диссертации / 61

111

Отмечено также более интенсивное накопление антитела как в эндотелии сосудов, эпителии, цитоплазме фибробластов(фбл.), ECM у группы пациенток без генитального пролапса (Iб1) [Рисунок 4.2.4-а,-б].

Рис. 4.2.4 Показатели (интенсивность окрашивания) FBLN5 и LOXL-1 в ткани влагалища женщин репродуктивного периода (ИГХ) окрашивание по Вейгерту

Максимальную концентрация FBLN5 в постменопаузе (6 баллов) мы наблюдали в эндотелии сосудов Iб3 подгруппы, а самая минимальная − в ECM

подгрупы Iа3 (без пролапса); (3,4 балла).

Что же касается LOXL-1, то максимальная его экcпрессия (4 балла)

наблюдалась у пациенток без ПТО (Iб3) в эпителии. Мы не наблюдали усиления экспрессии LOXL-1 более 4,0 баллов ни в одном из элементов соединительной ткани вагинальной стенки пациенток любого возрастного периода.

112

Рисунок 4.2.5 Иммуногистохимическое исследование FBLN5 и LOXL-1 в стенке влагалища у женщин перименопаузального возраста

Прмечание: * − разница результатов достоверна при p<0,05; -фбл − фибробласты;- ECM − экстрацеллюлярный матрикс

Рисунок 4.2.6 Показатели (интенсивность окрашивания) FBLN5 и LOXL-1в ткани влагалища женщин перименопаузального периода (ИГХ) окрашивание по

Вейгерту.

113

Рис. 4.2.7 Иммуногистохимическое исследование FBLN5 и LOXL-1в стенке влагалища женщин постменопаузального возраста

Примечание: * − разница результатов достоверна при p<0,05; фбл. − фибробласты; ECM − экстрацеллюлярный матрикс

У женщин того же возраста с ПТО (Iа3) максимально низкая экспрессия LOXL-

1 была отмечена в эпителии и фибробластах – по 2 балла из 6-ти соответственно

(табл.4.2.3. рис. 4.2.8- а,-б; 4.2.8.-в,-г).

в ткани влагалища женщин постменопаузального периода (ИГХ) окрашивание по

Вейгерту

114

Как показано в таблице 4.2.2, при количественной оценке уровня экспрессии

FBLN5 и LOXL-1 отмечено высоко достоверное снижение экспрессии

матриксных белков в основной группе по сравнению с группой контроля.

Наиболее значимое снижение экспрессии FBLN5 отмечено в фибробластах и

ECM.: (фбл.) (3,7±0,7; p<0,001) и (ECM.) ( 2,6±1,0; p<0,001). Минимальная экспрессия LOXL-1 также отмечена в фбл. (2,2±0,5;p< 0,001) и ECM (2,2±0,5; p= 0,032) в основной группе (Ia).

По результатам, отраженным в таблице 4.2.3, максимальная экспрессия FBLN5

наблюдалась в эндотелии сосудов (6,0 баллов) у здоровых пациенток постменопаузального возраста (без пролапса) [подгруппа Iб3], а также во всех

элементах вагинальной стенки пациенток репродуктивного и перименопаузального возраста без ПТО. Что касается LOXL-1, то максимальная

его экспрессия достигала не более 4,7 баллов (из 6 возможных) в эндотелии

сосудов соединительной ткани вагинальной стенки здоровых женщин

репродуктивного возраста (Iб1).

Таблица 4.2.2

Результаты сравнительного анализа матриксных белков FBLN -5 и LOXL1 основной и контрольной группы

Примечание: * − оценка интенсивности окрашивания эластических волокон в баллах (0-6); эпит. − эпителий; фбл. − фибробласты; эндот. − эндотелий сосудов; ECM− экстрацеллюлярный матрикс

Максимально низкая (2,0 балла) экспрессия FBLN5 отмечена у пациенток

постменопаузального возраста основной группы в экстрацеллюлярном матриксе,

а и LOXL1 в эпителии и фибробластах.

115

Таким образом, важно отметить, что у здоровых пациенток постменопаузального возраста только в эндотелии осудов вагинальной стенки отмечалась максимальная экспрессия FBLN5 (6±0,0001; p=0,012), при относительно невысокой экспрессии LOXL-1 в эндотелии (4,0±0;p<0,001) и MMP-

9 (эндот.) (2,9±0; p=0,006). Ранее мы уже отмечали, что в вагинальной стенке пациенток в постменопаузе происходят изменения, связанные с процессами возрастной атрофии на фоне эстрогенного дефицита: атрофические изменения многослойного плоского эпителия, умеренное фиброзирование подлежащей стромы, фрагментация эластического волокна, а также утолщение стенок сосудов.

