диссертации / 61

131

Продолжение таблицы 4.2.9

132

Наши исследования свидетельствуют о независимом от возраста

разрушении процессов синтезаи сборки эластического волокна в вагинальной стенке и снижении, в связи с этим, её упругости и эластичности, что может привести к развитию ПТО в любом возрасте, а также к его прогресии. Нами определено: чем выше активность матриксных протеаз (MMP-2, MMP-9), тем больший дефицит матриксных белков (FBLN5,LOXL-1) непосредственно участвующих в ремоделировании эластического волокна, тем более выражена степень пролапса. Наиболее выраженые деструктивные процессы наблюдались нами в ECМ. Эти результаты показывают, что ПТО является следствием

133

приобретенной дезорганизацией ECM и что возможная терапия, направленная на торможение экспрессии эластолитических ферментов ECM (MMP-2,-9)

может быть успешной как для предупреждения, так и для прогрессирования ПТО у женщин в любом возрасте.

134

ГЛАВА 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПАЦИЕНТОК, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ РИСКА РАЗВИТИЯ ПРОЛАПСА

ТАЗОВЫХ ОРГАНОВ (результаты собственных исследований)

5.1. Результаты исследования полиморфизма генов фибулина 5 (FBLN5),

лизилоксидазоподобного -1 белка (LOXL1)

Кроме моногенных наследственных заболеваний, связанных с мутациями в одном конкретном гене (например, наследственный рак молочной железы − гены

BRCA1/2, муковисцидоз − ген CFTR, фенилкетонурия − ген PAH), существуют мультифакториальные (многофакторные) заболевания, возникновение которых связано с взаимодействием комплекса признаков, включающих целый ряд генов и факторы среды. Практически все не моногенные заболевания являются, в той или иной мере, мультифаторными и, в большей или меньшей степени, имеют наследственную компоненту. Эта наследственная компонента обусловлена генетическим полиморфизмом, наиболее часто встречающимся вариантом которого является однонуклеотидный полиморфизм (single nucleotide polymorphism − SNP). Масштабы генетического полиморфизма таковы, что между последовательностями ДНК двух людей, если только они не однояйцевые близнецы, существуют миллионы различий. Большинство SNP нейтральны, но часть SNP может влиять на акктивность/количество/стабильность ферментов и,

таким образом, обусловливать фенотипические различия, в том числе,

предрасположенность к различным заболеваниям. Большая часть современных исследований генетической предрасположенности к многофакторным заболеваниям проводится с использованием подхода "случай-контроль". Задачей подобных исследований является поиск аллелей генов, частоты которых значимо различаются в группах пациентов и здоровых индивидов. Генетический анализ не дает возможности установить диагноз, но позволяет выявить неблагоприятные аллели в конкретных генах, которые сопряжены с повышенным риском развития данного мультифакториального заболевания. Выявление в геноме таких генетических вариантов позволяет выделить группу риска и наметить пути

135

профилактики, которые могут снизить вероятность, отдалить развитие заболевания, уменьшить скорость и тяжесть его развития.

Нами было проведено генетическое исследование, в котором сравнивались частоты встречаемости полиморфных аллелей двух генов FBLN5 и LOXL1 в

группе больных с пролапсом гениталий (основная группа) и у женщин без ПТО

(контроль).

В таблице 5.1.1 приведены результаты генотипирования основной (IIa) и

контрольной (IIб) подгрупп по полиморфным сайтам генов FBLN5 и LOXL1. Для гена FBLN5 зарегистрированы следующие значимые эффекты. Минорный аллель

SNP41 rs2018736-С, (5 блок сцепления) чаще встречался у больных с ПТО, чем в контроле (доминантная и аддитивная модели). Носители мажорного (более распространенного) аллеля SNP46 rs12589592-G (6 блок сцепления) имели повышенный риск развития ПГ по сравнению с женщинами, имеющими минорный аллель в данном сайте (рецессивная и аддитивная модели). Ассоциация с риском развития ПГ получена также для минорного варианта из 9 блока сцепления SNP64 rs2474028 –T (доминантная и аддитивная модели). Еще один вариант показал пограничную значимость с изучаемым клиническим фенотипом:

минорный аллель rs12586948-A (SNP5, 2 блок сцепления) достоверно чаще

(27,9%) встречался у больных, чем в контроле (22,4%) (p=0,051, аддитивная модель).

