otvety_na_bilety_po_ekz

Билет 35

Билет 21

Структура бактериальной клетки: цитоплазма, рибосомы. Строение и

Дыхание м/орг. Дыхательная цепь. Методы культивирования

анаэробов

функции. Включения. Способы выявления.

Энергетический метаболизм(катаболизм) — это поток р-ции

Цитоплазма прокариотической клетки по составу схожа с

сопровождающихся распадом крупных молекул на более мелкие с

выделением энергии и запасанием получаемой энергии в форме

эукариотической. Явл гомогенной коллоидной субстанцией , которая

макроэргических молекул -АТФ, АДФ, ЦТФ и др. Главные из них

содержит набор растворимых РНК, ферментных белков, продуктов и

-АТФ, которые в дальнейшем расходуются для биосинтеза, активного

субстатов метаболизма и различных структурных компонентов

движения, осморегуляции и тп.

клетки.(в мазках цитоплазма почти не окрашивается, может давать

Основным

способом

получения

энергии

для

большинства

м/орг

легкий розовый оттеннок)

является

дыхание(окислительно

фосфорилирование)

и

Рибосомы представляют собой систему синтеза белков,

брожение(субстратное фосфорилирование).

располагаются свободно в цитоплазме клетки в виде целых рибосом

Дыхание — это метаболичсекий процесс, идущий с образованием

размером 20нм и константой седиментации 70S или в виде двух

АТФ путем окислительного фосфорилирования,

сопряженного с

субъединиц 30S и 50S; в процессе синтеза белка рибосомы с

функционирвоанием

электронно-транспортной

цепи, при

котором

помощью иРНК собираются в полисомы, часто связанные с ЦПМ;

органические и неорганические соед служат донорами электронов, а

рибосомы видны только в электронный микроскоп.

конечным акцептором является в основном неорг соед. Главную роль

Зерна Волютина явл внутриклеточными включениями, содержащими

в дыхании

играет

дыхательная

цепь.

Она

содержит

систему

поли- и метафосфаты; они имеют дифф-диагностическое значение

переносщиков , осуществляющих транспорт протонов и электронов

при изучении возбудителя дифтерии, у которых зерна Волютина

цикле Кребса. У прокариот дых цепь нах-ся в ЦПМ и ее производных.

располагаются по полюсам клеток; Окрашиваются сложным методом

Мембрана содержит фермент АТФ-синтазу, которая образует АТФ из

Нейссера и простым методом Леффлера.

АДФ. Важными ферментами дых цепи являются: флавопротеины (ок-

Метод Нейссера: фиксированный в пламени горелки мазок чистой

вост ферменты, содержит в качестве простетической группы ФМН

культуры возб дифтерии окрашивают уксуснокислой синькой 1 мин,

или ФАД, которые передают атомы водорода от НАДН и НАДФН

промывают водой, протравливают р-м Люголя 30 сек и докрашивают

последующим переносщикам), хиноны (ок-вост коферменты, которые

везувином 20-30 сек: препарат промывают водой, высушивают,

способны переносить как водород так и электроны, они являются

микроскопируют; в ре-те: тела бактерий желт или светло-коричневые,

«сборщиками водорода»

и передают

его

цитохромам;

Грамэто

зерна волютина имеют темно-синий цвет;

убихинон, Грам+ нафтохинон), цитохромы (ок-вост ферменты,

Метод Леффлера: окраска мазка щелочным метиленовым синим 5

которые переносят только электроны, в их молекуле простетичнеской

мин, в рез-те тела окрашены в голубой цвет, зерна в темно-синий;

гр явл гем который содержит железо +3, при присоединении

электронов железо восстанавливается до +2). см рисунок в БХ (обмен

Противовирусный иммунитет (врожденный, приобретенный). ИФ.энергии)

