pyogenеs, Str. dysagalactiae, Str. equisimilis, а также у стрептокок-

ков группы G. Нейраминидазу синтезируют Str. dysagalactiae и пневмококки. Дезоксирибонуклеазу (разрушитель клеток в стреп-

тококковом гное) синтезируют Str. pyogenes, Str. dysagalactiae, Str. equisimilis, а также стрептококки группы G. У Str. pyogenes и

стрептококков группы G имеются эритрогенные токсины с пирогенным действием, ответственные за летальный шок.

Токсинообразование. Стрептококки выделяют различные экзотоксины:

1)гемолизины (стрептолизины), которые по своему составу неоднородны (различают О- и S-стрептолизины);

2)лейкоцидин;

3)некротоксин;

4)летальный токсин;

5)эритрогенный токсин, который действует на эритроциты. Токсин состоит из двух фракций: термолабильной, обладающей токсическим действием и антигенными свойствами, и термостабильной, являющейся аллергеном.

3 Микробиологические исследования и фаготипирование стрептококков

Патологический материал сеют в чашку Петри с 5%-м кровяным агаром, используя дефибринированную баранью кровь, и в пробирку с сахарным бульоном. Хотя стрептококки дают рост на воздухе, посевы лучше инкубировать в анаэробной атмосфере при 37°С. Инкубация в атмосфере СО2 стимулирует рост β-гемолитических стрептококков, не относящихся к группе А. С этими целями применяют анаэростат или эксикатор с горящей свечой.

Через 24–48 ч изучают колонии и рост в сахарном бульоне. В сахарном бульоне большинство пиогенных стрептококков дает придонный или пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, вся среда остается прозрачной, другие стрептококки могут давать интенсивное помутнение среды с образованием компактного осадка.

На плотных средах Streptococcus pyogenes растет с образованием нескольких типов колоний: мелких, плоских, суховатых колоний с зернистой структурой (вирулентные штаммы, содержа-

9

щие М-протеин); относительно крупных, блестящих, вязких с ровным краем (вирулентные, содержащие капсулу).

В окрашенных мазках из колоний стрептококков не отмечается типичного расположения кокков в виде цепочек. Клетки располагаются одиночно, попарно или небольшими скоплениями. В мазке из культуры в жидкой среде обнаруживают типичные цепочки стрептококков.

Str. pneumoniae на глюкозо-кровяном агаре образует круглые диаметром 0,5–1,5 мкм, полупрозрачные, плоские, с приподнятым центром и краями колонии. Если культивирование производится в аэробных условиях, обязателен α-гемолиз с зеленоватым оттенком, при анаэробной инкубации – β-гемолиз. По внешнему виду колонии похожи на колонии других зеленящих стрептококков. Могут встречаться мукойдные колонии – более крупные, с блестящей поверхностью, слизистой консистенции. В сыворо- точно-глюкозном бульоне растет с равномерным помутнением среды, с образованием пылевидного осадка.

Str. equi на кровяном агаре образует мелкие, слизистые, росинчатые колонии с зоной β-гемолиза, которые при дальнейшей инкубации становятся серо-белыми, непрозрачными. В жидкой питательной среде растет с ее помутнением.

Str. aqalactiae на кровяном МПА образует мелкие, сероватые, просвечивающиеся колонии с зоной β- или двойной α-гемолиза, часть штаммов не выделяет гемолизин. Для выявления скрытой гемолитической активности применяют САМР-тест. В сывороточ- но-глюкозном МПБ при росте возбудителя среда остается прозрачной, а формирующиеся крупинки оседают на дно пробирки.

Str. dysagalactiae на кровяном агаре образует широкую зону α-гемолиза.

Str. pyogenes на кровяном агаре формирует β-гемолитические колонии трех типов: крупные, блестящие, вязкие, в виде капли воды – характерны для свежевыделенных капсулообразующих штаммов; серые, матовые, зернистые, с неровным краемхарактерны для вирулентных штаммов, имеющих М-протеин; мелкие (0,1–0,3 мм), выпуклые, прозрачныеобычны для авирулентных лабораторных штаммов. На сывороточно-глюкозном бульоне растет с просветлением среды и выпадением зернистого осадка.

