6. При получении генноинженерного инсулина:
В лабораториях одной из зарубежных фирм разработана схема получения рекомбинантного инсулина, основанная на раздельном биосинтезе двух его цепей; каждая цепь синтезируется в отдельной культуре Escherichiacoli. Предварительно на основе плазмид конструировались векторы (один - для гена цепи А, другой - для гена цепи В). К каждой последовательности присоединялся триплет, соответствующий метионину и нуклеотидам гена индуцибельного фермента бетагалактозидазы, включая оперон. Таким образом, между нуклеотидными последовательностями цепей А, В и бетагалактозидазы оказывался метиониновый триплет. Это обстоятельство является очень важным для завершающей стадии работы. Ферментация двух культур с вектором несущим цепь А и вектором несущим цепь В, проводилась на среде с лактозой (индуктором синтеза бетагалактозидазы). Если не расщепить глюкозу, то она может быть использована организмом как источник энергии. Поскольку бетагалактозидаза и цепь А (или В) имели в векторе общий промотор, то накопление бетагалактозидазы сопровождалось накоплением больших количеств связанной с ней цепи А (В). По окончании ферментации из двух культур выделялись два белка: цепь А плюс бетагалактозидаза и цепь В плюс бетагалактозидаза. Метиониновый остаток, связывающий каждую инсулиновую цепь с бетагалактозидазой, разрушался с помощью ВrCN, а инсулиновые цепи при этом освобождались и выделялись.
Ситуационная задача 9
1. На фармацевтическое предприятие поступили партия крапивы листьев «ангро» и субстанция анальгина для производства готовых лекарственных средств. Предварительно в лаборатории ОТК был проведен контроль качества сырья и субстанции.
К сырье обнаружен витамин К1. Числовые показатели в пределах нормы. Вывод сырье можно использовать для производства фарм препаратов.
Витамин К1(филлохинон) — вязкое маслообразное вещество желтого цвета, за счетп→π* перехода и электроно-акцепторного характера их π-системы. При освещении аргоновой лампой флюоресцирует.
Листья крапивы фармакологическая группа – коагулянты, гемостатики.
Folia Urticae – листья крапивы двудомной
Крапива двудомная Urtica dioica
Сем. Крапивные – Urticaceae
Под названием «Лист» в фармацевтической практике понимают лекарственное сырье, представляющее собой высушенные листья или отдельные листочки сложного листа.
Качество сырья регламентируется ФС в ГФ 11, вып.2.
2 Сырье «Листья крапивы» в фармацевтическом производстве используется для получения густого экстракта.
Экстракт крапивы густой- Extractum Urtiсae spissum
Технологическая схема:
Включает такие стадии производства:
1. Подготовка растительного сырья (измельчение, просеивание, взвешивание);
2. Подготовка экстрагента (водно-спиртовые смеси);
3. Получение первичной вытяжки;
4. Очистка вытяжки от балластных веществ (отстаивание, фильтрация, спиртоочистка и др.);
5. Выпаривание;
6. Стандартизация (анализ, доведение до кондиции);
7. Фасовка и упаковка.
Готовят реперколяцией листьев крапивы двудомной на 70% спирте. Влажность экстракта - не более 30%.
Измельчение проводят с помощью траворезок, просеивание на вибросите. Приготавливают экстрагент 70% спирт этиловый.
Быстротекущая реперколяция, осуществляется в батарее перколяторов, работающих на принципе противотока. Батарея состоит из нескольких перколяторов (обычно 5-6), сборника с экстрагентом и приемника для вытяжки, коммуницированных между собой так, что получается кольцевая линия, позволяющая подавать экстрагент и сливать вытяжку из любого перколятора. Экстрагент, поступающий в один из перколяторов, может быть пропущен последовательно через всю батарею.
После вытяжку подвергают очистке. Иногда применяют адсорбенты (каолин, бентониты, тальк и т. п.) или сочетание адсорбентов с кипячением. Часто применяют способ удаления балластных веществ путем осаждения их спиртом. Спиртоочисткапроводится с предварительным упариванием вытяжек до половинного объема по отношению к массе исходного сырья. После охлаждения к ней добавляют двойной объем крепкого (95-96%) этанола. Все тщательно перемешивают и оставляют на 5-6 дней при температуре не выше 10°С. Отстоявшийся слой сливают с осадка и фильтруют. Очищенную вытяжку, при необходимости, подвергают дальнейшему сгущению.
