3. Методы выделения из растительного сырья.

Кумарины

Этиловый и метиловый спирты позволяют извлекать как агликоны, так и гликозиды кумаринов. Исчерпывающая экстракция агликонов возможна с использованием хлороформа, диэтилового эфира, ацетона, а в некоторых случаях – петролейного эфира, гексана.

Для отделения кумаринов от сопутствующих веществ сконцентрированный экстракт из ЛРС обрабатывают 0.5% р-ром КОН для удаления фенольных компонентов и др. веществ, имеющих кислотные свойства

Затем экстракт обрабатывается 5% водно-спиртовым раствором КОН в теч. 1-2 ч. При этом кумарины образуют соли кумариновых кислот.

Одновременно исходят и другие реакции, а именно: омыление жиров и других сложных эфиров.

Индифферентные составные части экстракта (стерины, спирты, углеводороды и др.) удаляются обработкой хлороформом щелочного раствора, разбавленного предварительно 6-8-кратным количеством воды.

Водно-щелочной раствор подкисляется разб. HCl, в результате чего присутствующие кумариновые кислоты переходят с отщеплением воды в кумарины, которые затем извлекают с помощью хлороформа или другого органического растворителя.

Затем сумму кумаринов подвергают дальнейшей очистке и разделению с использованием колоночной хроматографии, в качестве сорбента чаще всего используют оксид алюминия и силикагель, а в качестве элюента - смеси р-лей: гексан-хлорформ, хлороформ-метанол, хлороформ-этанол в различных соотношениях (в зависимости от химической природы кумаринов).

Дубильные вещества

1. Экстракция растительного материала орг. растворителями: обрабатывают сырье петролейным эфиром, бензолом или смесью бензол-хлороформ (1:1) для удаления основной массы хлорофилла, терпеноидов и липидов → экстрагируют этиловым эфиром, который извлекает некоторые фенольные соединения, в т.ч. оксикоричные кислоты и катехины → проводят экстракцию этилацетатом, в результате которой в экстракт переходят лейкоантоцианы, димерные проантоцианидины, эфиры оксикоричных кислот и др. → растительный материал экстрагируют метиловым или этиловым спиртом, при этом в раствор переходят многие дубильные вещества и другие фенольные соединения.

2. Выделение фенольных соединений, в т.ч. и некоторых компонентов дубильных веществ, осаждением из водных или спирто-водных растворов солями свинца. Полученные осадки затем обрабатывают разбавленной H2SO4. Суммарные извлечения дубильных веществ разделяют на индивидуальные компоненты с помощью хроматографических методов.

3. Для более детальной идентификации используют: УФ, ИК (инфракрасной) и ПМР (протонно-магнитного резонанса) методы.

4.Качественный анализ сырья.

Кумарины

1. Реакция со щелочью: к спирт. извлечению прибавляют 10% спиртового раствора NaOH или КОН и нагревают на водяной бане несколько минут. При наличии кумаринов раствор желтеет.

2. Лактонная проба: является продолжением реакции со щелочью. К содержимому пробирки добавляют 5-10 мл дистиллированной воды и перемешивают. После прибавления 10% HCl наблюдается помутнение или, реже, выпадение осадка, что свидетельствует о вероятном присутствии кумаринов.

3. Реакция с диазореактивом (по Кузнецовой): к спирт. извлечению прибавляют 10% спирт. р-ра NaOH или KOН, нагревают на водяной бане и затем прибавляют неск. капель р-р диазобензолсульфокислоты или свежеприготовленного диазореактипа. При наличии кумарииов раствор окрашивается от оранжево-красного до вишневого цвета.

4. Флуоресценция в УФ свете: спиртовое извлечение помещают в пробирку и посматривают в УФ свете при длине волны 366 нм. Кумарины, в зависимости от строения, имеют синюю, голубую, фиолетовую или желто-зеленую флуоресценцию, которая усиливается после прибавления щелочи.

Хромоны

1. Реакция с раствором уранилацетата. При взаимодействии с водным р-ром уранилацетата хромоны, в зависимости от структуры, образуют окрашенные растворы (оранжевые, красные, фиолетовые) или желтый осадок.

2. Борно-лимонная реакция. Хромоны, в отличие от флавоноидов, не дают реакцию со смесью кислот борной и лимонной.

Хромоны обнаруживают в растительных экстрактах при помощи микрохимических реакций. С концентрированными кислотами (серной, хлористоводородной, о-фосфорной) хромоны образуют оксониевые соли, окрашенные в лимонно-желтый цвет. В реакциях с конц. щелочами хромоны приобретают пурпурно-красное окрашивание. Для обнаружения хромонов также широко используют хроматографический метод.

Дубильные вещества

Для качественного определения предварительно используют водное извлечение. Реакции осаждения:

1. Образование осадков с растворами желатина (образуется муть, исчезающая при добавлении избытка реактива)

2. Образование осадков с растворами алкалоидов (положено в основу использования дубильных веществ в качестве противоядия при отравлении алкалоидами. В результате появляется осадок)

3. Образование осадков с растворами солей тяжелых металлов (с ацетатом свинца образуется желтый осадок)

4. Реакция с бромной водой (Конденсированные дубильные в-ва образуют желтооранжевый осадок)

Цветные реакции:

1.Реакция с р-ром железоаммониевых квасцов (или хлорида окисного железа): Гидролизуемые – черно-синее окрашивание Конденсированные – черно-зеленое 2.Реакция с диазореактивом. При этом, как и в случае с другими фенольными в-вами, развивается различная окраска (коричневая и т.д.).

3.Реакция с формальдегидом в присутствии HCl. Конденсированные дубильные в-ва – образуется кирпично-красный осадок. Гидролизуемые дубильные в-ва – синее или фиолетовой окрашивание.

4.Реакция c NaNO3 и HCl. Гидролизуемые дубильные в-ва дают коричневое окраш-е 5.Реакция с уксусной к-той и ацетатом свинца. Гидролизуемые дубильные в-ва образуют осадок. При наличии конденсированных дубильных веществ фильтрат окрасится в черно-зеленый цвет от прибавления р-ра железоаммонийных квасцов и ацетата свинца. 6.Реакция с бихроматом калия. Наблюдается потемнение раствора или выпадение желто-коричневого осадка.

7.Реакция с раствором Фолина - Дениса (смесь фосфорномолибденовой и фосфорновольфрамовой кислот). Образуется вольфрамовая или молибденовая синь.