Механизмы противовирусного действия

Способом выращивания анаэробов на питательных средах явл

Иммунитет — это способ защиты орг-ма от инфекционных и других

добавление редуцирующих веществ (глюкозу, муравьинокислый

натрий, казеин, сульфат натрия, тиосульфат, цистеин, тиоглюконат

генетически чужеродных агентов. Различают врожденный иммунитет

натрия

и

др.),

которые

связывают

токсичные

для

анаэробов

(явл видовым признаком, передается по наследству, неспецефичен) иперекисные соединения.Общие питательные среды для анаэробных

адаптивный

(приобретенный)

иммунитет

—

произошлаорганизмовДля общей среды Вильсона — Блера базой является агар-

специализация мех-в иммунитета, которая привела к формированиюагар с

добавлением

глюкозы, сульфита натрия и двуххлористого

иммунной системы и дифференцировке Т- и В-лимф и биосинтезу Ат

железа. Клостридии образуют на этой среде колонии чёрного цвета за

различных классов; явл спецефичным, приобретается в течении

счет

восстановления сульфита до сульфид — аниона,

который

жизни каждым орг-м индивидуально, не наследуется. Подразделяетсясоединяясь

с катионами железа (II)

дает

соль

чёрного

цвета.

на активный ( формируется имм сист в рез-те иммуного ответа наСреда Китта — Тароцци состоит из мясопептонного бульона, 0,5%

введение микроорганизмов или их токсинов; может быть естественно

глюкозы и кусочков печени или мясного фарша для поглощения

активным и искусственно активным) и пассивный (формируется

кислорода из среды. Перед посевом среду прогревают на кипящей

путем введения в орг-м готовых Ат; естественно пассивный

водяной бане в течение 20 — 30 минут для удаления воздуха из

развивается при трансплацентарном переносе IgG от матери к плоду,среды.

После

посева

питательную

среду

сразу

заливают

пассивный искусственный иммунитет — введение терапевтическихслоем парафина или

вазелинового

масла для изоляции

от

доступа

сывороток).

кислорода.

Противовирусная защита имеет 2 вида факторов: неспецефисекие и

специфические гуморальные.

Реакция агглютинации

Специфические гуморальные факторы это специфические Ат и

спецэто склеивание микробов или других клеток с образованием видимых

Т-клеточная иммунная защита.

глазом конгломератов — хлопьев под действием специфических Ат в

К не специфическим

относятся

ингибиторы вирусов,

системаприсутствии электролитов. Реакцию ставят как для серологической

комплемента, NK-клетки, макрофаги и интерферон (ИФ).

индентификации, выделенной от больных чистой культуры м/орг, так

ИФ явл главными антивирусными гуморальными неспецефическимии для определения Ат в сыворотки больных.

факторами. Известно 3

типа ИФ

человека: альфа(продуцируютсяа) РА на предметном стекле

лейкоцитами периферической крои человека,подавляют синтез

вирставят для определения неизвестной культуры микробов.

белков),

бетта(продуцируются

фибробластами,ингибируютИнгридиенты: испытуемая кульутра на МПА, диагностичсекая

размножение вирусов

и повышают

активность

цитотоксическихагглютинирующая сыворотка, физ.раствор. На предметное стекло

клеток ) и гамма (вырабатывается

Т-лимфоцитами, ингибируютнаносят каплю диагн сыв и рядом каплю физ.раствора, испытуемую

размножение вир в лектках, усиливают спец иммунный ответ)

культуру берут петлей и вносят сначала в физ.раствор а затем в

Мех-м

действия ИФ:

клетки, инфицированные

вир,

начинаютдиагностическую сыворотку; склеивание происходит в течении

активирующая эндонуклеазу, способствуя

разрушению вирусныхдиагностикум — взвесь известных убитых микробов, физраствор.

