диссертации / 85

91

Примечание: n – количество пациенток, mER – мембранные рецепторы

эстрадиола, ERα и ERβ - ядерные рецепторы эстрадиола.

Таблица 19

Уровни экспрессии генов рецепторов прогестерона в МНФК у пациенток с гиперплазией эндометрия по сравнению с контрольной группой

(M±SE, в качестве контрольного гена использовали ген GAPDH).

92

Примечание: n – количество пациенток, PR-А и PR-В - ядерные рецепторы прогестерона, mPR и PGRmC1 – мембранные рецепторы прогестерона.

При анализе уровней мРНК рецепторов прогестерона и эстрадиола в МНФК у пациенток с гиперплазией эндометрия по сравнению с контрольной группой сопоставимого менопаузального периода были выявлены изменения рецепторного профиля (диаграммы 11).

Диаграммы 11.

Изменения рецепторного профиля МНФК у пациенток с гиперплазией

эндометрия относительно контрольной группы (в качестве контрольного гена

использовали ген GAPDH).

93

Как видно из диаграмм 11, у пациенток с гиперплазией эндометрия с периодом менопаузы до 10 лет в МНФК периферической крови наблюдается увеличение уровня экспрессии гена ERα и снижение - ERβ, в 4 и 37 раз соответственно по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы; при периоде менопаузы более 10 лет – увеличивается уровень мРНКPR-B

в 2 раза (по формуле 2-∆∆Ct). Кроме того, при гиперплазии по сравнению с полипами эндометрия отмечено снижение экспрессии генов рецепторов эстрадиола: ERα (при менопаузальном периоде от 10 лет) и ERβ (при менопаузальном периоде до 10 лет) в 29 и 477 раз (p=0,032 и p=0,006)

соответственно (по формуле 2-∆∆Ct).

94

Была обнаружена разница в уровне мРНК ядерного рецептора эстрадиола между подгруппами пациенток с гиперплазией эндометрия. Так, экспрессия рецептора ERβ выше при периоде менопаузы от 10 лет (p=0,029).

Кроме того, выявлено следующее соотношения между подтипами рецепторов: при периоде менопаузы до 10 лет коэффициент ERα/ERβ= 22,33, PR- A/PR-B= 0,52; при периоде менопаузы более 10 лет - ERα/ERβ = 0,21, PR-A/PR-B = 0,35.

Таким образом, у пациенток с менопаузой до 10 лет при гиперплазиях эндометрия в МНФК наблюдается снижение уровня экспрессии антипролиферативного гена ERβ на фоне увеличенного уровня митогенного гена

ERα. При периоде менопаузы более 10 лет – отмечено увеличение уровня мРНКPR-B, который тормозит PR-A. Эти изменения в МНФК могут говорить о более активно протекающих гормональных изменениях у пациенток до 10 лет по сравнению с более поздним менопаузальным периодом, а также об усугублении патологического процесса за счет нарушений тормозных механизмов контроля пролиферации клеток.

Вариации иммуно-эндокринного фона гиперплазии и ЖФПЭ в постменопаузе позволяют предположить существование независимых механизмов патогенеза данных нозологий.

3.4.4. Экспрессия генов ядерных и мембранных рецепторов стероидных

гормонов в МНФК у пациенток постменопаузального возраста с

аденокарциномой эндометрия.

Аналогично ситуации с полипами и гиперплазией эндометрия, мы разделили пациенток с аденокарциномой эндометрия на 2 подгруппы: в 1

подгруппу вошли 8 пациенток с длительностью менопаузы менее 10 лет, во 2

подгруппу – 6 пациенток с менопаузой более 10 лет.

Результаты определения уровней мРНК рецепторов прогестерона и эстрадиола в МНФК у пациенток с аденокарциномой эндометрия по сравнению с

97

Изменения рецепторного профиля МНФК у пациенток с

аденокарциномой полипами относительно контрольной группы (в качестве контрольного гена использовался ген GAPDH).

Как видно из диаграмм 12, у пациенток с аденокарциномой эндометрия с периодом менопаузы до 10 лет в МНФК периферической крови наблюдаются увеличения уровней экспрессии генов ERα и PR-A в 8 и 4 раза соответственно по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы (по формуле 2-

∆∆Ct). При этом разницы в уровне мРНК рецепторов эстрадиола и прогестерона между подгруппами пациенток с аденокарциномой эндометрия обнаружено не было.