Таким образом, различия в частотах встречаемости рисковых аллелей в гене

FBLN5 в группе больных и в контроле позволяют рассматривать данные генетические варианты как аллели предрасположенности к повышенному риску развития данного заболевания. Ген LOXL1 по результатам проведенного анализа не был ассоциирован с риском развития ПГ, то есть частоты встречаемости данного генетического варианта (rs893821) не отличались у пациентов и в контрольной группе. Возможно, экспрессия данного гена сопряжена с другими вариантами в геноме, либо осуществляется на других уровнях регуляции. Для четырех полиморфных вариантов гена FBLN5, показавших значимые эффекты

(табл. 5.1.1), был далее выполнен гаплотипический анализ (табл. 5.1.2).

136

доверительный интервал.

137

Гаплотип rs12586948-A, rs2018736-C, rs12589592-G, rs2474028-T, состоящий из всех выявленных рисковых аллелей, при достаточно высокой частоте встречаемости 12.67%, ассоциирован с повышенным риском развития ПТО: P = 0,014; OR = 1,84; 95% CI: 1,13-2,98.

Таблица 5.1.2

Гаплотипический анализ ассоциации FBLN5 c пролапсом

Ассоциация гаплотипов гена FBLN5 с пролапсом (n=502)

Примечание: Указаны гаплотипы с частотой встречаемости >5%

аp − уровень значимости; OR - odds ratio; 95% CI - 95% доверительный интервал Еще один редкий гаплотип (частота встречаемости 1,63%) rs12586948-A, rs2018736-A, rs12589592-G, rs2474028-T также оказался ассоциирован с ПТО:

P = 0,024; OR = 4,89; 95% CI: 1,24-19,36.

Другой вариант анализа множественных генетических вариантов заключается в определении числа рисковых аллелей, ассоциированных с ПТО. Более любых четырех рисковых аллелей в гене FBLN5 ассоциированы с повышенным риском развития ПТО (рис.5.1.1): P = 0,003; OR = 1,92; 95% CI: 1,25-2,94.

Рисунок 5.1.1 Распределение рисковых аллелей гена FBLN5 в основной и контрольной группах.

Сочетание нескольких вариантов в рамках одного гена, ассоциированных с риском развития заболевания, является дополнительным доказательством вовлеченности данного гена в патогенез заболевания.

5.2. Сравнение взаимоотношения изучаемых показателей с клинической

картиной

На следующем этапе работы нами были рассмотрены ассоциации в стратах с наличием/отсутствием в анамнезе травматичных родов (эпизиотомия,

перинеотомия, разрывы промежности, разрывы шейки матки); пери-

/постменопаузальный возраст женщин; ИМТ более 25 кг/м2 и менее (или равно)

25кг/м2. Распределение генотипов в стратах с наличием /отсутствием повреждений мягких родовых путей в анамнезе представлено в таблице 5.2.1

Полиморфные варианты гена FBLN5 оказались ассоциированными с риском развития ПГ в группе женщин, имевших травматичные роды в анамнезе, т.к.

только в подгруппе с травматичными родами частоты рисковых аллелей значимо отличались у женщин с пролапсом и в контроле. В подгруппе женщин, у которых не было травм мягких родовых путей, частоты аллелей не различаются.

139

Таблица 5.2.1

Генотипы FBLN5 в контрольной и основной группах у женщин с наличием/отсутствием травматичных родов в анамнезе

140

Примечание: аp - уровень значимости; OR - odds ratio; 95% CI - 95% доверительный интервал

Таким образом, несмотря на существенно меньший размер группы, все выявленные ранее ассоциации оказались значимыми в страте с повреждениями родовых путей. Эффекты в более многочисленной группе без травматичных родов имели ту же направленность, что и в группе с травмами, но не достигали уровня

статистической значимости.

Гаплотип rs12586948-A, rs2018736-C, rs12589592-G, rs2474028-T,

представленный 4-мя рисковыми аллелями, чаще встречался у пациенток IIa

клинической подгруппы (c ПТО), имеющих в анамнезе указания на травматичные роды, чем у женщин IIб подгруппы (без ПТО) (табл.5.2.2), которые также имели указания на повреждения в родах мягких родовых путей, но у которых в

последующем не произошло развития ПТО: P 0,0047, OR = 4,24 95% CI: 1,58−11,36; частота встречаемости гаплотипа 10,9%. Подсчет числа рисковых