иРНК)

Нарисовать на обратной стороне;

Билет 32

Билет 9

Микроскопический метод изучения м/орг

см 3,18,19 билет

а)микроскопия в затемненном поле зрения (изображение

недостаточно контрастно, метод заключается в уменьшении

Микробиология — наука, изучающая строение, жизнедеятельность и

интенсивности освещения препарата, методо позволяет увидеть

экологию микроорганизмов — мельчайших форм жизни

движение бактерий, микроскопировать грибы и простейших) б)

растительного или животного проис¬хождения, не видимых

темнопольная микроскопия (сонвоана на освещении препарата

невооруженным глазом. Микробиология изучает всех представителей

лучами, идущими в косом направлении и не попадающими в

микромира (бактерии, грибы, про¬стейшие, вирусы). По своей сути

объектив, что делает поле зрения темным; в объектив попадают

микробиология является био¬логической фундаментальной наукой.

используют при изучении спирохет и их подвижность, контуры

прежде всего фи¬зики, биологии, биоорганической химии,

изучаемых объектов видны, но внутренние структуры неразличимы)

молекулярной биоло¬гии, генетики, цитологии, иммунологии. Как и

в) фазово-контрастная микроскопия (универсальные метод изучения

всякая наука, микробиология подразделяется на общую и частную.

живых неокрашенных м/орг, обладает хорошей разрешающей

Общая мик¬робиология изучает закономерности строения и

способность, дает возможность различить некоторые анатомические

жизнедеятель¬ности микроорганизмов на всех уровнях —

структуры м/орг, подвижность, явл основным методом изучения

молекулярном,

кле¬точном,

популяционном;

генетику

и

микоплазм и L форм бактерий, метод основан на превращении

взаимоотношения их с ок¬ружающей средой. Предметом изучения

отическими стредставми фазовых колебаний в амплитудные, это дает

частной микробиологии являются отдельные представители

возможность получить контрастное изображение живых

микромира в зависимости от проявления и влияния их на

неокрашенных объектов, которые по своей природе являются

окружающую среду, живую при¬роду, в том числе человека. К

малоконтрастными (фазовыми), т. е. Вызывают сдвиг по фазе

частным разделам микробиоло¬гии относятся: медицинская,

проходящей через них световой волны, не меняя ее амплитуду;

ветеринарная,

сельскохозяйствен¬ная,

техническая

(раздел

человечечский глаз не улавливает фазовых изменений, но

биотехнологии), морская, космическая микробиология.

воспринимает изменения длины волны и ее амплитуды, по этому

Вакцина — медицинский препарат, предназначенный для создания

неокрашенный объект при обычном методе микроскопирвоания

иммунитета к инфекционным болезням.

практически невидем, для повышения контрастности живых

Классификации вакцин:

себя несколько фазовых объектов с различным увеличением; фазовый вирулентность, но сохранившие специфическую

антигенность

конденсор с набором кольцевых диафрагм для каждого объектива,

штаммы патогенных бактерий. Примером таких вакцин являются

вмонтированных в револьверный диск; вспомогательный микроскоп,

БЦЖ и вакцина против натуральной оспы человека, в качестве

с помощью которого осуществляется настройка фазово-контрастной

которой используется непатогенный для человека вирус оспы коров.

системы (фазовые кольца объектива должны быть совмещены с

2.Инактивированные (убитые) вакцины – препараты, в качестве

соответ кольцевой диафрагмой конденсора).

действующего начала включающие убитые химическим или

физическим способом культуры патогенных вирусов или бактерий,

Противовирусный имм. Врожденный и приобретенный.

(клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных микробов

Биологические св-ва ИФ

комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные

Иммунитет — это способ защиты орг-ма от инфекционных и другихантигены (субклеточные, субвирионные вакцины).

В препараты

генетически чужеродных агентов. Различают врожденный иммунитетиногда добавляют консерванты и адьюванты.

адаптивный

(приобретенный)

иммунитет

—

произошлаформе или даже в виде фрагментов его молекул,

определяющих

специализация мех-в иммунитета, которая привела к формированиюспецифичность т. е. в виде эпитопов, детерминант.

иммунной системы и дифференцировке Т- и В-лимф и биосинтезу АтКорпускулярные вакцины – содержащие в

своем составе

различных

классов; явл спецефичным, приобретается

в течениипротективный антиген

сывороток).

