16. Радиоиммунный анализ

Радиоиммунный метод анализа основан на конкурентном связывании определяемого вещества-антигена и антигена меченого радиоактивной меткой со специфическими антителами. Концентрацию комплекса меченный Аг-Ат определяют посредством измерения радиоактивности. Предварительно необходимо удалить непрореагировавший меченый Аг.

В качестве метки наиболее часто используют изотопы веществ часто используют изотопы P, C, Co, I.

Достоинства

1. Определение вещества в следовых концентрациях

2. Высокая специфичность анализа

3. Высокая воспроизводимость

4. Экспрессность

5. Малый объем биологического материала для анализа

Недостатки

1. Короткий срок жизни метода, обусловленный периодом полураспада

2. Дорогое оборудование для измерения

3. Возможность радиоактивного загрязнения окружающей среды

4. Необходимость специальных мер предосторожности

5. Высокая квалификация персонала

17. Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА) — один из видов иммунохимического анализа. Он основан на реакции антигена (АГ) с соответствующим антителом (АТ) с образованием иммунного комплекса. При этом один из компонентов конъюгирован с ферментом. Только после образование комплекса АГ-АТ фермент может прореагировать со своим субстратом образуется окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.

Прямой ИФА

В прямом иммуноферментном анализе используют антитела к выявляемому антигену, соединенные со специфической меткой. Этой меткой выступает фермент (реже субстрат).

Непрямой ИФА В непрямом иммуноферментном анализе два этапа. При проведении первого этапа используют немеченые антитела к выявляемым антигенам, а во втором этапе применяют меченые антитела к первым немеченым антителам. То есть получается не прямое связывание антитела с антигеном.

Сендвич метод

Аг предварительно связан с иммобилизированным Ат и к этому комплексу мы добавляем наше меченной ферментом Ат напрямую или не напрямую

Достоинства метода:

·        Быстрота и простота определения;

·        Возможность автоматизации и использования для массовых анализов в полевых условиях;

·        Не сложная пробоподготовка;

·        Высокая точность;

·        Не требуется дорогостоящей аппаратуры.

Недостатками можно назвать узкую специфичность и влияние компонентов матрицы.

18. Метод хромато-масс-спектрометрии в хта.

Метод хромато-масс-спектрометрии

Этот метод получил название хроматомасс-спектрометрии. С помощью хроматографии происходит разделение смеси на отдельные компоненты c помощью масс-спектрометрии проводят обнаружение и количественное определение разделенных веществ смеси.

Хроматомасс-спектрометры выпускаются в двух вариантах — в комбинации с газовым хромтогрофами для анализа веществ, находящихся в газовой фазе или в комбинации с жидкостным хро­матографом для анализа труднолетучих, полярных и термолабильных веществ.

Принцип работы:

• введенный образец испаряется в инжекторе хроматографа под действием температуры и переносится в колонку (полностью либо частично)

• вещества с различной скоростью проходят через колонку, за счет чего происходит их разделение

• из колонки соединения попадают в ионизатор где они ионизируются (обычно, электронным ударом)

• образовавшиеся ионы направляются в масс-анализатор, в котором они разделяются по отношению массы к заряду и специальным детектором определяется их количество.

• в результате анализа получается трехмерный массив данных - каждая точка хроматограммы содержит масс-спектр.