Протокол №21. Подозрение на дизентерию (Shigella sonnei).

1 этап. Отобрали испражнения с помощью ложки-шпателя сразу после дефекации из дезинфицированого судна, на дно которого положили лист чистой бумаги. Из материала сделали суспензию с 0,9% NaCl и оставили на 30мин для оседания крупных частиц. Надосадочную жидкость засевали на пластинки дифференциально-селективные среды Эндо и Плоскирева, висмут-сульфитный агар, на селенитовую среду обогащения. Посевы поставили в термостат при +37С на 1-2сут.

2 этап. Учет роста:

• На средах Эндо и Плоскирева – мелкие, прозрачные, бесцветные колонии

• На висмут-сульфите нет роста

• На селенитовой среде – диффузное помутнение

В мазке из колоний нашли Гр- палочки. Колонии отсеяли на среду Олькеницкого. Посевы поставили в термостат при +37С на стуки.

3 этап. Учет роста. В среде Олькеницкого – изменение цвета в «столбике» с красно-оранжевого на желтый без пузырьков газа; скошенная часть не поменяла цвет; без почернения. Для контроля чистоты сделали мазки – Гр- палочки. Для изучения ферментативных свойств отсеяли чистую культуру в среды минимально дифференцирующего ряда с углеводами, многоатомными спиртами, аминокислотами. На скошенный МПА для серотипирования. Сделали посевы для определения чувствительности к дизентерийному бактериофагу и АБ. Посевы поставили в термостат при +37С на сутки.

4 этап. Учет ферментативных свойств:

• Глюкоза (Г) –

• Лактоза +

• Маннит +

• Сахароза –

• Дульцит –

• Индол –

• Н2S –

• Орнитин –

• Лизин –

• Цитрат Симмонса –

• Ацетат Na –

Серотипировали культуры на МПА в реакции слайд-АГГ с шигеллезными сыворотками:

• Поливалентной ФЗН (Флекснер-Зонне-Нью-Кастл) +

• S.flexneri 1-5 –

• S.flexneri 6 –

• S.sonnei 1-2 +

Учет чувствительности к поливалентному дизентерийному бактериофагу: в месте нанесения бактериофага – зона лизиса на «сплошном газон». Идентифицировали культуру по ферментативным и АГ свойствам и чувствительности к дизентерийному фагу.

Протокол №22. Подозрение на эширихиоз (Eshirichia coli).

1 этап. Отобрали испражнения с помощью ложки-шпателя сразу после дефекации из дезинфицированого судна, на дно которого положили лист чистой бумаги. Из материала сделали суспензию с 0,9% NaCl и оставили на 30мин для оседания крупных частиц. Надосадочную жидкость засевали на пластинки дифференциально-селективные среды Эндо и Плоскирева, висмут-сульфитный агар, на селенитовую среду обогащения. Посевы поставили в термостат при +37С на 1-2сут.

2 этап. Учет роста:

• На среде Эндо и Плоскерива – lac+, темно-красные с металлическим блеском и lac- бесцветные колонии

• На висмут-сульфите – коричневые колонии, при снятии петлей нет отпечатка на среде

• На селенитовой среде – диффузное помутнение

Из колоний сделали мазки – Гр- палочки. На стекле провели РА поливалентной ОКА-эшерихиозной сывороткой – «+» результат с lac- колониями. Посевы поставили в термостат при +37С на сутки.

3 этап. Учет роста. В среде Олькеницкого изменился цвет среды в «столбике» с красно-оранжевого на желтый с пузырьками газа; скошенная часть не поменяла цвет; почернения нет. Для контроля чистоты культуры сделали мазки – Гр- палочки. Для изучения ферментативных свойств чистую культуру отсеяли в среды минимального дифферецирующего ряда с углеводами, многоатомными спиртами, аминокислотами. Серотипирование чистой культуры с эширихиозными поливалентными ОКА-сыворотками в слайд-АГГ:

• ОКА +

• ОКВ +

• ОКС –

• ОКД –

• КОЕ –

Доп реакции слайд-АГГ с монорецепторными сыворотками, входящими в поливалентные сыворотки ОКВ:

• О20:К84 –

• О26:К60 +

• О55:К59 –

• О111аб:К58 –

Для подтверждения результатов РА на стекле в 2 рядах пробирок ставят развернутую РА с живой и прогретой кульутрой и монорецепторной сывороткой О26:К60. Посеяли чистую культуру для определения чувствительности к АБ диско-диффузионным методом. Посевы поставили в термостат при +37С на сутки.

4 этап. Учет ферментативных свойств:

• Глюкоза (газ) +

• Лактоза –

• Маннит +

• Сахароза –

• Дульцит +

• Индол +

• Н2S –

• Орнитин +

• Лизин +

• Цитрат Симмонса –

• Ацетат Na +

Учет роста РА. Титр живой культуры с сывороткой О26:К60 1/1600. Титр гретой культуры с сывороткой О26:К60 1/400. Идентифицировали культуру по ферментативным и АГ свойствам.

