диссертации / 61

121

Рисунок 4.2.15 Иммуногистохимическое исследование TIMP-2 в стенке влагалища

Примечание: * − разница результатов достоверна при p<0,05; фбл.− фибробласты; ECM − экстрацеллюлярный матрикс

Кроме того, при иммуногистохимическом исследовании обнаружено снижение экспрессии ферментов, необходимых для синтеза эластических волокон: LOXL-1 и FBLN5.

Нами также оценивался ECM в целом, на основании исследования ММP-2 и

ММP-9 и TIМP-2. Соотношение ферментов, разрушающих коллагеновые и эластиновые волокна и их ингибиторов влияет на плотность экстрацеллюлярного матрикса. При наличии ПГ отмечено снижение накопления TIМP-2 при повышении активности ММP-2 и ММP-9 в клетках стромы и в ECM, что приводит к разрыхлению соединительной ткани и уменьшению ее прочности и эластичности.

Нами проведён сравнительный анализ (табл. 4.2.3) экспрессии матриксных белков FBLN5, LOXL-1, MMP-2, MMP-9, TIMP-2. Выявлена статистически достоверная разница между уровнем экспрессии основной и контрольной групп.

Как видно из таблицы 4.2.3, где приведены только статистически значимые показатели экспрессии белков, очевидна высоко достоверная более высокая экспрессия FBLN5 во всех исследуемых элементах соединительной ткани влагалища (p<0,001) у женщин контрольной группы (Iб), при этом наиболее значительной она оказалась в эндотелии сосудов (5,5±0,8; p<0,001).

Статистически значимые результаты высокой экспрессии LOXL-1 у пациенток

122

контрольной группы по сравнению с основной нами получены только в эпителии,

эндотелии и ECM соединительной ткани стенки влагалища. Напротив, нами выявлен достоверно низкий уровень экспресии основных эластинобразующих белков (FBLN5, LOXL-1) у пациенток с ПТО во всех элементах соединительной ткани стенки влагалища. Мы также провели сравнительный анализ активности матриксных протеаз и их нгибиторов (MMP-2, MMP-9, TIMP-2) в различных элементах соединительной ткани стенки влагалища. Как видно из представленных данных активность MMP-2 в эндотелии (4,06±0,9; p<0,001 ), фибробластах

(3,9±0,5; p=0,013) и ECM (2,6±0,5; p=0,003) достоверно выше у пациенток основной группы (1a) по сравнению с контролем. Также нами получены данные о достоверно более высокой активности MMP-9 в эпителии (4,3±0,8; p=0,022),

фибробластах (4,4±1,1; p=0,035) и ECM (4,0±1,1;p=0,023). Однако, следует отметить, что максимальная активность фермента MMP-9 отмечена в эндотелии

(5,2±1,1;p=0,006), фибробластах (5,2±1,1;p=0,006), ECM (4,5±0,8;p<0,001 ) у

пациенток основной группы (Ia) в постменопаузе; это может свидетельствовать о достоверно более высокой разрушительной активности MMP-9 в постменопаузе при ПТО.

При анализе активности TIMP-2 выявлена статистически высоко значимая более низкая активность данного фермента в эпителии (1,15±0,9; p=0,01) и

фибробластах (1,4±0,5;p=0,002) соединительной ткани стенки влагалища пациенток с пролапсом (табл. 4.2.3). При этом самая низкая активность этого фермента во всех элементах вагинальной стенки отмечена нами, согласно таблице

4.2.6 у пациенток с ПТО в постменопаузе.

Таким образом, низкий уровень экспрессии основных эластинобразующих белков (FBLN-5, LOXL-1) во всех элементах соединительной ткани стенки влагалища при высокой разрушительной активности протеаз (MMP 2;-9) и низкой концентрации их тканевых ингибиторов (TIMP2) у пациенток с ПТО может свидетельствовать о развивающейся при ПТО эластинопатии, при которой происходит нарушение процессов ремоделирования (синтеза и деградации)

эластического волокна.

123

Таблица 4.2.3

Результаты сравнительного анализа экспрессии FBLN5, LOXL-1, MMP-2, MMP 9, TIMP-2- групп с пролапсом тазовых органов и без пролапса

При ПТО возникает активация экспрессии ферментов − матриксных протеаз,

атакующих эластические волокна вагинальной стенки. Совершенно очевидно, что экспрессия FBLN5, LOXL-1 зависит от активности матриксных протеаз, в

большей степени MMP-9. Активность ТIМP-2 настолько низка, особенно в периоде постменопаузы при ПТО, что они не в состоянии полноценно выполнять свою функцию в отношении высокоактивных протеаз. Активность ТIМP-2

настолько низка, особенно в периоде постменопаузы при ПТО, что они не в состоянии полноценно выполнять свою функцию в отношении высокоактивных протеаз.