Таблица 4.2.3

Экспрессия FBLN5 и LOXL-1 в стенке влагалища пациенток с пролапсом гениталий и без пролапса гениталий

Примечание: * − оценка в баллах (0-6)

эпит. − эпителий; фбл. − фибробласты; эндот. − эндотелий сосудов; ECM− экстрацеллюлярный матрикс

Максимальная экспрессия FBLN-5 в эндотелии сосудов вагинальной стенки носит, на наш взгляд, компенсаторный характер, в том числе и в качестве ответа на умеренную фрагментацию эластических волокон, связанную с процессами естественного старения и низкого уровня эстрогенов. Физиологический эстрогенный дефицит вызывает нарушение кровоснабжения вагинальной стенки,

116

ее гипоксию, снижение транссудации и появление типичных симптомов вагинальной атрофии, что подтверждается цветным допплеровским картированием [16,38,193]. Однако, в наших исследованиях в эндотелии сосудов влагалища не произошло активации эластолитических протеаз (MMP-2,MMP-9)

на фоне высокой экспрессии FBLN5 в постменопаузе. Самая высокая экспрессия

FBLN5 отмечена нами также в эндотелии и при ПТО в постменопаузе

(4,6±1; p=0,012), однако и активность MMP-9 также была самой высокой в эндотелии (5±1; p= 0,006).

Наши результаты не противоречат ранее проведённым исследованиям Wenjun Zongetal et al (2011). Изучая содержание тропоэластина и зрелого эластина в слизистой влагалища у женщин периода пре- и постменопаузы с ПТО и без него авторы пришли к заключению, что при низком уровне эстрогенных гормонов уровень обоих белков самый высокий [336].

Иммуногистохимическая характеристика соединительной ткани стенки влагалища пациенток с пролапсом гениталий и без пролапса гениталий – исследование экспрессии ферментов MMP-2 и -MMP-9 и тканевого ингибитора металлопротеиназ (TIMP-2)

ММP-2 выявлялась в виде коричневого окрашивания цитоплазмы фибробластов, эндотелия сосудов, в экстрацеллюлярном матриксе и в эпителиальных клетках многослойного плоского эпителия.

При количественной оценке среднего уровня экспрессии ММP-2 в группе женщин с ПГ установлено повышение процента окрашенных клеток в эндотелии и фибробластах по сравнению с группой контроля (рис. 4.2.8-а,-б). При этом,

отмечалось достоверное повышение общего уровня экспрессии маркёра в репродуктивном возрасте в эндотелии сосудов и фибробластах (p<0,001), [рис. 4.2.9], а в перименопаузальном – только в фибробластах (p=0,022), [pис. 4.2.10].

117

Рисунок 4.2.8 Показатели (интенсивность окрашивания) MMP-2 в ткани влагалища женщин репродуктивного периода (ИГХ) окрашивание по Вейгерту

Рисунок 4.2.9 Иммуногистохимическое исследование MMP-2,-9 и TIMP-2 в стенке влагалища женщин репродуктивного возраста.

Примечание: * − разница результатов достоверна при p<0,05. фбл. − фибробласты; ECM − экстрацеллюлярный матрикс.

ММP-9 выявлялась также в виде коричневого окрашивания цитоплазмы

фибробластов, эндотелия сосудов, эпителиальных клеток и в ECM, что отражено

на рис. 4.2.12-а,-б;4.2.13-а,-б;4.2.14-а,-б.

При количественной оценке уровня экспрессии ММP-9 в группе женщин с ПТО

(Ia), установлено увеличение накопления маркера в эпителиальных клетках,

эндотелии сосудов, фибробластах, а также в ECM по сравнению с группой контроля (Iб).

118

Рисунок 4.2.10 Иммуногистохимическое исследование MMP-2,-9 и TIMP-2 в стенке влагалища женщин перименопаузального возраста.

Примечание:* − разница результатов достоверна при p<0,05. фбл. − фибробласты; ECM − экстрацеллюлярный матрикс

Рисунок 4.2.11 Иммуногистохимическое исследование MMP-2,-9 и TIMP-2 в стенке влагалища женщин постменопаузального возраста

Примечание: * − разница результатов достоверна при p<0,05; фбл.− фибробласты; ECM− экстрацеллюлярный матрикс

В группе перименопаузального возраста (Ia2) экспрессия ММP-9 в эпителии,

эндотелии и фибробластах была достоверно выше, чем в группах постменопаузального (Ia3) и репродуктивного возраста (Ia1), и достоверно выше по сравнению с группой контроля того же возраста (Iб2) [p<0,05]. Подобная тенденция экспрессии ММP-9 прослеживалась в группе репродуктивного

возраста. В группе женщин c ПТО постменопаузального (Ia3) возраста маркер

достоверно экспрессировался в несколько раз выше, чем в группе контроля того

же возраста (Iб3).

119

Рисунок 4.2.12 Показатели (интенсивность окрашивания) MMP-9 в ткани

влагалища женщин репродуктивного периода (ИГХ) окрашивание по Вейгерту

Рисунок 4.2.13 Показатели (интенсивность окрашивания) MMP-9 в ткани влагалища женщин перименопаузального периода (ИГХ) окрашивание по Вейгерту

Таким образом, экспрессия ММP-9 в эпителиальных и эндотелиальных клетках, фибробластах и ECM выше в группах с ПТО по сравнению с контролем,

что, вероятно, является звеном патогенетического механизма дезорганизации соеднительной ткани стенки влагалища, (p<0,05).

Полученные результаты показывают, что ПТО является следствием приобретенной дезорганизацией СТ и что возможная терапия, направленная на торможение экспрессии эластолитических ферментов ECM (MMP-2,-9 ) может быть успешной для предупреждения как возникновения ПТО у женщин, так и его прогрессии. При исследовании тканевого ингибитора матриксных протеиназ