razdel_2

11

Хромовая кислота сильный окислитель, в ткани проникает очень медленно - за 4 часа проникает на глубину 1,4 мм. Во время фиксации

хромовая кислота и ее соли вызывают осаждение цитоплазматических и

Э.Пирс, действие хрома проявляется в разрыве внутренних (солевых)

связей в молекулах белка и увеличении количестваосновных групп,

липидов и нуклеиновых кислот.

1.2.2. Соли ртути

Соли ртути, главным образом, сулема (двухлористая ртуть),

используются для фиксации, в основном, благодаря избирательному взаимодействию с SH-группами белков. Хотя необходимо отметить, что как и другие ионы металлов, ионы ртути взаимодействуют также с карбоксильными и гидроксильными группами белков. Взаимодействие сулемы с SH-группами белков протекает в две стадии:

белки (реакции Миллона, Сакагуши, тетразониевого сочетания) можно проводить после фиксаторов, в состав которых входят ионы ртути.

моноэфиры циклического типа в результате окисления двойных связей жирных кислот (рис. 8):

Рис. 8. Схема взаимодействия OsO4 с жирными кислотами

Соединение I может образовывать стабильные диэфиры при реакции с соединениями, содержащими гидроксильные группы (рис.9):

13

Рис.9. Образование диэфирных связей соединения I (рис.9) с цепями, содержащими гидроксильные группы

При избытке непредельных соединений осмиевая кислота может образовывать комплексные соединения (рис.10):

Рис. 10. Образование комплексных соединений OsO4 с непредельными соединениями

Согласно другим данным, осмиевая кислота может образовывать сшивки между двумя участками непредельных жирных кислот (рис.11):

Рис. 11. Образование сшивки соединения I (рис. 9) с непредельными жирными кислотами

Показано, что для четырехокиси осмия можно построить следующий

ряд активности взаимодействия с различными другими реакционными

группами химических соединений: SH-группы > -С=С-группы >

14

концевые аминогруппы > -S-S-группы > -СНО-группы >концевые

ОН-группы >-ОН-группы ароматического кольца.

1.3.Органические кислоты

1.3.1.Пикриновая кислота

1.3.2. Сульфосалициловая кислота

15

Сульфосалициловая кислота вызывает коагуляцию белков потерюи коллоидными структурами цитоплазмы сольватных оболочек, что приводит к хорошей морфологической и биохимической сохранности тканей.

Сульфосалициловая кислота часто используется самостоятельно или в смеси с другими фиксаторами белков, углеводов, липидов, гликогена,

мукополисахаридов.

1.3.3.Трихлоруксусная кислота

Трихлоруксусная кислота, представляющая бесцветные кристаллы с острым запахом, хорошо растворимые в воде, широко используется в общей биохимии для осаждения белков. Однако в качестве гистохимического фиксатора на белки это соединение используется крайне редко.

1.4. Спирты

Из спиртов в качестве химических фиксаторов используются чаще всего этиловый (1) и метиловый (2) спирты:

Фиксирующее действие спиртов связано с осаждением белков. Точных данных о механизмах осаждения белков спиртами в настоящее время не имеется, однако, существует несколько предположений на этот счет.

Например, считается, что под действием спиртов возможенразрыв поперечных сшивок в белковой цепи (рис. 12).

16

Рис.12. Возможные точки приложения спирта во время фиксации белков

широко используется для фиксации нуклеиновых кислот, белков, гликогена,

мукополисахаридов и др.

1.5. Ацетон

18

не обладает выраженными фиксирующими свойствами, но ее добавление в гистохимический фиксатор приводит обычно к ускорению диффузии основного фиксатора в ткань. Для этой же цели иногда используется диметилсульфоксид, который также увеличивает проницаемость тканей для основного фиксатора.

19

Глава 2. Физические методы фиксации

Физические методы фиксации тканей для гистохимических целей

основываются на использовании методов, связанных с действием низких

сильным уменьшением активности тканевых ферментов и кристаллизация воды в тканях (в тканях 80-90% воды!), что приводит к возможности

изготовить из замороженных тканей срезы толщиной 5 - 150 мкм.

Физические методы фиксации применяются в условиях простой

температуре (лиофильная сушка, «freeze-drying» ) или путем замещения

замороженной воды в тканях некоторыми органическими растворителями

также при попадании воды в лиофилизированную ткань в ней возобновятся метаболические процессы, которые приведут к неисправимым артефактам в

20

гистохимическом препарате. Однако эти «недостатки» физических методов имеют важное значение для гистохимии, особенно в тех случаях, когда необходимо исследовать ферменты или эндогенные химические соединения,

которые под действием химических фиксаторов меняют местоположение в тканях и клетках(экстракция, растворение и др.) или разрушаются химическими фиксаторами.

2.1.Замораживание образцов ткани

2.1.1.Процесс кристаллизации воды в тканях при низких температурах

При замораживании ткани вода в ней, в зависимости от температуры,

находится в различных кристаллических состояниях от монокристаллического, поликристаллического до стекловидного состояния.

Это зависит от скорости замораживания. Можно выделить 3 зоны влияния скорости замораживания на состояние льда в тканях (Пушкарь и соавт.,1978)

(рис. 14):

вызывающих повреждение ультраструктуры клеток.

Рис.14. Образование кристаллов воды в тканях при разных скоростях замораживания