обладают высокой иммуногенностью для повышения их антигенных

Противовирусная защита имеет 2 вида факторов: неспецефисекие исвойств

эти

молекулы

сшиваются

с

полимерным

специфические гуморальные.

крупномолекулярным безвредным веществом, иногда добавляют

Специфические гуморальные факторы это специфические Ат и

спецадьюванты.

Т-клеточная иммунная защита.

5.Ассоциированные вакцины – препараты, включающие несколько

К не специфическим

относятся

ингибиторы вирусов, системаразнородных антигенов.

комплемента, NK-клетки, макрофаги и интерферон (ИФ).

Требования, предъявляемые к современным вакцинам:

ИФ явл главными антивирусными гуморальными неспецефическимиИммуногенность;

факторами. Известно 3 типа ИФ

человека: альфа(продуцируютсяНизкая реактогенность (аллергенность);

лейкоцитами периферической крои человека,подавляют синтез

вирНе должны обладать тератогенностью, онкогенностью;

белков),

бетта(продуцируются

фибробластами,ингибируютШтаммы,

из

которых приготовлена вакцина,

должны быть

размножение

вирусов

и повышают

активность

цитотоксическихгенетически стабильны;

клеток ) и гамма (вырабатывается

Т-лимфоцитами, ингибируютДлительный срок хранения;

размножение вир в лектках, усиливают спец иммунный ответ)

Технологичность производства;

Биолг.св-ва: 1)обладают видовой спецефичностью (ИФ чел оказываетПростота и доступность в применении.

действие только в

орг-ме чел);

2)оказывает

универсальное

Билет 47

типовые(серовариантные) микробные аг. Особую группу составляют

Микроскопия грибов, изучение.

протективные (защитные аг)-аг ряда видов бактерий и вирусов,

Грибы-самостоятельное царство эукариотических свободноживущих

индуцирующие при их внедрении в организм развитие адаптивного

в подцарства: zygomycota, ascomycota,basidiomycota.Грибы

обезвреживание в результате иммунного ответа способствует

размножаются как бесполым(образование экзоспор, эндоспор,

прекращению инфекционного процесса, при этом формируется

почкованием, такие формы грибов называются анаморфами) так и

стойкий адаптивный постинфекционный иммунитет. Суперантигены-

половым ( образование половых спор, такие грибы называются

вещества, способные неспецифически связываться с различными

телеоморфами).Протопласты содержат ядро, митох, лизосомы,

клонами т-лф.и апк, то происходит активация множества т-лф.,они

рибосомы и др. По морфологическим особенностям грибы

секретируют много ил, что вызывает интоксикацию организма, это

подразделяют на: плесневые грибы, дрожжи и дрожжеподобные

приводит к их апоптозу,и,соответсвенно, истощению иммунной

грибы, промежуточная форма диморфных грибов.

системы организма.

Плесневые грибы. Образуют мицелий, состоящий из переплетенных

гифов. На пит.ср. образуют субстратный мицелий-прорастает в среду

и берет оттуда все необходимые питательные вещества, и воздушный

мицелий-на котором созревают неполовые споры.Многие Грибы

могут размн.и половым путем. По характеру мицелия различают

высшие и низшие грибы. У высших мицелий разделен

перегородками, имеющими поры, через которые клетки сообщаются

между собой.Низшие Перегородок не имеют.

Зигомицеты.Отностся К низшим грибам, размножаются бесполым и

половым путем.Типичный Представительгриб мукор( головчатая

плесень )-имеет несептированный мицелий, на концах воздушных

гифов созревают эндоспоры. Аскомицеты.Среди Аскомицетов

выделяют плесневые и дрожжевые грибы. Плесневые являются

вызшими грибами, на концах воздушных гифов у них созревают

экзоспоры. Типичные предст. Пенициллин. Аспергилл.(леечная

плесень) высшие, плодоносящие гифы имеют цепочки экзоспор-

конидии, имеющие вид текущей воды из лейки.Пеницилл.(кистевая

плесень) высшие, экзоспоры в виде кисточки.