10

Str. uberis на кровяном агаре формирует колонии с зоной β-гемолиза или не дает гемолиз, на оптимальной жидкой питательной среде растет с ее равномерным помутнением.

Str.equi subsp. zooepidemicus на кровяном агаре образует мелкие колонии с зоной β-гемолиза, неотличимые от колоний S. pyogenes. При посеве материала на среду Эдварда можно установить тип гемолиза стрептококка и способность гидролизовать эскулин. S. agalactiae и S. dysagalactiae не гидролизуют эску-

лин, поэтому формируют бесцветные колонии. Колонии гидро-

лизующих эскулин стрептококков (S. porcinus, S. bovis, E. faecalis, E. avium и др.) имеют темный цвет.

Использование специальных дифференциально-диагнос- тических сред для выделения энтерококков позволяет подавить рост сопутствующей микрофлоры и ориентироваться при отборе необходимых колоний. На молочном МПА с полимиксином колонии энтерококков округлой формы, с ровными краями, блестящей поверхностью, диаметром 1,5–2 мм, с красноватым оттенком и зоной протеолиза на светло-голубом фоне.

На желчно-цитратном агаре энтерококки образуют колонии розово-красного цвета.

На теллуритовой среде E. faecalis растет с образованием колоний черного цвета, E. faecium на данной среде не растет.

Для определения скрытой гемолитической способности стрептококков ставят САМР-тест, который обычно используют для идентификации стрептококков серологической группы В (Str. aqalactiae). На кровяной агар бактериологической петлей по диаметру чашки Петри в виде полоски засеивают культуру гемолитического штамма S. aureus, дающего широкую зону неполного гемолиза. Отступив на 1–1,5 мм, перпендикулярно к штриху стафилококка высеивают культуры испытуемых стрептококков в виде горизонтальных полосок (3-4 штамма).

САМР-позитивные штаммы выделяют диффундирующие метаболиты, которые полностью лизируют клетки эритроцитов в зоне штриха стрептококка, прилегающей к культуре стафилококка, что оценивают как положительный результат. САМР-тест специфичен не только для Str .aqalactiae этот феномен и может быть обнаружен у стрептококков серогрупп U, E, P, K, V, G, F.

11

Подозрительные колонии пересевают на кровяной агар или в бульонную среду для накопления чистой культуры и ее дальнейшей идентификации. В ходе идентификации учитывают культу- рально-морфологические особенности культуры, ставят каталазный тест, определяют группу, вид и серовар стрептококка.

4 Серологические исследования

Известно более 20 серологических групп стрептококков. Иммунные серогрупповые сыворотки производятся ВГНКИ. Выпускаются коммерческие препараты, позволяющие установить серогрупповую принадлежность в пределах серогрупп A, B, C, F и G в реакции коагглютинации и латексагглютинации:

Phadebact (Pharmacia Diagnostics), Streptex (Wellcome Diagnostics), SeroSTAT (Scott Laboratories). Для выявления капсульного антигена пневмококков применяют Phadebact Pneumococcus Test (Pharmacia Diagnostics), Wellcogen Test (Wellcome Diagnostics) Pneumoslide (BBL Mycrobiology Systems).

Вкачестве примера серодиагностики может служить наиболее простой способ проведения реакции с набором Streptex, позволяющим идентифицировать стрептококки групп A, B, C, D, F и G (по Лэнсфильд) в реакции латекс-агглютинации.

Ход исследования.

Впробирку для каждого тестируемого микроорганизма вносят по 0,4 мл экстрагирующего фермента и на его основе готовят слабую суспензию (5–10 колоний) бета-гемолитического стрептококка (следует быть внимательным при оценке результатов, если используются альфаили не гемолитические стрептококки).

Суспензию инкубируют в водяной бане при 37°C от 10 мин до 1 часа (пробирки встряхивают после 5 мин инкубации).

Вкаждый из 6 обозначенных кружков на специальной пластинке наносят 1 каплю латекса и 1 каплю экстрагированного антигена, смешивают их отдельными деревянными или пластиковыми палочками, и, покачивая в течение 1 мин, учитывают результаты, сравнивая с положительным контролем (образуются хлопья, свидетельствующие об агглютинации частиц латекса); при отрицательном результате агглютинация отсутствует.

12