Очищенные вытяжки упаривают под вакуумом при температуре 50—60 °С и разрежении 600—650 мм рт. ст. до требуем консистенции. При сгущении спиртовых вытяжек вначале отгоняют спирт, не включая ваккуум.
Аппаратура, используемая для упаривания вытяжек фармацевтическом производстве, имеет свои особенности Объясняется это тем, что в вытяжке содержатся биологически активные вещества, которые при упаривании могут осаждаться, на стенках выпарных аппаратов, обогреваемых паром, и теряя свою активность из-за высокой температуры стенок. Поэтому аппараты, в которых нет циркуляции упариваемой вытяжки или есть слабая циркуляция (как в выпарном кубе), в фармацевтическом производстве применяют крайне редко. Предложенные последние годы конструкции с интенсивной циркуляцией далеко не все широко используются в заводском производстве. Так высокоэффективный центробежный роторно-пленочный аппарат «Центритерм», имея высокую производительность в промышленности, не нашел применения из-за возникающих в процессе работ: вибраций и большого шумового эффекта. Наибольшее применение на этой стадии, как надежные в работе, высокоэффективные, и удобные в обслуживании и малоэнергоемкие нашли такие конструкции, как прямоточный роторный, циркуляционный вакуум-выпарной аппарат и пенный испаритель.
Образование пены. Некоторые вытяжки, в особенности содержащие сапонины, при выпаривании в вакууме так сильно пенятся, что создается угроза переброски жидкости в конденсатор. Существуют некоторые практические мероприятия, вполне достаточные для того, чтобы устранить вспенивание или по крайней мере понизить его. Прежде всего пространство для пара по отношению к пространству для жидкости должно быть достаточно велико, чтобы пена имела возможность подниматься в высоту; это способствует слиянию ее пузырьков. В трубчатых аппаратах смеси пены и жидкости придают большую скорость и направляют ее на отражательную поверхность, причем пена уничтожается при ударе.
Значительно меньше пены образуется при работе в аппаратах с мешалкой, которая полностью или частично погружена в пену. Существуют приемы для уменьшения пены, основанные на том, что время от времени в испаритель впускают воздух через воздушный кран; при этом от понижения разрежения пена сбивается. Уменьшает пенообразование также тщательное фильтрование жидкости перед выпаркой.
Брызгоунос. При выпаривании может произойти потеря жидкости за счет брызгоуноса, который или возникает из-за пены, или вызывается очень большой скоростью пара, механически увлекающего с собой капельки жидкости. Брызгоунос можно уменьшить, понизив скорость пара настолько, чтобы скорость падения капель жидкости, увлеченных в паровую камеру, была больше скорости пара. Кроме того, применяют специальные ловушки для капель, а также для переброшенной жидкости. Ловушки ставятся между испарителем и конденсатором. Существует много конструкций ловушек. В частности, в некоторых из них пар и увлеченные им капли жидкости проходят зигзагообразный путь.
Образование накипи (инкрустация). При сгущении некоторых вытяжек возникают затруднения в результате коагуляции веществ, отлагающихся на поверхности нагрева в виде накипи. Накипь понижает производительность выпарного аппарата, уменьшая теплоотдачу. Выпаривание нужно вести так, чтобы накипи образовалось как можно меньше. В трубчатых аппаратах это иногда удается путем усиления циркуляции, в шаровых аппаратах - с помощью погружения внутрь мешалки. После работы аппарат каждый раз нужно очищать от накипи. Для удаления ее применяют различные методы (механические и химические).
3. При определении примеси «аминоантипирин» в одной из серий анальгина по методике ГФ появилось оранжевое окрашивание. Дайте обоснование причинам изменения его качества по данному показателю в соответствии со свойствами. Предложите другие испытания, характеризующие его качество.
Аминоантипирин – является исходным продуктом при синтезе анальгина. Также он может образовываться в результате гидролиза анальгина при хранении во влажном воздухе.
Другие испытания для определения качества для анальгина: прозрачность раствора, кислотность или щелочность, потеря в весе при высушивании, тяжелые металлы, мышьяк.