- •(Экспериментальное исследование)
- •Список сокращений и аббревиатур, использованных в работе
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы) 10
- •Глава 2. Материалы и методы исследования 25
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации 41
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма 55
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки 79
- •Введение
- •Глава 1. Перспективы применения ксеногенной ткани селезенки для коррекции постспленэктомических нарушений (обзор литературы)
- •Проблема постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.1. Клинико-лабораторные проявления синдрома постспленэктомического гипоспленизма
- •1.1.2. Способы профилактики и коррекции гипоспленических послеоперационных расстройств
- •Ксенотрансплантация свиных органов и тканей
- •1.3. Технология получения материала для ксенотрансплантации
- •Глава 2. Материалы и методы исследования
- •2.1 Общая характеристика экспериментального материала
- •2.2. Характеристика методов исследования
- •2.2.1. Техника оперативных вмешательств
- •2.2.1.1. Ложная операция
- •2.2.1.2. Спленэктомия
- •2.2.1.3. Экстраперитонеальная аутотрансплантация селезенки
- •2.2.1.4. Ксенотрансплантация клеток селезенки
- •2.2.2.Приготовление препаратов для ксенотрансплантации
- •2.2.2.1. Получение взвеси клеток селезенки
- •2.2.2.2. Приготовление питательной среды для инъекции
- •2.2.2.3 Ранотензиометрия
- •2.2.3. Методы лабораторного контроля
- •2.2.3.1.Определение биохимических показателей сыворотки крови
- •2.2.3.3. Исследование показателей системы гемостаза
- •2.2.3.4 Иммунологические методы исследований
- •2.2.3.5 Общеклиническое исследование крови
- •2.2.3.6 Бактериологические методы исследований
- •2.2.4. Методы морфологического исследования
- •2.3.Методы статистической обработки
- •Глава 3. Получение криоконсервированных клеток селезенки свиньи для ксенотрансплантации
- •3.1.Технология выделения клеток селезенки
- •3.1.1 Дезагрегация ткани селезенки
- •3.1.2. Оптимизация рН среды для культивации клеток
- •3.1.3 Культивирование клеток селезенки новорожденной свиньи
- •3.2.Консервация клеток
- •3.2.1. Приготовление среды для криоконсервации
- •3.3. Получение препарата и ксенотрансплантация
- •Глава 4. Морфофункциональная оценка эффективности ксенотрансплантации клеток селезенки как способа коррекции индуцированного гипоспленизма
- •4.1 Развитие постспленэктомического гипоспленизма в ходе эксперимента
- •4.2 Летальность в экспериментальных группах
- •4.2.1. Патоморфологическое исследование погибших животных
- •4.3. Морфологическая оценка эффектов трансплантации ткани селезенки в условиях гипоспленизма
- •4.3.1 Исследование структуры печени
- •4.3.2.Исследование структуры легких
- •4.4. Морфологическое исследование зон трансплантации
- •4.5. Результаты ранотензиометрических исследований
- •Глава 5. Изменения гомеостаза в условиях постсплен-эктомического гипоспленизма, корригированного ксенотрансплантацией клеток селезенки
- •5.1. Лабораторная оценка раннего гепатопротекторного эффекта ксенотрансплантации культуры клеток селезенки
- •5.2. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на белково-синтетическую функцию печени в раннем послеоперационном периоде
- •5.3. Изменения неспецифической резистентности организма у аспленизизированных животных под воздействием ксенотрансплантации клеток селезенки в раннем послеоперационном периоде
- •5.4. Влияние ксенотрансплантации клеток селезенки на систему гемостаза в раннем периоде после индукции гипоспленизма
- •Заключение
- •Практические рекомендации
- •Список использованной литературы
4.3.2.Исследование структуры легких
В ОГ-1, ОГ-2 и КГ-1 на 7-е сутки при световой микроскопии наблюдали следующие изменения: структура легких сохранена, встречаются единичные участки со слабовыраженным межуточным воспалительным процессом, утолщением межальвеолярных перегородок с инфильтрацией лимфоцитами, макрофагами, сегментоядерными лейкоцитами (1 балл). На 14-е сутки эксперимента наблюдали схожие по степени выраженности воспалительные изменения, оцениваемые как межуточная пневмония - 1 балл, более часто встречающиеся у животных ОГ-2. Структура легких на светооптическом уровне при этом была сохранена, встречались очаги с утолщенными межальвеолярными перегородками с инфильтрацией лимфоцитами, макрофагами, сегментоядерными лейкоцитами. На 21-е сутки у крыс ОГ-1 признаки межуточной пневмонии в большинстве наблюдений исчезали. В ОГ-2 и КГ-1 по-прежнему отмечали наличие очагов межуточной пневмонии и лейкоцитарной инфильтрации (1 балл); также зарегистрировано появление очагов межуточной пневмонии с вовлечением в процесс до 2/3 легочной паренхимы по площади среза и единичными зонами некроза с лейкоцитарной инфильтрацией по периферии (2 балла).
В КГ-2 на 7 сутки структура легочной паренхимы сохранена, в ней чаще определяются воспалительные изменения, отнесенные к 2 баллам (описаны выше).
В КГ-3 при исследовании на 7 сутки после операции структура легочной паренхимы сохранена, признаков межуточного воспаления в большинстве наблюдений не определяется, как и на 14 и 21 сутки эксперимента.
Оценка воспалительных изменений, в балльном выражении и статистической обработкой результатов представлена в табл. 4.4.
Таблица 4.4
Балльная морфологическая оценка воспалительных изменений в легких
(средние величины)
Сутки |
ОГ-1 (n=6) |
ОГ-2 (n=6) |
КГ-1 (n=6) |
КГ-2 (n=6) |
КГ-3 |
7 |
0,5¨ |
0,5¨· |
0,5¨· |
1,7Ä |
0,3 |
14 |
0,5 |
0,8Ä |
0,7 |
- |
0,2 |
21 |
0,3** |
1,3Ä |
1,2*Ä |
- |
0,3 |
Примечание: * - значимые различия по критерию Манна –Уитни по сравнению с показателем в ОГ-1 (pU<0,05); ** - по сравнению с ОГ-2; ¨ - по сравнению с КГ-2; Ä - по сравнению с КГ-3; · - значимые различия по критерию Вилкоксона по сравнению с показателем в группе на 21 сутки (pW<0,05)
Как видно из таблицы, воспалительные изменения в контроле (КГ-3) были минимальными на каждом из этапов морфологического исследования, как и в ОГ-1 (межгрупповых различий КГ-3 и ОГ-1 не было). На 7-е сутки картина воспалительных изменений в легких у животных КГ-2 существенно более выражена, чем в прочих группах (pU£0,01). В дальнейшем воспаление легочной паренхимы оставалось на прежнем уровне или несущественно регрессировало у животных ОГ-1, а у крыс ОГ-2 и КГ-1 монотонно прогрессировало к 21 суткам (0,5 против 1,3; pW£0,03 и 0,5 против 1,2; pW£0,04) соответственно).
Поскольку морфологические изменения печени и легких, наблюдаемые у животных сравниваемых групп, имели существенные различия, оставалось предположить, что эти закономерности связаны с процессами регенерации в зоне трансплантации селезеночного материала. Рассмотрим морфологические признаки этих регенераторных процессов.