3. Методы определения количества крови у животных

Современная физиология разработала различные прижизненные способы определения количества циркулирующей крови. Один из этих способов состоит в том, что животному вводят в кровь раствор безвред­ной краски. Через несколько минут, когда краска равномерно распреде­лится по крови, берут кровь из вены и по степени ее окрашивания судят о ее разбавлении, а, следовательно, и о количестве крови в организме.

Более точный способ определения общего количества крови основан на введении в кровь искусственных радиоактивных веществ, например, искусственного радиоактивного фосфора. У исследуемого берут из вены небольшое количество крови и до­бавляют к ней определенное количество фосфорнокислой соли, содер­жащей радиоактивный фосфор. Эритроциты, содержащие радиоактив­ный фосфор, отделяют от плазмы и вводят в кровяное русло, где они смешиваются со всей кровью. Через несколько минут берут пробу крови и определяют ее радиоактивность, что позволяет легко рассчи­тать общее количество крови.

Определение объема крови.

Общий объем крови млекопитающих составляет приблизительно 10-11%

массы тела лошади, 8-9% у собак, 7% у кошек, жвачных, лабораторных

грызунов и «холоднокровных» и 5-6% у свиней. Общий объем крови у

молодых, растущих животных превышает 10% массы тела. Определение

общего объема крови необходимо в различных ситуациях, например, при

расчете количества крови требуемого для трансфузии, или объема крови,

который может быть взят для постановки серии диагностических тестов без

ущерба для здоровья животного. Это требуется и в тех случаях, когда

животное предполагают использовать в качестве донора крови. Например,

исходя из того, что общий объем крови у кошек составляет 7% массы тела и

удельный вес крови равен 1 (1мл весит 1 г), можно рассчитать объем крови у кошки весом 4кг: 0,07×4=0,28кг=280мл. Поскольку у животного можно удалить без ущерба для здоровья 20% объема крови, в приведенном примере это составляет 280×2=56мл.

4. Способы получения плазмы и сыворотки крови, гематокрит

Получение плазмы

Для получения плазмы кровь необходимо предохранить от свёртывания добавлением антикоагуляторов – веществ, препятствующих свертыванию крови (гепарин, лимонно - кислый натрий).

СТАБИЛИЗИРОВАННАЯ КРОВЬ - кровь, предохраненная от свертывания. В пробирку или стеклянный цилиндр с антикоагулятором выпустить по 10 мл крови из яремной вены животного. Закрыв сосуд пальцем или пробкой, несколько раз перевернуть его для перемешивания крови.

1 способ. Цилиндр поставить в термостат кровь лошади - на 1 час, крупного рогатого скота - на 24…48 часов.

2 способ. Пробирку с взятой кровью поставить в цен­трифугу. Центрифугировать при 3000 об/мин в течение 20…30 минут.

Убедиться, что при стоянии или центрифугировании кровь расслаивается на плазму и форменные элементы

Получение сыворотки

Если выпущенную в сосуд кровь не стабилизировать антикоагулятором, происходит ее свертывание и образуется сгусток, содержащий форменные элементы и выпавший в осадок белок фибриноген.

Сгусток постепенно уплотняется, стягивается и от него отделяется прозрачная желтоватого цвета жидкость – сыворотка (происходит процесс ретракции)

СЫВОРОТКА - представляет собой плазму, лишенную белка фибриногена и других веществ, участвующих в свертывании крови.

1 способ. В пробирку или цилиндр без антикоагулятора выпустить 10 мл крови животного и поставить ее в термостат при 38°С на несколько часов. Образование кровяного сгустка и частич­ная ретракция, т.е. его стягивание и самопроизвольное отделение сыворотки наступает у лошадей через 1…3часа, а полное отделение сгустка через 12…18 часов. У крупного рогатого скота ретракция протекает значительно медленнее. Из пробирки, с полной ретракцией сгустка, слить или отсосать сыворотку и сравнить ее с плазмой. Сыворотка имеет желтовато-соломенный цвет и более прозрачна, чем плазма.

2 способ получения сыворотки. При выделении из крови фибриногена механическим путем, получают кровь, которая содержит все составные части, кроме белка фибриногена - ДЕФИБРИНИРОВАННУЮ КРОВЬ, т. е. эта кровь, теряет способность к свертыванию. Состав дефибринированной крови 

Получение дефибринированной крови

Дефибринированную кровь разлить в центрифужные пробирки и центрифугировать при 3000 об/мин в течение 10…15 минут. Форменные элементы оседают на дно. Сверху окажется сыворотка. Иногда она приобретает красноватый оттенок, вследствие разрушений эритроцитов из дефибринированной крови.

Получение фибрина

Положить в стеклянную колбочку 10…12 стеклян­ных бусинок и выпустить в нее из сосуда животного 20…30 мл крови. Взбалтывать кровь вращательными движениями в течение 10…15 минут. Фибриноген, выпадающий в осадок в виде волокнистых нитей фибрина, оседает на шариках. Затем профильтровать содержимое колбы через 2 слоя марли. Фильтрат представляет собой дефибринированную кровь, а осевшие на шариках "метелки" - нити фибрина - отмыть от форменных элементов водой. Фибрин имеет вид белого волокнистого вещества.