19. Дайте определение термина «ложноположительный» и «ложноотрицательный» результат.

Ложноотрицательный ответ (результат) — это отрицательный ответ на присутствие подозреваемого вещества, полученный при исследовании объекта, содержащего это вещество. Причина - чувствительности метода анализа: чем выше чувствительность метода, тем меньше ложноотрицательных ответов и больше положительных. Причиной так же может быть фальсификация пробы, недостаточной квалификацией эксперта, систематическими ошибками исследований. Ложноположительный ответ (результат) — это положительный ответ на присутствие подозреваемого вещества, полученный при анализе объекта, не содержащего это вещество. Ложноположительные результаты теста приведут к дополнительным тестам, но не к ложному заключению. Ложноположительные результаты обусловлены недостаточной специфичностью метода, за счет перекрестных реакций, слабой подготовки эксперта, загрязненными реагентами.

20. Методы изолирования лекарственных и наркотических веществ при проведении судебно-химической экспертизы. Их характеристика и сравнительная оценка.

Общими методами изолирования «нелетучих» ядов являются:

1. Изолирование подкисленным этанолом (метод Стаса-Отто)

2. Изолирование водой, подкисленной щавелевой кислотой (метод Швайковой-Васильевой)

3. Изолирование нейтральным ацетоном.(метод Карташова)

Частные методы изолирования

• изолирование барбитуратов подщёлоченной водой (метод Валова);

• метод Е. Грусц-Харди - изолирование смесью спирта и хлороформа

• изолирование алкалоидов водой, подкисленной серной кислотой (метод Крамаренко)

• Изолирование алкалоидов водой подкисленной серной кислотой с последующей гель фильтрацией (Метод Поповой)

• Изолирование производных фенотиазина подкисленным спиртом (Метод Саломатина)

Изолирование подкисленным спиртом

Метод Стаса-Отто. 

В настоящее время метод применим для выделения не только алкалоидов, но и веществ кислотного, слабоосновного характера, в том числе синтетических лекарственных и наркотических средств.

Схема метода

1-й этап. Навеску объекта настаивают три раза по 24 ч с этиловым спиртом, подкисленным щавелевой кислотой. Спиртовые вытяжки упа­ривают и в полученном остатке многократно осаждают белки спиртом фильтруют и выпаривают досуха. Очищенный остаток растворяют в 20-25 мл воды.

2-й этап. Водный раствор последовательно экстрагируют хлороформом при рН=2 и рН=10 после подщелачивания 25% раствором аммиака. В экстракт при рН=2 перехо­дят вещества кислотного и слабоосновного характера. В экстракт при рН=10 переходят вещества основного характера.

Оценка метода. 

Достоинство метода: извлекает вещества различной при­роды. Имеется стадия осаждения белков (важно при работе с трупами).

Недостатком метода  длительность, потери ис­комых веществ за счет адсорбции их белками. Используется часто особенно при исследовании объектов, подвергшихся сильным гнилостным изменениям.

Метод Е.М. Соломатина. Экстракция подкисленным спиртом при определении производных фенотиазина в биологических объек­тах. 

Схема метода

1 -й этап. Объект заливают этиловым спиртом, подкисляют щавелевой кислотой до рН=2 и настаивают. Спиртовые вытяжки упаривают. В остатке осаждают белки 96% спиртом, фильтруют и выпаривают досу­ха. Очищенный остаток растворяют в 100 мл воды, нагретой до температуры 40-60°С, охлаждают и фильтруют.

2-й этап. Фильтрат экстрагируют дважды диэтиловым эфиром (отличие от Стаса) при рН=2-3, Затем водную фазу подщелачивают 50% раствором гидроксида натрия и вновь экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные эфирные вытяжки и используют для обнаружения производных фенотиазина.

Оценка метода. Максимальная степень экстракция и уменьшает потери исследуемых веществ как при изолировании, так и при экстракции.

Изолирование нейтральным ацетоном

Метод разработан В. А. Карташовым. В качестве экстрагента им предложен амфифильный растворитель ацетон, который способен смешиваться как с водой, гак и с липидами.