Кроме того, при аденокарциноме по сравнению с полипами эндометрия отмечено снижение экспрессии гена ERα (при менопаузальном периоде от 10 лет)

в 1,4 раза (p=0,048) (по формуле 2-∆∆Ct).

Также выявлены следующие соотношения между подтипами рецепторов:

при периоде менопаузы до 10 лет коэффициент ERα/ERβ составил 0,59, PR-A/PR-B

– 0,83; при периоде менопаузы более 10 лет - ERα/ERβ = 5,95, PR-A/PR-B = 0,37.

Таким образом, наблюдается ситуация, сходная при развитии полипов эндометрия, что может говорить, с одной стороны, о возможных генетических мутациях рецепторного аппарата клетки с потерей гормонального контроля над

98

измененным эндометрием, а, с другой стороны, о реакции иммунной системы на агрессивно развивающуюся опухоль эндометрия.

Полученные результаты по изменению рецепторного профиля МНФК периферической крови при развитии гиперпластических процессов эндометрия представлены в таблице 22.

Таблица 22.

Изменение уровней экспрессии генов рецепторов прогестерона и эстрадиола в МНФК пациенток с полипами, гиперплазиями и аденокарциномой эндометрия постменопаузального возраста по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы.

Как следует из таблицы 22, у пациенток с менопаузальным периодом более

10 лет выраженные изменения рецепторного аппарата МНФК наблюдаются только в случае развития полипов эндометрия. Это может являться следствием значимого снижения секреции эстрадиола и прогестерона на фоне прекращения работы яичников и гормональной перестройки. Если рассматривать уровни экспрессии генов рецепторов эстрадиола и прогестерона в МНФК у пациенток с периодом менопаузы менее 10 лет, то можно отметить повышенный уровень мРНК рецепторов эстрадиола подтипа альфа при всех изучаемых патологиях – полипах, гиперплазии и аденокарциноме эндометрия.

99

При анализе потенциального маркера развития гиперпластических процессов эндометрия у пациенток постменопаузального возраста – ERα – нами была получена ROC-кривая (диаграмма 13).

Диаграмма 13.

ROC-кривая экспрессии гена ERα у пациенток постменопаузального

возраста с гиперпластическими процессами эндометрия.

В результате ROC-анализа было выявлено, что увеличение уровня экспрессии гена ERα в мононуклеарной фракции клеток периферической крови более 0,314 (0,5- Ct*100, относительно гена GAPDH) может быть надежным маркером наличия гиперпластических процессов у пациенток постменопаузального возраста. Чувствительность данного маркера составляет

82%, а специфичность - 75%.

Таким образом, при развитии гиперпластических процессов эндометрия наблюдается изменение рецепторного профиля иммунокомпетентных клеток периферической крови преимущественно за счет гиперэкспрессии гена ERα.

Кроме того, можно предположить, что увеличенный уровень экспрессии гена ERα

может стать молекулярным скрининговым маркером в периферической крови для

100

выявления гиперпластических процессов у пациенток постменопаузального

возраста, что, однако, требует дополнительных исследований.

3.4.5.Влияние прегна-D’-пентаранов на экспрессию генов рецепторов

прогестерона и эстрадиола в МНФК

По результатам изучения рецепторного профиля МНФК у больных постменопаузального возраста с полипами эндометрия и без гинекологических патологий мы исследовали действие прегна-D’-пентаранов на уровень экспрессии гена ERα в мононуклеарах периферической крови этих же пациенток. В 3

последовательных экспериментах использована периферическая кровь 4 женщин контрольной группы и 4 - с полипами эндометрия. Инкубация МНФК проводилась с 8 пентаранами и прогестероном. Результаты исследования влияния новых лигандов рецепторов прогестерона на МНФК пациенток без гинекологических патологий представлены на диаграмме 14.

Диаграмма 14.

Уровни экспрессии генов рецептора эстрадиола подтипа альфа в МНФК периферической крови пациенток постменопаузального возраста без гинекологических патологий при инкубации с прегна-D’-пентаранами.