Протокол №20. Подозрение на брюшной тиф (Salmonella enterica tiphy).

1 этап. В разгар лихорадки у больного из локтевой вены взяли кровь и сразу засеяли во флакон со средой Раппопорт. Просматривали ежедневно до появления признаков роста. Из крови сделали мазок «толстой каплей», окрасили по Граму – небольшие Гр- палочки при микроскопии.

2 этап. Через 24ч видно помутнение и покраснение среды Раппопорт без пузырьков газа в поплавке. Культуру высеяли на 2 среды: пластинку агара Эндо и в полиуглеводную среду Олькеницкого для первичной бх идентификации. Посевы поставили в термостат при +37С на 1-2сту.

3 этап. Учет роста. На пластинке Эндо – прозрачные, мелкие, бесцветные, lac- колонии. В среде Олькеницкого изменился цвет в «столбике» с красно-орнажевого на желтый, без пузырьков газа; скошенная часть не изменила цвет; на границе «столбика» и скошенной части – черное кольцо. Для контроля чистоты готовили мазки – Гр- палочки. Для изучения ферментативных свойств отсеяли в среды минимального дифференцирующего ряда с углеводами, многоатомными спиртами, аминокислотами. На скошенный МПА – для серотипирования. Сделали посевы для определения чувствительности к сальмонеллезному фагу и АБ.

4 этап. Учет ферментативных свойств:

• Глюкоза (газ) –

• Лактоза –

• Сахароза –

• Дульцит –

• Индол –

• H2S +

• Орнитин –

• Лизин +

• Цитрат Симмонса –

• Ацетат Na

Серотипировали в реакции слайд-АГГ с сальмонеллезными сыворотками:

• Поливалентная АВСDE +

• О9, О12, Оvi +

• О2, О4, О6, О7 –

• Hd +

Учет чувствительности к поливалентному сальмонеллезному фагу: в месте нанесения фага зона лизиса. Идентифицировали культуру по ферментативным и АГ свойствам, по чувствительности к фагу.

Протокол №23. Холерное вибрионосительство (Vibrio cholera биовар El-Tor серовар Огава).

1 этап. Отобрали испражнения с помощью ложки-шпателя сразу после дефекации из продезинфицированого судна, на дно которого положили лист чистой бумаги. Посеяли:

• Нативные фекалии внесли во флакон с 1% пептонной водой (1-я среда накопления)

• Фекалии суспендировали в 0,9% физ. р-ре, оставили на 30мин для укрупнения частиц, после посеяли надосадочную жидкость на ЩА и элективную среду TCBS

Флаконы поместили в термостат на 6-8ч, чашки на 12-18ч при +37С.

2 этап. Учет роста. Во флаконе – нежная пленка. Сделали высев на пластинки ЩА и TCBS, а также во 2-ю среду накопления.

3 этап. Учет роста. В пробирке со 2-ой пептонной водой – нежная пленка; на ЩА через 12ч – S-колонии, круглые, гладкие, плоские, голубоватые, с ровными краями, прозрачные, мелкие; на TCBS через 18ч – желтые колонии. Из выросшей культуры сделали мазок – Гр- изогнутые и прямые палочки; в «раздавленной капле» при темнопольной микроскопии – подвижные вибрионы. Оксидазная активность «+». Колони агглюттинировали холерными сыворотками (1:50):

• О1 +

• О139 –

• Огава +

• Инаба –

Предварительный ответ об обнаружении холерного вибриона О1. Колонии с «+» результатами отсеяли на полиуглеводную лактозо-сахарозную среду и на сектор пластинки ЩА для накопления. Посевы поставили в термостат при +37С на 10-12ч.

4 этап. Учет роста. В пробирке с лактозно-сахарозной средой изменился цвет столбика при сохранении цвета скошенной части, без газа:

• Лактоза –

• Сахароза +

На ЩА – полупрозрачные, нежные, бесцветные колонии. Для проверки чистоты колонии из ЩА сделали мазок – Гр- изогнутые и прямые палочки. Повторили агглютинацию холерными сыворотками:

• О1 (1:100) +

• О139 –

• Огава (1:50) +

• Инаба (1:50) +

Идентифицировали выделенные культуры по фенотипическим признакам посевами на:

• Пластинку ЩА с полимиксином

• ЩА «сплошным газоном» и нанесли по секторам по капле холерных фагов «С» и Эль-Тор

• Среды Гисса с сахарозной, маннозой, арабинозой

Посевы поставили в термостат при +37С на 10-12ч.

5 этап. Учет фенотипической идентификации:

• Рост на ЩА с полимиксином +

• Чувствительность к фагу «С» -

• Чувствительность к фагу Эль-Тор +

• Сахароза +

• Манноза +

• Арабиноза –