razdel_2

41

Рис. 29. Салазочный микротом фирмы «Микром» (Германия) типа НМ 400R. Имеет очень удобную систему для быстрой смены держателей образцов ткани, ручную и автоматическую установку толщины срезов в диапазоне 1-60 мкм.

В обоих случаях держатель блока ткани имеет устройство для микроподачи

блока перпендикулярно плоскости ножа, что обеспечивает получение срезов

разной толщины.

На рис. 30 и 31 показано рабочее место для микротомии тканей в Центре

Рис.30. Рабочее место для микротомии. Слева направо видны: нагревательный столик для расправления срезов, ротационный микротом, салазочный микротом с термостатируемым столиком (на переднем плане – блок питания термостолика). Центр аналитической микроскопии

аналитической микроскопии, оснащенное ротационным и салазочным микротомами фирмы Reichert , выпуска середины-конца 60-х годов, которая производит самые лучшие микротомы в мире. Кстати, необходимо отметить, что при правильной и аккуратной эксплуатации микротомы представляют «вечные» приборы. Рабочее место для микротомии крупным планом показано на рис. 31.

42

Рис.31. Рабочий стол для микротомии крупным планом:

1 – нагревательный столик для расправления срезов ткани на предметных стеклах (заливка в парафин), 2 – ротационный микротом (Reichert), 3 – салазочный микротом (Reichert) с термостоликом (4) (СССР), 5 – банка с предметными стеклами в смеси спирт-эфир, 6 – баночка с покровными стеклами в смеси спирт-эфир

На микротомах фирмы Reichert, выпущенных даже начала века,

получаются и сегодня прекрасные результаты. На рисунке приведенном в разделе «Краткая история гистохимии» показан внешний вид салазочного

44

Современные салазочные и ротационные микротомы представляют прецизионные электромеханические приборы, позволяющие удобно, быстро и надежно делать серийные срезы тканей. Одна из последних моделей ротационного микротома типа 2055 Autocut фирмы Reichert показан на рис. 33.

В комплект микротома 2055 Autocut, как и к другим современным микротомам, входит большой набор дополнительных приспособлений,

например, для крепления блоков ткани, залитых в разные материалы:

парафин, целлоидин и другие полимерные материалы (рис. 34)

Рис.34. Набор держателей блоков тканей из комплекта микротома

2055 Autocat

Для удобства наблюдения и контроля за качеством резки к микротомам прилагаются специальные оптические насадкибинокулярные стереомикроскопы (а) или специальные лупы (б) (рис.35).

Рис.35. Два типа оптических насадок для микротомов

Наконец, для крепления ножа, в комплект современного микротома входит набор специальных блоков, позволяющих применять различные микротомные ножи, регулировать угол расположения ножа, относительно блока ткани и, что не менее важно, сделать работу на микротоме безопасной

(рис. 36).

45

Рис.36. Набор держателей ножа для микротомов

Микротомный нож представляет очень острый инструмент и

невнимательное обращение с ним может привести к серьезным

травмам !!

Одиночные срезы или ленточки срезов переносят на предметное

стекло кисточкой. Пипеткой вносят каплю воды под срезы и переносят предметное стекло со срезом на нагревательный столик(t = +30 - +37°С).

Срезы хорошо расправляются на поверхности капли воды. После расправления срезов, вода из-под них осторожно убирается полоской

Вслучае, когда использование воды не желательно, срезы можно

3.2.2. Ножи для микротомов

Ножи для микротомов также как прецизионный узел микротома,

обеспечивающий установку толщины , срезаявляются важнейшими элементами микротомов, от качества которых и правильного использования зависит конечный результат микротомирования , иестественно, результат

представляют большую опасность при невнимательной с ними .работе

Стандартные ножи выпускаются двух (фирматипов Reichert),

различающихся профилем тела ножа и его режущей части (рис. 37).

Рис. 37. Микротомные ножи: а - общий вид ножа, б - два профиля ножей

Ножи первого типа (1) используются для резки «мягких» блоков, когда ткань

залита в целлоидин или парафин. Ножи второго типа (2) применяются, как

правило, для резки образцов тканей, заключенных в твердые парафины или

замороженной ткани на специальных микротомах (см. ниже).

Качество режущей кромки ножа проверяется при помощи микроскопа

при небольшом увеличении (рис.38).

Рис. 38. Справа представлены микро фотографии кромки ножа на разных стадиях ее исправления:1 - страшные зазубрины, возникшие, по-видимому, вследствие какой-то аварии или грубого нарушения правил пользованием ножом; 2 - шлифовка ножа привела к значительному улучшению кромки ножа. 3 - дальнейшая обработка ножа привела к полному восстановлению нормального качества режущей кромки микротомного ножа.

47

За всю мою почти сороколетнюю работу на микротомах я не видел кромок микротомного ножа приведенного на фото1 рис.38. Эта фотография взята из руководства к микротомам фирмыReichert и, наверное, приведена авторами руководства как крайняя стадия состояния ножа.

