3 Этап. А. Идентификация выделенной чистой культуры бактерий по биохимическим и антигенным свойствам.

Для этого производят следующие исследования:

а) изучение однородности роста на скошенном МПА;

б) приготовление, окраска мазка по Граму (или фуксином) и микроскопия для проверки чистоты выделенной на скошенном МПА культуры;

в) изучение биохимической активности бактерий: посев выделенной чистой культуры на среды Гисса (для определения сахаролитической активности), желатин и МПБ с индикаторными бумажками на индол, аммиак и сероводород (для выявления протеолитической активности). Инкубация при 37^оС в течение 24 часов.

Примечание: изучение биохимических свойств проводят только при работе с чистой культурой бактерий. При этом определяют свойства каждого выделенного микроорганизма в отдельности. Если при микроскопии мазка из материала со скошенного МПА обнаруживается смесь бактерий, то процедуру выделения чистой культуры бактерий необходимо повторить.

Таблица 5. Ферментативные свойства бактерий

Предполагаемый возбудитель	САХАРОЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА				ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
	Глюкоза	Лактоза	Маннит	Сахароза	Индол	Сероводород
Escherichia coli
Staphylococcus aureus

г) изучение антигенных свойств выделенных бактерий (будет проводиться в разделе:”ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ”).

Б. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков. Инкубация при37^оС в течение 24 часов.

В. Внутривидовая идентификация выделенной чистой культуры бактерий (эпидемиологическое маркирование). Проводится часто с целью определения источника инфекции. С этой целью применяют фаготипирование, рестрикционный анализ, определение плазмидного профиля бактерий и др. исследования.

4 Этап. Учет результатов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ: на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств бактерий, выделенных из исследуемого материала, можно сделать вывод об их принадлежности к виду __________________________ и виду ____________________________________.

Таблица 6. Определение количества бактерий в исследуемом материале (метод серийных разведений)

Разведение материала	10-	10-	10-
Засеваемый объем, мл	0,1	0,1	0,1
Результат (количество колоний):
Расчет:
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: количество бактерий в исследуемом материале _________________ КОЕ/мл

Занятие 6. Дата ______. Тема: «Бактериологический метод исследования (продолжение). Идентификация чистых культур бактерий по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам»

Рисунок 1. Культуральные свойства бактерий. Характер роста бактерий на жидких питательных средах

Пленка на поверхности (аэробы)

Придонный рост (микроаэрофилы)

Диффузный рост (факультативные анаэробы)

Рисунок 2. Культуральные свойства бактерий. Пигменты бактерий

Staphylococcus aureus

S. epidermidis

Micrococcus luteus

Pseudomonas aeruginosa

Serratia marcescens

Занятие 7. Дата ______. Тема: «Бактериологический метод исследования (продолжение). Ферменты бактерий. Идентификация чистых культур бактерий по биохимическим свойствам»

Рисунок 3. Рост бактерий на среде Эндо

Лактозопозитивные бактерии

Лактозонегативные бактерии

Таблица 7. Биохимические свойства стафилококков и эшерихий

Название бактерий	Сахаролитические свойства, рост на средах Гисса с:				Протеолитические свойства, рост на МПБ
	глюкозой	лактозой	маннитом	сахарозой
Незасеянные пробирки
S. aureus
E. coli

Занятие 8. Дата ______. Тема: «Бактериологический метод исследования (окончание). Антибиотики и химиотерапевтические средства. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам»

Таблица 8. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений

Ингредиенты		1	2	3	4	5	6	7	8 контроль
МПБ, в мл		1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
Пенициллин, ЕД/мл		2	1	0,5	0,25	0,125	0,06	0,03	--
Стафилококк		по одной “петле”
Результаты:	Свежеприго-товленный
	5-тидневный
ВЫВОДЫ: 1)минимальная ингибирующая концентрация (МИК) свежеприготовленного пенициллина - ____ЕД/мл; 2) МИК пенициллина, хранившегося в течение 5 дней - ___ЕД/мл. 3)

Таблица 9. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом диффузии в агар (методом дисков)

Вид бактерий	Антибиотик, диаметр зоны задержки роста, мм
	цефалексин	доксициклин
S. aureus
E. coli
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: выделенные бактерии вида Staphylococcus aureus чувствительны к ________________________________________________, устойчивы к ____________________; выделенные бактерии вида Escherichia coli чувствительны к __________________________, устойчивы к ______________________________________________________.

Рисунок 4.Схема определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков

Антибиотики:

• Цефалексин

• 

• 

Занятие 9. Дата ______. Тема: «Генетика бактерий. Механизмы передачи генетической информации у бактерий. Генетические методы диагностики, применяемые в микробиологии. Принципы культивирования облигатных внутриклеточных паразитов»

ОПЫТ ПО ТРАНСДУКЦИИ ОПЫТ ПО ТРАНСФОРМАЦИИ ОПЫТ ПО КОНЪЮГАЦИИ

ДОНОР:	РЕЦИПИЕНТ:	ДОНОР:	РЕЦИПИЕНТ:	ДОНОР:	РЕЦИПИЕНТ:
РЕКОМБИНАНТ:		РЕКОМБИНАНТ:		РЕКОМБИНАНТ:

Питательная среда: Питательная среда: Питательная среда: