![](/user_photo/2706_HbeT2.jpg)
Лекции по биофизике
.pdf![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o191x1.jpg)
Методы изучения свободных радикалов
Метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР)
•Прямое измерение сигнала радикалов
•Сигналы стабильных радикалов
•Метод быстрого смешивания
•Стабилизация радикалов при низких температурах
•Метод спиновых ловушек
![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o192x1.jpg)
Прямое обнаружение радикалов липидов методом ЭПР в проточной кювете
|
LH |
O |
2 |
|
Fe 2++ LOOH Fe 3++ LO . L . LOO . |
||
Fe2+ |
LOOH |
LOH |
|
|
|
S Магнит
Резонатор N
Сигнал ЭПР
Осипов А. Н., Моравский А. П., Шувалов В. Ф., Азизова О. А., Владимиров Ю. А. 1980,
Биофизика 25(2): 234-238.
![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o193x1.jpg)
Две реакции образования радикалов гидроксила
|
|
|
|
|
|
CH3 |
.ОН + |
|
|
C |
|
N |
CH3 |
|
|
|
||||
|
|
|||||
|
|
H |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
CH3 |
|
Радикал |
|
|
|
|
O |
|
|
|
Спиноваяловушка |
||||
гидроксила |
|
|
|
|
|
ФБН |
|
|
|
CH3 |
|
|
|
N |
CH3 |
|
|
|
|||
OH O |
||||
CH 3 |
||||
|
|
|
Спиновыйаддукт ФБН
Реакция |
|
Фентона |
Реакция c HOCl |
|
|
|
||||||
Fe 2++ H202 Fe3+ + OH- + HO• |
Fe2+ + HClO Fe3+ |
. |
||||||||||
+ Cl- + HO• |
||||||||||||
. |
|
PBN-OH (аддукт) |
.. |
|
PBN-OH (аддукт ) |
|||||||
ФБН + HO• |
|
ФБН + HO• |
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o194x1.jpg)
Сигнал ЭПР спиновых аддуктов радикалов олеиновой кислоты, образующихся в реакции ионов Fe2+ с гидроперекисью линоленовой кислоты
0.30 mT
N =1,62mT |
H= 0,30mT |
H=0,1mT |
N =1,56mT |
H = 0,34mT H=0,06mT |
|
Fe2+ + LOOH Fe3+ + LO• + OH- |
PBN + LO• PBN-LO (аддукт) |
![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o195x1.jpg)
Биохимические методы изучения свободных радикалов
•Биомаркеры
•Диеновая конъюгация
•ТБК активные продукты
•Ингибиторный анализ
![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o196x1.jpg)
Биохимические методы изучения свободных радикалов
Биомаркеры
![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o197x1.jpg)
Биомарке
ры
Белки
Нуклеиновые
кислоты
de Zwart, L. L.,
Meerman, J. H., |
Липиды |
|
|
Commandeur, J. N. |
|
and Vermeulen, N. P. |
|
(1999). Free Radic Biol |
|
Med 26(1-2): 202-26. |
|
![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o198x1.jpg)
Маркеры оксидативного повреждения нуклеиновых
кислот (слева) и белков (справа)
8-гидроксигуанозин
о-тирозин
тимидингликоль
![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o199x1.jpg)
Биомаркеры на окисление арахидоновой кислоты
![](/html/2706/155/html_xwTcwgTCc6.0Er9/htmlconvd-TRal7o200x1.jpg)
Структура некоторых изопростанов
Структурные формулы метаболитов изопростана F2