Полезные материалы за все 6 курсов / Ответы к занятиям, экзаменам / 7_Возбудители_дифтерии,_туберкулеза,_анаэробных_инфекций

3.Вывод (определение вида выделенной культуры и ее токсигенности).

2.Световая микроскопия препарата из мокроты больного туберкулезом в окраске по Цилю-Нильсену.

11

Занятие №2

Тема. Микробиологическая характеристика патогенных анаэробов.

Цель занятия. Изучить характеристику возбудителей неклостридиальных анаэробных инфекций, возбудителей газовой гангрены, столб-

няка, ботулизма, микробиологическую диагностику вызывае-

мых ими заболеваний. Изучить схему бактериологического ме-

тода исследования при подозрении на газовую гангрену. Изу-

чить препараты для специфической профилактики и специфиче-

ского лечения газовой гангрены, столбняка, ботулизма.

I.Теоретические знания:

1.Неклостридиальные анаэробы в патологии человека, микробиологическая диагностика.

2.Характеристика возбудителей газовой гангрены, микробиологическая диа-

гностика, специфическая профилактика и лечение.

3.Характеристика возбудителя псевдомембранозного колита, микробиологи-

ческая диагностика.

4.Характеристика возбудителя столбняка, специфическая профилактика и ле-

чение.

5.Характеристика возбудителя ботулизма, микробиологическая диагностика,

специфическое лечение.

II.Практические навыки:

1.Изучение схемы бактериологического исследования отечной жидкости при подозрении на газовую гангрену. Учет и интерпретация результатов иссле-

дования.

2.Световая микроскопия готовых препаратов чистых культур бактероидов,

возбудителей газовой гангрены, столбняка, ботулизма, окрашенных по Гра-

му.

12

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1.Неклостридиальные анаэробы в патологии человека, микробиологическая диагностика.

Неклостридиальные (неспорообразующие) анаэробы являются предста-

вителями симбионтной микробиоты ротовой полости, верхних дыхательных путей, кишечника, влагалища и др. биотопов макроорганизма. По таксономической характеристике они относятся к различным родам (табл. 2).

Чистые культуры неклостридиальных анаэробов. Окраска по Граму.

13

Неклостридиальные анаэробы (НА): условно-патогенные микроорга-

низмы, которые могут вызывать различные эндогенные инфекции при снижении иммунного статуса организма.

Факторы патогенности для большинства НА:

1.Факторы адгезии.

2.Капсула.

3.Ферменты патогенности (гиалуронидаза, нейраминидаза, фибринолизин).

4.Эндотоксин, цитотоксин.

НА чаще вызывают заболевания в ассоциациях, что приводит к более быстрому и тяжелому течению заболевания.

Все НА, за исключением бифидо- и лактобактерий, могут вызывать следующие гнойно-септические заболевания:

послеоперационные абдоминальные инфекции: перитонит, аппендицит, абсцесс печени;

гинекологические инфекции: септический аборт, эндометрит;

аспирационную пневмонию, абсцесс легкого;

сепсис, эндокардит;

флегмоны, абсцессы кожи и мягких тканей, остеомиелит (при ушибах и травмах);

одонтогенные инфекции после удаления или пломбирования зубов.

Лактобактерии значительно реже, чем другие НА, вызывают заболевания и могут быть причастны к формированию кариеса, острого язвенного стоматита, язвенного вульвита.

Бифидобактерии чрезвычайно редко, на фоне глубокого иммунодефицита, могут вызывать септицемию.

Микробиологическая диагностика.

Микробиологическая диагностика необходима для этиологической расшифровки заболеваний и определения чувствительности возбудителей к антибиотикам.

Материал на исследование (в зависимости от клинической формы): кровь, гной, пунктаты абсцессов и полостей, отделяемое из глубоких отделов ран, язв, свищей и др.

1.Экспресс-методы:

микроскопия нативных мазков в окраске по Граму;

газовая хроматография, основанная на обнаружении продуктов метаболизма анаэробов (летучие жирные кислоты – муравьиная, уксусная, пропионовая).