Можно предполагать, что высокая, по сравнению с другими периодами жизни женщин, разрушительная активность MMP-9 при ПТО в постменопаузе обусловлена возрастными атрофическими изменениями в вагинальной стенке.

124

Активность повышается с возрастом, со старением. Протеазная активность возрастает также и после овариэктомии, [306] и после родов [327]. Нами проведён также сравнительный анализ экспрессии матриксных белков FBLN5 и LOXL1 в

структурах соединительной ткани (фибробластах, эндотелии сосудов, эпителии,

ECM) для оценки ранних морфологических признаков начинающегося разрушения соединительной ткани влагалищной стенки и развития ПТО при отсутствии клинических признаков заболевания у женщин репродуктивного возраста.

Как показано в таблицах 4.2.4 и 4.2.5 в репродуктивном и перименопаузальном возрасте женщин без ПТО (Iб1; Iб2) мы наблюдали одинаково высокую экспрессию FBLN5 (5,3+0,9 баллов) во всех элементах вагинальной стенки:

эпителии, эндотелии, фбл., ECM, а в группе с ПТО тех же возрастных периодов снижение экспрессии FBLN5 отмечено во всех элементах, однако наиболее значимое снижение FBLN5 отмечено в ECM (2,6+1,3; p<0,001 и 3,2±1,01; p=0,001

в подгруппах Ia1; Ia2 соответственно).

При количественной оценке уровня экспрессии LOXL-1 без клинических проявлений ПТО (контрольная группа) в подгруппах Iб1; Iб2 отмечено относительно невысокое содержание фермента, причём достоверно только в фибробластах, эпителии и эндотели сосудов вагинальной стенки (4+0,01; 3,3±0,9).

Наименьшее количество LOXL-1 отмечено в фибробластах и ECM у пациенток основной группы (табл. 4.2.4). При этом следует отметить высоко достоверное наибольшее повышение активности эластолитического фермента MMP-9 в ECM,

фибробластах и эпителии вагинальной стенки с 1,2±0,4 до 3,0±1,01 (p<0,001); с 2,2±0,6 до 3,5±0,8 (0,007) и с 2±0,001 до 4,0±0,001 (p<0,001) соответственно.

Наряду с этим выявлено повышение активности и протеолитического фермента MMP-2 в эндотелии с 1,8±0,4 до 4,4±0,8; (p<0,001) и фибробластах − с 1,8±0,4 до 3,6±0,8; (p<0,001) у пациенток репродуктивного возраста с ПТО. В

группе пациенток перименопаузального периода макимальное повышение активности MMP-9 c 1,0 ±0,1 до 4,4±0,9 (p<0,001) мы наблюдали только в ECM.

125

Таблица 4.2.4

Результаты сравнительного анализа матриксных белков подгрупп женщин репродуктивного периода

репродуктивного и перименопаузального возраста ещё при 1-2 стадии ПТО, без

126

клинических признаков заболевания, развивается эластинопатия, заключающаяся в деградации эластического волокна стенки влагалища и потере тканями важнейших свойств: эластичности, растяжимости и упругости.

Все пациентки постменопаузального периода имели стадию ПТО > 2 (POP-Q)

и предьявляли жалобы, соответствующие различным дефектам тазового дна.

Результат сравнительного анализа экспрессии матриксных белков у пациенток постменопаузального возраста отображен в табл. 4.2.6.

Таблица 4.2.6

Результаты сравнительного анализа экспрессии матриксных белков подгрупп женщин постменопаузального периода

Примечание: * − оценка в баллах (0-6);

эпит.− эпителий; фбл.− фибробласты; эндот. − эндотелий сосудов; ECM− экстрацеллюлярный матрикс

При проведении сравнительного анализа ИГХ показателей внутри возрастных групп, отраженного в табл. 4.2.7 нами было выявлено, что наиболее значимые изменения произошли в показателях экспрессии FBLN5 и MMP-9 в

репродуктивном возрасте и MMP-9 и TIMP-2 в посменопаузе.

Нами проведён также корреляционный анализ связи изучаемых показателей

(FBLN5,LOXL-1,MMP-2,MMP-9,TIMP-2) с возрастом, представленный в таблице

4.2.8.

