Частная бактериология

571

При постановке РСК с трепонемным антигеном (РСКт) используется озвученный ультразвуком антиген, полученный из нескольких штаммов бледной трепонемы. При постановке РСК с кардиолипиновым антигеном (РСКк) применяют антиген, представляющий собой высокоочищенный спиртовой экстракт из мышц бычьего сердца (рисунок 8.23).

Рисунок 8.23 – Кардиолипиновый антиген для РСК. Заимствовано из Интернетресурсов.

В нашей стране реакция Вассерманна входила в состав комплекса стандартных серологических реакций на сифилис, однако в последние годы практически не используется. За рубежом эта реакция в клинической лабораторной практике не применяется.

Нетрепонемные тесты направлены на выявление антител к липидам разрушенных мембран трепонем или тканей хозяина. Для постановки этих реакций используют только кардиолипиновый антиген. Комплексы антигена с антителами (если таковые имеются) выпадают в осадок. Эти тесты не всегда являются специфичными в отношении сифилиса, но они в большинстве случаев позволяют установить предварительный диагноз. К нетрепонемным тестам относятся:

-реакция Вассерманна, реакция связывания комплемента с кардиолипиновым антигеном - РСКк;

-TRUST (Toluidin Red Unheated Serum Test) - тест с толуидиновым красным

инепрогретой сывороткой;

-USR (Unheated Serum Reagins) – тест определения активных реагинов

плазмы;

-VDRL (Veneral Disease Research Laboratory - лаборатория изучения венерических заболеваний – лаборатория разработчик метода) – микрофлокуляционный тест;

-RPR (Rapid Plasma Reagin) – тест быстрых плазменных реагинов или быстрый плазмареагиновый тест (отечественный аналог - микрореакция преципитации, МРП).

TRUST представляет собой макрофлокуляционный нетрепонемный тест на картонных карточках. Антиген для данного теста сорбирован на мелкодисперсной суспензии красителя толуидинового красного. Реакция проводится с плазмой или сывороткой крови.

572

USR относится к группе микрофлокуляционных тестов. Он отличается от VDRL модификацией антигена: в него добавлены холинхлорид и ЭДТА. USR-тест ставится как с непрогретой сывороткой, так и с плазмой. Учет результатов теста проводится под микроскопом.

VDRL относится к группе микрофлокуляционных тестов. Исследуемая сыворотка и антиген смешиваются в лунках стеклянной пластинки. Образующиеся комплексы “кардиолипиновый антиген – антитело” выявляются в виде мелких хлопьев. Набор для проведения данного теста представлен на рисунке 8.24.

Рисунок 8.24 – Набор для проведения VDRL-теста. Заимствовано из Интернетресурсов.

RPR-тест осуществляется либо на пластиковых планшетах, либо на картонных карточках с неглубокими лунками (рисунок 8.25).

Рисунок 8.25 – Набор для проведения RPR-теста. Заимствовано из Интернетресурсов.

Каплю исследуемой плазмы или сыворотки крови смешивают в лунке с каплей стандартного кардиолипинового антигена, сорбированного на визуализирующем агенте - частичках угля (RPR-антиген). Затем планшету вращают на орбитальном ротаторе для равномерного перемещения реагентов. При взаимодействии антител и антигенов происходит склеивание мелких частичек угля

иобразование агрегатов. Результаты RPR-теста:

-положительный - при образовании средних и больших агрегатов;

-слабо положительный – при появлении редких небольших агрегатов;

-отрицательный - ровная серая поверхность без видимых агрегатов.

573

Автоматизированной модификацией RPR-теста является автоматизированный реагиновый тест (ART – Automated Reagin Test).

Отечественным аналогом RPR-теста является LUES-тест производства “Диагностические системы”.

