаемости генотипов по лиморфных локусов –652(6N)I/D и D302H гена каспа зы 8 в группе больных и в контрольной группе соответ ствовало ожидаемому при равновесии Харди–Вайнбер га.
На основании анализа по распределению частот встречаемости генотипов гена каспазы 8 (–652(6N)I/D)
у больных ХСН установлены различия по сравнению с группой здоровых. Действительно, аллель del (54,0 про тив 43,4%) и генотип del/del (28,9 против 19,1%) у па циентов с ХСН преобладали над частотой встречаемос ти в контроле (табл. 6.3).
Таким образом, вариабельность аллеля del (ОШ=1,53, 95%ДИ=1,142–2,050, p=0,004) и генотипа del/del (ОШ=2,33, 95%ДИ=1,293–4,215, p=0,005) ас социировалась с повышенным риском развития ХСН.
Проведенный анализ не выявил достоверных разли чий в распределении частот встречаемости генотипов и аллелей полиморфного локуса D302H гена каспазы 8 у
255
256
Таблица 6.3
Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса –652(6N)I/D гена каспазы8 в группе больных ХСН и в группе контроля
Выборка |
|
|
|
Аллели |
|
|
|
|
|
|
|
|
Генотипы |
|
|
|
|
|
||||||
|
|
|
|
ins |
|
|
del |
|
ins/ins |
|
ins/del |
|
del/del |
|||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||||
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Группа контроля |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(n=136) |
154 |
56,6 |
118 |
43,4 |
44 |
32,4 |
66 |
48,5 |
26 |
19,1 |
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Группа больных |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(n=277) |
255 |
46,0 |
299 |
54,0 |
58 |
20,9 |
139 |
50,2 |
80 |
28,9 |
||||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
недостаточность Сердечная .Н.С Шилов ,.Н.Е Березикова ,.Т.А Тепляков
Таблица 6.4
Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного локуса D302H гена каспазы8 в группе больных ХСН и в группе контроля
Выборка |
|
|
|
Аллели |
|
|
|
|
|
|
|
|
Генотипы |
|
|
|
|
||||||
|
|
|
G |
|
|
|
|
C |
|
|
G/G |
|
|
G/C |
|
C/C |
|||||||
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
|
n |
% |
|
n |
% |
|
||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Группа контроля |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(n=136) |
226 |
83,1 |
46 |
16,9 |
93 |
68,4 |
40 |
29,4 |
3 |
2,2 |
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Группа больных |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
(n=277) |
472 |
85,2 |
82 |
14,8 |
199 |
71,8 |
74 |
26,7 |
4 |
1,4 |
|||||||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
257
...полиморфизма влияния аспекты генетические Клинико .6 Глава
Тепляков А.Т., Березикова Е.Н., Шилов С.Н. Сердечная недостаточность
больных ХСН ишемического генеза и в группе контро ля (табл. 6.4).
Результаты исследования взаимосвязи полиморфиз мов гена каспазы 8 со степенью тяжести ФК ХСН (по NYHA) представлены в таблицах 6.5–6.6.
Частота генотипа del/del полиморфного локуса –652(6N)I/D гена каспазы 8 в 3 й группе достоверно преобладала над таковой во 2 и 1 й группах (42,2 про тив 23,8 и 25,9%, p=0,007 и р=0,039 соответственно). В то же время генотип ins/ins в 3 й группе (10,9%) встре чался реже, чем во 2 й группе (26,7%, р<0,025). Разли чия по частотам аллеля del (II ФК – 52,2%, III ФК – 48,5% и IV ФК – 65,6%) и аллеля ins (II ФК – 47,8%, III ФК – 51,5% и IV ФК – 34,4%) также оказались суще ственными (р<0,05). Следовательно, аллель ins и гено тип ins/ins полиморфного локуса –652(6N)I/D гена кас пазы 8 ассоциируются с протективными свойствами в
отношении характера течения ХСН у больных ИБС, а аллель del и генотип del/del являются прогностически ми факторами тяжелого течения заболевания.
Анализ распределения частот встречаемости геноти пов и аллелей гена D302H гена каспазы 8 в зависимос ти от ФК ХСН (NYHA) не выявил каких либо закономер ностей в генезе ХСН у больных ИБС (табл. 6.6).
Результаты исследования взаимосвязи полиморфиз мов генов белков апоптоза – Arg72Pro экзон 4 белка p53, –652(6N)I/D каспазы 8 и D302H каспазы 8 с пока зателями структурно функционального состояния ЛЖ представлены в таблице 6.7.
У пациентов с генотипом Arg/Arg гена белка p53
258
Таблица 6.5
Встречаемость генотипов и аллелей полиморфного локуса –652(6N)I/D гена каспазы8 в зависимости от ФК ХСН (n, %)
Генотипы |
ФК II |
ФК III |
ФК IV |
рII–III |
pIII–IV |
pII–IV |
и аллели |
(n=112) |
(n=101) |
(n=64) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
ins/ins |
24 (21,4) |
27 (26,7) |
7 (10,9) |
0,457 |
0,025 |
0,119 |
ins/del |
59 (52,7) |
50 (49,5) |
30 (46,9) |
0,744 |
0,866 |
0,559 |
del/del |
29 (25,9) |
24 (23,8) |
27 (42,2) |
0,841 |
0,007 |
0,039 |
ins |
107 (47,8) |
104 (51,5) |
44 (34,4) |
0,503 |
0,003 |
0,02 |
del |
117 (52,2) |
98 (48,5) |
84 (65,6) |
0,503 |
0,003 |
0,02 |
|
|
|
|
|
|
|
259
...полиморфизма влияния аспекты генетические Клинико .6 Глава
260
Таблица 6.6
Встречаемость генотипов и аллелей полиморфного локуса –D302H гена каспазы8 в зависимости от ФК ХСН (n, %)
Генотипы |
ФК II |
ФК III |
ФК IV |
рII–III |
pIII–IV |
pII–IV |
|||
и аллели |
(n=112) |
(n=101) |
(n=64) |
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
G/G |
85 |
(75,9) |
69 |
(68,3) |
45 |
(70,3) |
0,28 |
0,932 |
0,527 |
G/C |
26 |
(23,2) |
30 |
(29,7) |
18 |
(28,1) |
0,358 |
0,968 |
0,586 |
C/C |
1 |
(0,9) |
2 |
(2,0) |
1 |
(1,6) |
0,927 |
0,688 |
0,737 |
G |
196 (87,5) |
168 (83,2) |
108 (84,4) |
0,259 |
0,891 |
0,51 |
|||
C |
28 |
(12,5) |
34 |
(16,8) |
20 |
(15,6) |
0,259 |
0,893 |
0,508 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
недостаточность Сердечная .Н.С Шилов ,.Н.Е Березикова ,.Т.А Тепляков