Дрожживходят в подцарство аскомицеты, представляют собой

отдельные клетки круглой или овальной формы, в цп часто

обнаруживаются различные включения, размножаются почкованием,

делением, аскоспорами(половые споры).Диморфные грибы в

зависимости от условий могут расти как дрожжи или как плесень. В

организме хозяина растут как дрожжи, на пит среде в виде мицелия.

(П: candida albicans-микозы у чел-ка.

Морфологию грибов изучают: в нативных препаратах *раздавленная

капля* в затемненном поле зрения, фазово-контрастном и

люминесцентном микроскопе и с помощью окраски простым

метождом, по гр., Цил-нильс., и др.

Аг бактериальной клетки, локализация.

Антигены-генетически чужеродные агенты, в том числе и микробные,

которые при внедрении во внутреннюю среду макроорганизма

вызывают гуморальный и клеточный иммунный ответ.По

Хим.природе это чаще белки, поли- и липополисахалиды.АГ Могут

находится в составе вирусов, микробных клетов, но и в свободном

виде(белковые токсины). Аг не являются однородной структурой, они

содержат реактивные участки-аг детерминанты, этиотопы,- на

каждый этиотоп вырабатывается соответствующие специфические ат,

то аг по составу считаются поливалентными.

Свойства аг: Чужеродность-способность индуцировать имунный

ответ.( искл: аутоантигены-свободные или входящие в к лаг кот.при

опр.усл.воспринимаются иммунной системой как чужеродные)

Антигенность-потенциальная способность молекулы антигена

индуцировать иммунный ответорганизма и специфически

взаимодействовать с антителами и клонами т-лф, которые

индуцировались после введения данного антигена. Иммуногенность-

потенциальная способность антигена вызывать специфический

иммунный ответ определенной интенсивности. Степень

иммуногенности зависит от: химической природы аг (белки более

сильные), химического состава( чем больше

разнообр.аминокисл.сост.тем выше иммуногенность), молекулярной

массы, и т. д. Специфичность-это способность антигена индуцировать

иммунный ответ к строго определенной детерминанте.

В зависимости от локализации различают следующие группы

антигенов: Капсульные (к-аг).Могут Иметь полисахаридную,

белковую, полипептидную природу, относятся к факторам

патогенности. Жгутиковые( н-аг).Их Аг свойства связаны с белком

жгутиков-флагеллином.Термолабильны, являются сильными аг.

Соматические (о-аг). Это аг кс грамотрицательных бактерий,

представляют собой лпс, являются эндотоксином бактерий. К,н,о аг

многих бактерий обладают внутривидовой антигенной

вариабельностью, вследствие которой бактериальный вид

подразделяется на сероварианты. У грамполож. Аг специфичность кс

связана с тейхоевыми и липотейхоевыми кислотами.

Цитоплазматические аг. Внеклеточные аг. Являются белковые

токсины, на которые вырабатываются антитоксины.

Различают групповые (родоспецифические), видовые и

Билет 45

помощью термостабильной ДНК-полимеразы. Обычно проводят 25-

Структура бактериальной клетки. Жгутики, типы расположения,

30 повторных циклов, в итоге за 2-3 часа получается миллион копий.

значения, выявление.Ворсинки-фимбрии и пили.

Применяется: в диагностике инфекционных заболеваний урологии,

Жгутики-являются органами движения, представляют собой

венерологии, педиатрии и др. Как метод экспрессдиагностики ВИЧ-

нитевидные придатки, состоящие из белка флагеллина.Жгитик

инфекций, гепатитов и др.

прикрепляется к батериальной клетке с помощью сложной структуры,

состоящей из:базального тельца, представляющего собой систему

дисков и крючка, к которому прикреплена жгутиковая нить. По

количеству и расположению жгутиков различают: монотрихи-один

жгутик, перитрихи-жгутики по всей поверхности бактериальной

клетки, лофотрихи-пучок жгутиков на одном конце клетки,

амфитрихиединичные жгутики или пучки на разных полюсах

клетки.