127

Таблица 4.2.7 Сравнительная оценка ИГХ показателей внутри возрастных групп

Как видно из приведённых в таблице данных, с увеличением возраста женщины происходит достоверное уменьшение экспрессии матриксных белков: FBLN5

(только в ECM) (r=-0,33; p=0,013); и LOLl -1(в эпителии r = -0,344; p= 0,009;

эндотелии r = -0,332; p= 0,022; фибробластах r=-0,328), участвующих в ремоделировании (синтезе и деградации) эластического волокна в вагинальной стенке.

128

Таблица 4.2.8

Результаты корреляционного анализа FBLN5,LOXL-1,MMP-2,MMP-9 и возраста.

Примечание:*−оценка в баллах(0-6); эпит.− эпителий; фбл.− фибробласты; эндот. − эндотелий сосудов; ECM− экстрацеллюлярный матрикс

Наряду с этим происходит достоверное увеличение активности матриксных протеиназ (MMP-2;-9), в большей степени проявлялась активность MMP-9,

разрушающих эластическое волокно. При этом отмечено увеличение ТIМP-2 (r=-0,33 p=0,013) только лишь в фобробластах вагинального эпителия.

Вместе с тем, как показано в таблице 4.2.9, выявлена прямая корреляционая связь между MMP-2 (фибробласты.) (r=0,454; p< 0,001), (ECM) (r=0,469; p< 0,001); MMP9 (фибробласты); (r=0,539; p< 0,001); ECM (r=0,666;p< 0,001) и

отрицательная слабая корреляционная связь между FBLN5 (ECM) (r=-0,33; p< 0,001);ТIМP-2 (r=-0,46) и элонгацией шейки матки (r=-0,33; p< 0,001). В связи с ранее выявленной тесной корреляцией между возрастом и иммуногистохимическими (ИМГХ) показателями был дополнительно проведен частный корреляционный анализ, цель которого – выявить зависимость связи развития степени ПТО и ИМГХ результатами. Высоко достоверный уровень значимости p=0,001 доказывает независимую от возраста связь между уровнем экспрессии матриксных белков (FBLN5;LOXL-1) и развитием ПТО 2 степени.

Таким же образом был проведен анализ частной корреляции для ПТО 3

степени и также была выявлена независимая от возраста связь развития пролапса при повышении уровня MMP-2, но в большей степени MMP-9 в стенке

129

влагалища; дефицита LOXL-1,TIMP-2, FBLN5 − в основном в ECM в сравнении с контрольной группой.

Как известно, FBLN5 в основном продуцируется и секретируется клетками эндотелия, гладкомышечными клетками и фибробластами [325]. Экспрессия

FBLN5 наиболее заметна в эмбриональных сосудах и клетках нервного гребня и подавляется в большинстве органов взрослых. FBLN5 мРНК обнаруживается в основном в сердце, яичниках и ткани толстой кишки взрослого человека. Тем не менее, механизм регулирования между FBLN5 и ММP остаётся неясным.

Например, было показано, что FBLN5 ингибируется и активируется уровнем экспрессии ММР-9 [157,218]. Низкий уровень экспрессии FBLN5 был выявлен у пациентов с ПТО [299,309].

M. Budatha с соавт. (2011) сообщили также, что белок FBLN5 может предотвратить развитие ПТО путем регулирования гомеостаза эластического волокна и инактивации ММP-9 в стенке влагалища [157].

СТ влагалища и поддерживающих структур содержит фибриллярный

(волокнистый) компонент – колаген и эластин и неволокнистый компонент

(неколагеновые гликопротеины, гиалуроновые кислоты и протеогликаны). Кроме того, соединительная ткань, кроме Arcus tendineus F. Pelvis, содержит значительное количество гладкомышечных волокон. Считается, что именно волокнистый компонент играет ведущую роль в биомеханических процессах,

происходящих в этих тканях. Количество и качество коллагена и эластина в соединительной ткани поддерживается посредством сохранения точного баланса между синтезом, посттрансляционной трансформацией и деградацией [133].

Полученные нами данные, свидетельствующие о патологии эластогенеза,

согласуются также с полученными результатами P.A.Moalli et al., 2005 [244]

показавших, что у пациенток с ПТО увеличено содержание коллагена III типа в вагинальной стенке и мышцах, а также в крестцово-маточных и кардинальных связках по сравнению с пациентками без ПТО, и этот факт не зависит ни от возраста, ни от паритета [187,190,244].

130

Таблица 4.2.9

Результаты корреляционного анализа cтепени ПТО с матриксными белками