Схема метода

1-й этап. биологический материал четырехкратно извлекают аце­тоном встряхивая после каждого раза. Затем пробы центрифугируют. Ацетоноводный экстракт смешивают с карбонатом калия. Ацетоновый слой отделяют, добавляют раствор н-гексана в HCl. Органическую фазу, содержащую гидрофобные примеси, отбрасывают.

2-й этап. Водно-ацетоновую фазу экстрагируют эфиром, эфир испаряют и анализируют на вещества кислотного характера. Оставшийся водный раствор подщелачивают 25% раствором аммиака до рН=9-10, добавляют 3 г хлорида натрия  (для высаливающего эффекта) и экстрагируют диэтиловым эфиром. Эфир испаряют и остаток исследуют на вещества основного характера.

Оценка метода. Способ позволяет получать достаточно чистые экстракты. В процессе гомогенной экстракции анализируемые вещества практически не теряются.

Изолирование подкисленной водой

Метод Степанова-Швайковой

Схема метода

1-й этап. Навеску растительного объекта массой заливают водой очищенной  (1:12), подкисляют щавелевой кислотой до рН=2 и настаивают 2 ч. Водную вытяжку центрифугируют. Прозрачную жидкость отделяют от осадка.

2-й этап. Центрифугат экстрагируют последовательно хлороформом при рН=2, затем при рH = 10 после подщелачивания 25% раствором аммиака.

Метод А.А.Васильевой

Схема метода

1-й этап.  биологический объект заливают водой очищенной  (1:2), подкисляют щавелевой кислотой до рН=2 и настаивают 2 раза (отличие): 2 ч и 1 ч при периодическом взбалтывании. Водную вытяжку процеживают через двойной слой марли и центрифугируют. Надосадочную прозрачную жидкость отделяют.

2-й этап. Центрифугат экстрагируют последовательно хлороформом при значениях рН=2, затем при рН=10 после подщелачивания 25% раствором аммиака.

Оценка методов. Методы Степанова -Швайковой и Васильевой быстрее метода Стаса-Отто. позволяют изолиро­вать меньшие количества ряда алкалоидов. Они не требуют затраты этилового спирта, но не пригодны при анализе сильно загнивших объектов.

Метод В.Ф.Крамаренко

Схема метода

1-й этап. Навеску заливают раствором серной кислоты  (рН=2,5) и настаивают 2 раза: 2 ч и 1 ч. Водные вытяжки центрифугируют, от­деляют от осадка, насыщают сульфатом аммония и вновь центрифугируют. Центрифугат  (рН=2,5) экстрагируют диэтиловым эфиром с целью очистки. 2-й этап. Водную фазу после подщелачивания до рН=8,5—9 раствором гидроксида натрия экстрагируют 4 раза хлороформом.

Оценка метода. Метод избирателен только к алкалоидам

Метод В. И. Поповой

Схема метода

1-й этап. Измельченный заливают серной кислотой  (рН=2) и настаивают 3 раза (отличие). Водную вытяжку процеживают че­рез тройной слой марли и центрифугируют. Надосадочную жидкость отделяют и очищают с помощью гель-хроматографии. Элюируют барбитураты из колонк с помощью серной кислоты.

2-й этап. Элюат повторно экстрагируют хлороформом или диэтиловым эфиром.

Оценка метода. Метод обеспечивает хорошую очистку извлечений. Можно использовать в гнилостных объектах. Избирателен к барбитуратам.

Изолирование подщелоченной водой

Метод П.Валова

Схема метода

1-й этап. объект заливают 180 мл подщелоченной воды  (рН=10) и настаивают в течение 30 мин. Щелочную вытяжку центрифугируют. Надосадочную жидкость  (центрифугат) подкисляют серной кислотой до рН=2. В полученном растворе с помощью вольфрамата натрия при нагревании осаждают белки и смесь вновь центри­фугируют.

2-й этап. Барбитураты из центрифугата экстрагируют диэтиловым эфиром при значе­нии рН=2. Затем экстрагируют эфиром, реэкстракцию проводят 10%-ным раствором NaOH, подкисляют H2SO4 до рН = 2 и барбитураты экстрагируют эфиром.

Оценка метода. Метод эффективен, позволяет выделить 50-90% барбитуратов и полу­чить достаточно чистые извлечения. Недостатком метода является сорбция некоторых барбитуратов белками.