Ворсинки (фимбрии и пили) состоят из белка пилина. Они короче и

тоньше жгутиков, соответственно видны только в электронном

микроскопе. По своим функциям ворсинки подразделяются на

половые пили, обеспечивающие коньюгацию между бактериями, и

фимбрии общего порядка, отвечающие за адгезию.

Способы микроскопии нативных препаратов.Готовят препараты в

виде *раздавленной* или *висячей капли*. 1)Микроскопия в

затемненном поле зрения.Заключается в уменьшении интенсивности

освещения препарата, что достигается опусканием конденсора и

сужением диафрагмы, метод позволяет наблюдать движение

бактерий. 2)Темнопольная микроскопия. Основана на освещении

препарата лучами, идущими в косом направлении и не попадающими

в обьектив, что делает поле зрения темным.В обьектив попадают

только те лучи,которые отражаются от имеющихся в препарате

микробных клеток. На темном поле будут видны блестящие

микрорганизмы, можно будет рассмотреть форму клетки и характер

движения. 3)Метод фазово-контрастной микроскопии. Световой

конденсор заменен на фазовый. В фазовом конденсоре есть щелевая

диафрагма, которая пропускает лучи с одинаковой фазой волны. Под

окуляр устанавливается специальное устройство, которое преобразует

изменения фазы волны в изменение амплитуды. Увидим: прозрачную

среду в которой находятся прозрачные клетки, но мы увидим контур,

контурные структуры внутри клетки. + метод серебрения по

Морозову, в котором жгутик будет утолщаться и мы его увидим в

световом микроскопе.

Молекулярная гибридизация. ПЦР.

Эти методы позволяют обнаружить присутствие в исследуемом

материале даже единичных копий генов определяемых вирусов, про-

или эукариотических клеток и тем доказать наличие

соответствующей инфекции.

Метод молекулярной гибридизации. Основан на способности

двухспиральных молекул ДНК к денатурации (разхождение при

нагревании) и ренатурации (воссоединение цепей при снижении

температуры и приобретение ДНК первоначальной двухспиральной

структуры(отжиг)).Разъединенные цепи ДНК способны к

гибридизации с фрагментами других односпиральных ДНК,

имеющих комплиментарные участки. К гибридизации способна так

же молекула РНК. Для обнаружения в исследуемом материале

нуклеиновых кислот-мишеней используют комплементарные

молекулы ДНК или РНК, меченные радиоактивным изотопом. Их

готовят из клонируемых рекомбинантных нуклеиновых кислот или

выделяют из геномов вирусов или микробных клеток. При

постановке реакции молекулярной гибридизации зонды соединяют с

исследуемым материалом, содержащим определенную нуклеиновую

кислоту, подвергшуюся денатурации.Если зонд комплиментарен, то

происходит гибридизация и после отжига зонд оказываетмя

включенным в нукл. Кислоту и его можно будет обнаружить

методами РИА, ИФА, МИФ.

ПЦР. Метод получения большого количества специфических

нуклеотидных последовательностей ДНК ин витро. В реакции

участвуют следующие ингредиенты: -Определяемая ДНК

инфекционных агентов в испытуемом биологическом материале;

-Праймеры двух типовкороткие цепочки ДНК, состоящие из 20-30

нуклеотидов, с нуклеотидной последовательностью,

комплементарной 3’ концам каждой из двух цепей определенной

ДНК; -Свободные нуклеотидынеобходимый материал для

осуществления амплификации; -Фермент термостабильная ДНК-

полимераза, которая производит достройку комплементарных цепей

ДНК из свободных нуклеотидов. Этапы процесса ПЦР:

1)Денатурация-разъединение определяемой двухцепочечной ДНК на

две изолированные цепи птем нагревания 2)Отжигвосстановление

двухцепочечной структуры определяемой ДНК в области

присоединения комплементарного праймера( к 3’ концам, те

антипараллельно).Праймеры служат *затравками* для последующей

достройки цепей ДНК. 3)Удлинениедостройка каждой цепи

определяемой ДНК до исходного двухцепочечного состояния с