Протокол №24. Серологическая диагностика бруцеллеза (Brucella).

У больного взяли сыворотку крови. Для постановки предварительного диагноза поставили РА Хеддельсона на стекле с концентрированной цельной сывороткой и концентрированным бруцеллезным диагностикумом, окрасили метиленовым синим. Реакцию ставили обезжиренном стекле. В квадраты 1, 2, 3 внесли цельную сыворотку, в 4, 5 – физ. р-р с 0,5% фенолом. В 1, 2, 3 и 4 внесли бруцеллезный диагностикум, в 4 (КА) – сыворотку. Содержание квадратов смешали. Стекло подогревали над пламенем 15-30сек. Учет сразу после реакции. РА Хеддельсона «+», следоватлеьно, сыворотка обследованного предполагаемо содержит антитела к возбудителю. Для определения титра антител и подтверждения диагноза сделали развернутую РА Райта в пробирках. Титр исследованной сыворотки 1/400, что больше дигностического (1/200).

Протокол №26. Профилактическое обследование населения на сифилис (Treponema pallidum).

У сотрудников детского сада для плановой профилактики на сифилис взяли кровь для постановки реакции микропреципитации (МРП). Для исследуемого материала взяли сыворотку для выявления антител к неспецифическому (кардиолипиновому) антигену. Сыворотку инактивировали при +56С 30мин. Для постановки МРП в лунки планшета внесли сыворотки, контрольные положительную, слабоположительную и отрицательную сыворотки. Затем в каждую лунку добавили 0,9% физ. р-р, перемешали и оставили при комнатной температуре на 5мин. Результаты учитывали после появления хлопьев в контроле слабоположительной сыворотки.

Учет МРП. В лунке слабоположительной сыворотки образовалось небольшое количество мелких хлопьев (+). В опытной лунке №3 есть крупные хлопья (МРП «+» с сыворотка обследованного №3 содержит антитела к кардиолипиновому АГ).

Протокол №27. Микробио диагностика сифилиса.

В качестве материала от больного с подозрением на сифилис на 4-й неделе габолевания взяли отделяемое твердого шанкра и сыворотку крови. В отделяемом твердого шанкра проводили обнаружение возбудителя (окраска по Романовскому-Гимзе и темно-полевая микроскопия) и его генома (ПЦР). Для обнаружения T.pallidum делали фиксированный мазок по Романовскому-Гимзе, рассматривали под световым микроскопом. Для темно-польной микроскопии делали «раздавленную каплю». В мазках – подвижные извитые микробы на темном фоне. Для обнаружения генома (ДНК) ставили ПЦР с использованием праймеров – «+». В сыворотке крови определяли антиген к специфическим антигенам возбудителя – ставили непрямую ИФА для обнаружения суммарных специфических антител (IgM+IgG). По завершении ИФА реакцию остановили с помощью стоп-реагентов и сделали учет. Результат «+»: в сыворотке есть суммарные специфические антитела к возбудителю. Для установки периода заболевания ставили непрямой ИФА для установки уровня специфических IgM и IgG. По завершении ИФА остановили с помощью стоп-реагента и произвели учет мультисканом: есть специфические IgM и IgG к возбудителю.