МРП. В основе МРП лежит образование преципитата в виде хлопьев белого цвета при добавлении кардиолипинового антигена к плазме или сыворотке крови больного сифилисом. Результаты реакции могут быть положительными (++++, +++,

++) или отрицательными. Для реакции микропреципитации выпускается кардиолипиновый антиген АКРЕМИТ - раствор трех высокоочищенных липидов (кардиолипина, лецитина и холестерина) в этиловом спирте.

При положительном нетрепонемном тесте диагноз “сифилис” должен быть обязательно подтвержден трепонемным тестом.

Трепонемные тесты предполагают использование специфических антигенов трепонем. Они применяются для подтверждения диагноза, являются более специфичными и чувствительными. К ним относятся:

-реакция пассивной гемагглютинации (РПГА, TPHA - Treponema pallidum haemagglutination assay);

-реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ или РИТ, TPI - Treponema pallidum immobilization test);

-реакция иммунофлюоресценции (РИФ, FTA - Fluorescent treponemal

antibody);

-иммуноферментный анализ (ИФА);

-иммуноблот.

РПГА основана на склеивании эритроцитов (гемагглютинации), соединенных с антигеном T. pallidum, при добавлении к ним антител сыворотки крови больных сифилисом.

Результаты реакции оцениваются следующим образом:

-кольцо из агглютинированных эритроцитов в виде “зонтика” – положительный результат (++++, +++, ++);

-неплотное кольцо, эритроциты образуют рыхлый осадок на дне лунки – сомнительный результат (±, +);

-отсутствие агглютинации, эритроциты располагаются на дне лунки в виде ”пуговки” – отрицательный результат (-).

Для проведения РПГА выпускаются коммерческие наборы (рисунок 8.26).

Рисунок 8.26 – Наборы для диагностики сифилиса с помощью РПГА. Заимствовано из Интернет-ресурсов.

574

РИТ (РИБТ, реакция Нельсона-Майера) основана на феномене обездвиживания живых трепонем (трепонемы штамма Никольса, полученные после заражения кроликов в яичко) антитрепонемными антителами, присутствующими в исследуемой сыворотке, и комплементом. Для этого к прогретой сыворотке крови добавляют трепонемы и при микроскопии учитывают количество подвижных и неподвижных трепонем. Результаты реакции:

-иммобилизация трепонем более 50% - ++++;

-иммобилизация трепонем 31-50% - +++;

-иммобилизация трепонем 21-30% - ++;

-иммобилизация трепонем до 20% - отрицательный результат.

В связи с тем, что при постановке этой реакции используются живые патогенные трепонемы, постановка реакции трудоемка и требует наличия вивария, в большинстве стран РИБТ используется не для диагностических целей, а в научноисследовательской работе.

РИФ используется для ранней диагностики сифилиса. Эта реакция дает положительные результаты к концу первой недели с момента инфицирования. Для постановки этой реакции на предметное стекло наносят взвесь живых патогенных бледных трепонем штамма Никольс (из яичка инфицированных кроликов), высушивают и фиксируют ацетоном. На фиксированный препарат наносят исследуемую сыворотку и после экспозиции промывают. Затем препарат обрабатывают меченой флюорохромом сывороткой против иммуноглобулинов человека. При наличии в сыворотке крови больного антитрепонемных антител происходит образование комплекса из фиксированного на стекле возбудителя, антител исследуемой сыворотки и флюоресцирующего компонента (сыворотка против иммуноглобулинов, меченая флюорохромом). При исследовании в люминесцентном микроскопе обнаруживаются светящиеся трепонемы (рисунок

8.27).

Результаты теста определяются по интенсивности свечения:

-желто-зеленое яркое свечение - ++++;

-зеленое свечение - +++;

-бледно-зеленое свечение - ++;

-еле заметное свечение - +;

-отсутствие свечения – отрицательный результат.

Рисунок 8.27 – Реакция иммунофлюоресценции. Заимствовано из Интернетресурсов.