2.Бактериологический метод (основной). Материал доставляют в одноразовых шприцах или в стерильных пробирках с транспортной средой для анаэ-

14

робных микроорганизмов. Необходимое условие: быстрая (не позднее 2-х часов) доставка исследуемого материала в лабораторию. Производят посев на специальные для анаэробов питательные среды. Посевы инкубируют в анаэростатах, заполненных газовой смесью (80% N2, 10% H2 и 10% CO2), или с помощью AnaeroHiGas Pak, с дальнейшей идентификацией выделенных возбудителей и определением чувствительности к антибиотикам.

Специфическая профилактика и специфическая терапия не разработаны.

2.Характеристика возбудителей газовой гангрены, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и лечение.

Основной возбудитель газовой гангрены Clostridium perfringens (7080%). Реже заболевания вызывают: Clostridium novyi (20-40%), Clostridium septicum (до 20%), Clostridium histolyticum (4-6%) и др.

Морфо-тинкториальные свойства: C.perfringens крупные, неподвижные грамположительные палочки, имеют капсулу, образуют спору, расположенную центрально или субтерминально. Диаметр споры превышает диаметр клетки.

Чистая культура C.perfringens. Окраска по Граму.

Культуральные свойства: факультативный анаэроб. На среде КиттаТароцци – помутнение, на среде Вильсона-Блера – рост в виде черных колоний. Характерной особенностью роста возбудителя на этих средах является интенсивное газообразование с разрывами агара. На кровяном агаре Цейсслера растут в виде гладких сероватых колоний с зонами гемолиза.

Рост C.perfringens на специальной среде Вильсона-Блера.

15

Антигенная структура: выделяют 6 сероваров (A-F). Заболевания человека чаще связаны с сероваром А.

Факторы патогенности: характерной особенностью возбудителей газовой гангрены является многообразие продуцируемых токсинов, обозначаемых буквами греческого алфавита. Причем, у каждого вида и серовара свой набор ток-

сических факторов, которые представляют собой не только экзотоксины, но

и различные ферменты патогенности:

α-токсин (лецитиназа С) обладает дермонекротическим действием, что приводит к некрозу мышечной ткани. Лецитиназа также вызывает лизис эритроцитов и повреждает липидные мембраны нервных клеток;

коллагеназа, гиалуронидаза, ДНК-аза, гемолизин – усиливают действие α-

токсина;

энтеротоксин (экзотоксин) – вызывает пищевые отравления при массивном обсеменении пищевых продуктов (см. учебно-методическое пособие «Основная бактериальная патология желудочно-кишечного тракта»).

Газовая гангрена чаще возникает при различных травмах вследствие инфицирования ран почвой, содержащей споры возбудителя.

Признаки газовой гангрены.

1.Некроз мышечной ткани.

2.Интенсивное накопление газов (H2, CO2, H2S, аммиак и др.) в пораженных тканях, что определяется при пальпации кожных покровов (симптом крепитации).

3.Обширный отек тканей. Из раны выделяется серозно-геморрагический экссудат с гнилостным запахом.

4.Сепсис и синдром токсического шока, что обычно приводит к летальному исходу.

Микробиологическая диагностика.

Материал на исследование: мазки-отпечатки из раны, кусочки некротизированных тканей, отечная жидкость, перевязочный материал, кровь (при подозрении на сепсис).

1.Бактериоскопический метод: микроскопия мазков-отпечатков в окраске по Граму.

2.Бактериологический метод (основной): посев исследуемого материала на специальные среды с целью выделения и идентификации возбудителя.

3.ПЦР.

Специфическая профилактика: при ранениях и травмах – поливалент-

ная противогангренозная антитоксическая сыворотка (против C. perfringens, C.novii, C.septicum).

Специфическое лечение: поливалентная противогангренозная анти-

токсическая сыворотка (против C. perfringens, C.novii, C.septicum).

16

3. Характеристика возбудителя псевдомембранозного колита, микробиологическая диагностика.