Для исправления микротомных ножей используются специальные приспособления, одним из которых является обушок(а’), надеваемый на массивную часть ножа, для того чтобы задать необходимый угол кромке ножа при его заточке. Геометрические параметры режущей кромки ножа показаны на рис. 39.

Рис. 39. Геометрия микротомных ножей: а) положение ножа при заточке, правке и полировке ножа, а‘ - обушок; б) углы режущей кромки ножа.

В описании микротомов обычно детально приведен протокол манипуляций,

связанных с правкой ножей, рекомендации по использованию специальных

микротому, особенно разделы, касающиеся уходу за микротомным ножом.

Во всех микротомах, выпускаемых в последние годы используются специальные сменные, одноразовые ножи (лезвия) и специальные держатели таких лезвий. Одноразовые лезвия очень удобны, изготавливаются из стали разной прочности, и позволяют приготавливать срезы разной толщины(до 2

мкм) из материала залитого в разные твердые и«мягкие» парафины. Кроме

ножей отпадает сложная операция правки«толстых» ножей, которая требует большого навыка. «Отработанные» одноразовые лезвия можно с успехом использовать для подрезки парафиновых блоков при их подготовке микротомированию.

3.2.3. Микротомы для замороженной ткани

Срезы из нефиксированной и фиксированной ткани можно приготовить из замороженной ткани при помощи микротомов, снабженных специальными устройствами для поддержания низкой температуры ткани в процессе резки.

Встарых моделях микротомов для замороженной ткани

(«замораживающих» микротомах) использовалась жидкая углекислота для замораживания ткани. Углекислота «выливалась их специальных баллонов,

где она находилась под давлением в жидком состоянии, в специальный испаритель, который выполнял роль подставки для ткани. В испарителе углекислота вследствие быстрого расширения охлаждала испаритель и ткань,

находившаяся на нем быстро замораживалась. На этом принципе был

выполнен, выпускался Харьковским заводом много лет наш отечественный прибор, который широко использовался в практической работе. Автору этого

учебника в 60-х годах удалось работать на таком замораживающе

микротоме и при определенной тренировке и сноровке на нем можно было

устойчиво получать хорошие срезы. В Онкологическом Институте .им

Герцена (Москва) мне удалось увидеть работу на таком микротоме мастеров высокого класса, которые получали за несколько минут превосходные срезы при срочной операционной биопсии !!

Крупные иностранные фирмы выпускали специальные принадлежности

49

выпускала специальный держатель ткани(рис.40), подключенный к баллону с жидкой углекислотой, который перевернут для выпуска жидкой углекислоты через специальный шланг, подключенный к испарителю-

подставке для образца ткани.

Рис.40. Слева - баллон с углекислотой; Справа - испаритель углекислоты, подключенный к баллону. 1 - образец ткани, 2 - ручки для

управления потоком углекислоты, 3 - колпачок, который

снимается после замораживание ткани, перед резкой ткани.

нормально много лет и позволяет приготавливать серийные срезы замороженной ткани (см. выше).

Главными преимуществами приготовления срезов из замороженной ткани является быстрота приготовления срезов и отсутствие необходимости использовать органические растворители и промежуточные материалы для заливки образцов ткани. Срезы при резке остаются на ноже, в капельке растаявшей воды, содержащейся в срезе или добавленной на нож, когда он выведен из зоны замороженной ткани. Срез осторожно переносится мягкой кисточкой, смоченной водой в плоский сосуд с водой (например, в чашку Петри). Предметное стекло подводится под ,срезкоторый аккуратно кисточкой переносится на поверхность стекла. Лишняя вода отсасывается

50

из-под среза полоской фильтровальной бумаги, и срез высушивается на стекле в защищенном от пыли месте. В ряде методов, срезы предварительно проводятся через гистохимическую процедуру и затем переносятся на предметное стекло.

3.2.4.Криостат

Вотличие от микротомов для замороженной ткани, в криостате микротом помещен в специальную холодильную камеру, в которой

поддерживается температура -10 - -20°С. Таким образом, весь процесс резки ткани и некоторые последующие манипуляции со срезами проходят при низкой температуре. Резка ткани в криостате является прекрасным

методом для подготовки срезов тканей для гистохимического выявления

активности ферментов, белков, липидов и др. внутриклеточных и

криостате, переносятся на предметное стекло. Перед резкой ткани в

криостате весь инструментарий и предметные стекла необходимо

поместить в криостат для их охлаждения. Замороженный срез аккуратно

Крупные фирмы выпускают сложные и высокопроизводительные

криостаты для получения качественных срезов для гистологии и гистохимии.

Приборы высокого класса отличаются наличием приспособл

позволяющих процесс резки замороженной ткани проводить с высокой точностью, надежностью и комфортом.

К сожалению, в России не выпускаются фирменные криостаты, хотя еще в

80-х годах в Москве можно было купить неплохой криостат типа МК-20, на