576

Скринингу на сифилис подвергаются:

-беременные женщины;

-доноры крови и органов для трансплантации;

-работники питания, образования, здравоохранения;

-военнослужащие;

-лица, отбывающие наказание в местах лишения свободы;

-лица, поступающие на стационарное лечение;

-больные, готовящиеся к хирургическому вмешательству. Диагностика на сифилис (подтверждение сифилиса) проводится:

-лицам, имеющим клинические симптомы сифилиса;

-лицам с любыми генитальными язвами;

-половым партнерам больных сифилисом;

-детям, родившимся от матерей, больных сифилисом;

-для подтверждения диагноза сифилиса.

Лечение. Основным методом лечения сифилиса является антибиотикотерапия. Применяют антибиотики пенициллинового ряда. Можно использовать эритромицин, цефалоспорины. Наряду с антибиотиками используются висмутсодержащие препараты. Чем раньше начато лечение, тем лучше результаты.

Профилактика сифилиса заключается в раннем выявлении и лечении источников инфекции, половой гигиене, тестировании донорской крови. Специфических средств профилактики сифилиса не разработано.

Вопросы для контроля усвоения материала

1.Строение и тинкториальные свойства трепонем.

2.Культуральные и биохимические особенности бледной трепонемы.

3.Факторы патогенности бледной трепонемы и патогенез сифилиса.

4.Эпидемиология сифилиса.

5.Клинические проявления сифилиса.

6.Методы лабораторной диагностики сифилиса.

7.Принципы лечения и профилактики сифилиса.

Тренировочные тесты

1.Возбудитель сифилиса открыли (один правильный ответ): 1.1 Л. Пастер

1.2 Р. Кох

1.3 Ф. Шаудинн и Э. Хоффманн

1.4 Л.С. Ценковский

1.5 А. Нейссер

2.Возбудитель сифилиса относится к семейству (один правильный ответ):

2.1 Rickettsiaceae

2.2 Spirochaetaceae

2.3 Spirillaceae

2.4 Vibrionaceae

577

2.5 Enterobacteriaceae

3.Возбудитель сифилиса относится к роду (один правильный ответ): 3.1 Vibrio

3.2 Salmonella

3.3 Escherichia

3.4 Brucella

3.5 Treponema

4.Возбудитель сифилиса (один правильный ответ):

4.1V. cholerae

4.2F. tularensis

4.3T. pallidum

4.4B. anthracis

4.5Y. pestis

5.Возбудитель сифилиса (один правильный ответ): 5.1 Treponema denticola

5.2 Treponema vincentii

5.3 Treponema pallidum

5.4 Treponema carateum

5.5 Treponema bryantii

6.Возбудитель сифилиса представляет собой (один правильный ответ): 6.1 грамположительную палочку 6.2 спирохету 6.3 грамотрицательный кокк

6.4 грамположительный кокк

6.5 спорообразующую палочку

7.Для трепонем характерно (несколько правильных ответов):

7.1образование спор

7.2наличие фибрилл

7.3окраска по Граму в фиолетовый цвет

7.4наличие нескольких плазмид

7.5наличие блефаропластов

8. Для трепонем характерно (несколько правильных ответов):

8.1наличие равномерно расположенных завитков

8.2количество завитков 8-12

8.3количество завитков 1

8.4возможность образования L-форм

8.5внутриклеточное расположение в организме

9. Бледная трепонема (несколько правильных ответов): 9.1 образует споры

578

9.2образует цисты покоя

9.3неподвижная

9.4грамположительная

9.5имеет 8-12 завитков

10. Факторами патогенности трепонем являются (несколько правильных ответов):

10.1редкие белки наружной мембраны

10.2экзотоксины

10.3устойчивость к солям

10.4устойчивость к антибиотикам

10.5фибриллы

11. Основной путь заражения человека сифилисом (один правильный ответ):

11.1пищевой

11.2водный

11.3половой

11.4инъекционный

11.5трансмиссивный

12. Пути передачи при сифилисе (несколько правильных ответов):