Clostridium difficile – возбудитель энтерального клостридиоза (антибиотикоассоциированная диарея). Это острое инфекционное заболевание, проявляющееся симптомами токсикоза, диарейным синдромом с развитием псевдомем-

бранозного колита.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительные палочки с овальными субтерминальными спорами, перетрихи.

Чистая культура C.difficile. Окраска по Граму.

Культуральные свойства: облигатные анаэробы, растут на специальных питательных средах лучше в анаэробных условиях.

Факторы патогенности: токсин А (энтеротоксин) – вызывает диарею,

токсин В (цитотоксин) – нарушает функцию мембран и синтеза белка.

Патогенез и клиника: заболевание развивается, как правило, на фоне приема антибиотиков. Антибиотики, подавляя резидентную микробиоту кишечника, способствуют его колонизации C.difficile, который нередко является симбионтом этого биотопа. Бактерия синтезирует токсины, поражающие толстую кишку с образованием пленки из фибрина и слизи. Заболевание проявляется приступообразными болями в животе, диареей, повышенной температурой.

Пленки из фибрина на слизистой оболочке кишечника.

17

Микробиологическая диагностика. Материал на исследовании: фекалии

1.Бактериологический метод: выделяют на специальных средах чистую культуру, которую тестируют на токсигенность.

2.ПЦР.

3.ИФА (определение токсинов).

Специфическая профилактика и специфическая терапия не разработаны.

4.Характеристика возбудителя столбняка, специфическая профилактика и лечение.

Возбудитель столбняка – Clostridium tetani.

Морфо-тинкториальные свойства: грамположительная тонкая палочка, перитрих, капсулу не имеет. Спора круглой формы, больше диаметра клетки, располагается терминально и придает клетке сходство с барабанной палочкой.

Чистая культура C.tetani. Окраска по Граму.

Культуральные свойства: анаэробы, растут на соответствующих питательных средах.

Антигенная структура: О- и Н-антигены, по жгутиковому (Н) антигену выделяют 10 сероваров C.tetani.

Факторы патогенности: все серовары возбудителя продуцируют экзотоксин, состоящий из двух фракций: тетаноспазмин (нейротоксин) и тетанолизин. Основной фактор патогенности – тетаноспазмин, который блокирует все типы синаптического торможения. Тетанолизин обладает гемолитическим,

кардиотоксическим и летальным действием.

Заражение происходит при попадании спор возбудителя с почвой через поврежденные кожные покровы (небольшие царапины, ссадины, проколы на конечностях) и слизистые оболочки вследствие бытовых, производственных и

18

сельскохозяйственных травм. У новорожденных заражение происходит через пупочную ранку.

Патогенез: возбудитель размножается и остается в воротах инфекции (колотые раны). Клиника заболевания развивается только за счет экзотоксина, выделяемого возбудителем. Экзотоксин (тетаноспазмин) проникает в нервные клетки и посредством аксонного транспорта попадает в ЦНС. При этом развивается сначала местное, а затем и генерализованное подавление синаптического торможения на уровне двигательных нейронов, так как токсин препятствует выходу тормозных медиаторов в синаптическую щель. В связи с этим в мионевральных синапсах распространяются только процессы возбуждения. Это приводит к гипертонусу скелетных мышц больного и судорогам.

Клиника: симптомы столбняка развиваются по нисходящему типу (tetanus descendens) и начинаются со спазма жевательной мускулатуры (тризм), затем наступают судороги мимической мускулатуры. Позже судороги переходят на мышцы шеи, туловища и конечностей. Вследствие резкого сокращения мышц спины больной выгибается в виде дуги с опорой на затылок и пятки (опистотонус). Смерть чаще наступает от асфиксии из-за паралича мышц грудной клетки и диафрагмы.

Опистотонус. Картина сэра Чарлза Белла (шотландский физиолог и анатом, член Лондонского королевского общества).

Столбняк новорожденных (tetanus neonatorum). Протекает по типу гене-

рализованной инфекции. Вначале у ребенка нарушается акт сосания и глотания, а затем начинаются судороги. Вследствие резкого сокращения мышцсгибателей у ребенка отмечается характерная поза.

19