12.1трансмиссивный

12.2алиментарный

12.3половой

12.4воздушно-капельный

12.5трансплацентарный

13. Источник заражения человека сифилисом (один правильный ответ):

13.1пищевые продукты

13.2вода

13.3больной сифилисом человек

13.4животные

13.5почва

14. В диагностике сифилиса используется реакция (один правильный ответ):

14.1Манту

14.2Пирке

14.3Вассерманна

14.4Райта

14.5Асколи

15. Диагноз первичного сифилиса подтверждают с помощью (один правильный ответ):

15.1реакции Манту

15.2реакции Видаля

15.3микроскопии в тёмном поле

15.4микроскопии окрашенных по Граму мазков

579

15.5 реакции преципитации

16. Для сифилиса характерно (один правильный ответ):

16.1высокая устойчивость возбудителя к окружающей среде

16.2передача возбудителя половым путем

16.3формирование стойкого иммунитета

16.4передача возбудителя алиментарным путем

16.5передача возбудителя воздушно-капельным путем

17. Для вторичного сифилиса характерно (один правильный ответ):

17.1наличие карбункула

17.2образование твердого шанкра

17.3поражение центральной нервной системы

17.4генерализованный характер инфекции

17.5формирование стойкого иммунитета

18. Образование твердого шанкра при сифилисе характерно для (один правильный ответ):

18.1инкубационного периода

18.2первичного сифилиса

18.3вторичного сифилиса

18.4третичного сифилиса

18.5нейросифилиса

19. Появление высыпаний в виде папулы, везикулы и пустулы при сифилисе характерно для (один правильный ответ):

19.1инкубационного периода

19.2первичного сифилиса

19.3вторичного сифилиса

19.4третичного сифилиса

19.5нейросифилиса

20. Формирование гумм при сифилисе характерно для (один правильный ответ):

20.1инкубационного периода

20.2первичного сифилиса

20.3вторичного сифилиса

20.4третичного сифилиса

20.5продромального периода

21. Проявление сифилиса в форме прогрессивного паралича характерно для (один правильный ответ):

21.1инкубационного периода

21.2первичного сифилиса

21.3вторичного сифилиса

21.4продромального периода

21.5нейросифилиса

580

22. Проявление сифилиса в форме спинной сухотки характерно для (один правильный ответ):

22.1инкубационного периода

22.2первичного сифилиса

22.3вторичного сифилиса

22.4нейросифилиса

22.5периода реконвалесценции

23.Диагностика вторичного и третичного сифилиса включает (один правильный ответ):

23.1 выявление ГЧЗТ

23.2 выявление антител

23.3 выделение чистой культуры

23.4 обнаружение возбудителя

23.5 не проводится

24.Диагностика первичного сифилиса включает (один правильный ответ):

24.1выделение чистой культуры

24.2биопробу на кроликах

24.3темнопольную микроскопию отделяемого шанкра

24.4выявление антител

24.5обнаружение возбудителя в крови

25.В диагностике сифилиса используются (несколько правильных ответов): 25.1 реакция кольцепреципитации 25.2 микрореакция преципитации 25.3 реакция иммобилизации трепонем 25.4 окраска по Цилю-Нельсену 25.5 окраска по Бурри-Гинсу

26.Специфическая профилактика сифилиса проводится с помощью (один правильный ответ):

26.1 живой вакцины

26.2 убитой вакцины

26.3 не разработана

26.4 химической вакцины

26.5 антибиотиков

Правильные ответы: 1.3; 2.2; 3.5; 4.3; 5.3; 6.2; 7.2, 7.5; 8.1, 8.2, 8.4; 9.2, 9.5; 10.1, 10.5;

11.3; 12.3, 12.5; 13.3; 14.3; 15.3; 16.2; 17.4; 18.2; 19.3; 20.4; 21.5; 22.4; 23.2; 24.3; 25.2, 25.3; 26.3.