Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина»

Факультет ветеринарной медицины и биотехнологий

Кафедра эпизоотологии и микробиологии

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СТРЕПТОКОККОВЫХ ИНФЕКЦИЙ ЖИВОТНЫХ

Методические указания

к лабораторно-практическим занятиям по курсу «Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных» для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии, направление подготовки 36.05.01 «Ветеринария»

Вологда - Молочное

2016

УДК 619:616. 98(071)

ББК 55.146р30

Л 12

Составитель – канд. вет. наук, доцент кафедры внутренних незаразных болезней,

хирургии и акушерства Вологодской ГМХА Е.А. Рыжакина

Рецензенты :

канд. вет. наук, зав. отделом по изучению болезней животных незаразной этиологии ФГБНУ Вологодский филиал «Всероссийский научноисследовательский институт экспериментальной ветеринарии

имени Я.Р. Коваленко» Л.К. Семина, канд. вет. наук, доцент кафедры эпизоотологии и микробиологии

Вологодской ГМХА Ю.А. Воеводина

Л 12 Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций животных: Методические указания / Сост. Е.А. Рыжакина. – Вологда–Молочное: Вологодская ГМХА, 2016. – 19 с.

Методические указания рекомендованы для проведения лабораторнопрактических занятий по дисциплине «Лабораторная диагностика инфекционных болезней» для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии, направление подготовки 36.05.01Ветеринария.

В методических указаниях рассмотрены основные методы диагностики стрептококков.

Одобрено решением редакционно-издательского совета Вологодской государственной молочнохозяйственной академии имени Н.В. Верещагина.

УДК 619:616. 98(071) ББК 55.146р30

©Рыжакина Е.А., 2016

©ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА, 2016

2

7.Str. porcinus (лимфодениты поросят).

8.Str. suis mun (артриты и менингиты свиней, септицемия молодняка).

9.Str. uberis (мастит крупного рогатого скота).

10.Str. canis (плотоядныесептицемия новорожденных, поражение гениталиев, кожи).

11.Str. bovis и Str. equinus (возбудители оппортунистических

инфекционных болезней).

Лабораторные исследования осуществляются на основании «Методических указаний по лабораторной диагностике стрептококкоза животных» (1990) [7].

Лабораторная диагностика стрептококкозов основана на результатах бактериоскопического, бактериологического, биологического и серологического исследований.

Цель занятия:

1.Изучить морфологические, культуральные свойства, факторы патогенности стрептококков.

2.Изучить принципы лабораторной диагностики стрептококковых заболеваний.

План исследований

1.Материал для исследования.

2.Определение микроскопических свойств (морфология и физиолого-биохимическая характеристика стрептококков).

3.Микробиологические исследования и фаготипирование стрептококков.

4.Серологические исследования.

5.Биологический метод исследования.

6.Диагностика наиболее распространенных стрептококков.

4

1 Материал для исследования

Материалом для бактериологического исследования служат слизь, гной, отделяемое ран, кровь, молоко и др.,

Для посмертной диагностики берут кусочки паренхиматозных органов (печень, селезенку), головной мозг, трубчатую кость. При пневмониях отдельно берут кусочки легкого на границе здоровой и пораженной ткани, средостенные лимфатические узлы; при артритах – синовиальную жидкость. Труп мелкого животного направляют целиком.

Учитывая крайне низкую устойчивость возбудителя, материал должен быть доставлен для исследования не позднее 2–3 часов, при условии транспортировки на льду (4–6°С) не позднее 6 часов. Желательно использовать транспортные среды.

2 Определение микроскопических свойств (морфология и физиолого-биохимическая характеристика стрептококков)

Морфология

Стрептококки имеют круглую или овальную форму размером 0,6–1,0 мкм, располагаются в виде цепочек разной длины, грамположительные, неподвижные. Спор не образуют, жгутиков не имеют. Большинство штаммов стрептококков образуют капсулу, состоящую из гиалуроновой кислоты. Клеточная стенка содержит белки (М-, Т- и R-антигены), углеводы (группоспецифические) и пептидогликаны. Легко переходят в L-формы.

Располагаются цепочками. Длина цепочек различна: в бульонной культуре они длиннее, чем при росте на плотных питательных средах.

Клетки Str. pneumoniae в окрашенных препаратах овальные или сферические, размером 0,5–1,25 мкм, обычно парные. Также клетки могут располагаться одиночно, короткими цепочками, окружены капсулой.

Клетки Str. equi сферической или овальной формы, размером 0,6–1,0 мкм, располагаются одиночно, парами, короткими цепочками, в мазках из гноя в виде длинных цепочек, имеют капсулу.

5

Клетки Str. agalactiiae (Str. disgaiactiae) сферические, разме-

ром 0,6–1,2 мкм, чаще располагаются в виде коротких или средней длины цепочек.

Клетки Str. pyogenes сферические, размером 0,5–1,0 мкм, в виде коротких или длинных цепочек (из бульона).

Результаты микроскопического исследования имеют ориентировочное диагностическое значение.

Физиолого-биохимическая характеристика стафилококков

По типу дыхания – факультативные анаэробы, хоть есть отдельные виды с сильным анаэробизом.

На простых питательных средах стрептококки растут плохо. Хорошо культивируются на питательных средах с глюкозой, кровью, сывороткой при рН 7,2–7,6 и температуре 37°С.

На жидких питательных средах стрептококки растут пристеночно или придонно в виде зернистого осадка, оставляя бульон прозрачным.

На плотных средах колонии мелкие или средней величины (0,5–2,5 мм), полупрозрачные, плоские, блестящие, гладкие, реже шероховатые.

На плотных средах колонии стрептококков делят на 3 типа:

-Мукойдный (М) – крупные, блестящие, вязкие, похожие на каплю воды. Характерен для свежевыделенных капсулообразующих вирулентных штаммов.

-Шероховатый (R) – крупнее мукойдных, плоские с зернистой неровной или изрезанной поверхностью. Присущ свежевыделенным штаммам с умеренной вирулентностью.

-Гладкий (S) – мелкие, округлые, блестящие с гладкой поверхностью. Этот тип колоний образуют авирулентные лабораторные штаммы.

При выращивании на кровяном агаре одни стрептококки образуют колонии, окруженные зоной полного гемолиза, другие – зоной зеленого цвета в результате перевода гемоглобина в метге-

ленящие, β – гемолитические, γ – негемолитические (Starr M.P. и соавт., 1981, Бессарабов Б.Ф. с соавт., 2007). При α-гемолизе происходит частичное разрушение гемоглобина и образование от зе-

6

леной до буроватой (коричневой) зоны вокруг колонии, β-гемолиз приводит к полному разрушению эритроцитов и гемоглобина, что проявляется прозрачной гемолитической зоной, при γ-гемолизе – гемолиз не проявляется. Интересно, но некоторые виды стрептококков, такие как Str. pneumoniaе, в зависимости от доступа кислорода могут проявлять разные гемолитические свойства.

Таблица 1 – Типы гемолиза

Стрептококки обладают выраженной ферментативной активностью: разлагают глюкозу, мальтозу, лактозу, сахарозу с образованием кислоты, желатин не разжижают.

В сахарном бульоне дают придонно-пристеночный рост, а сам бульон остается прозрачным.

Стрептококки способны расщеплять аминокислоты, белки, углеводы. По биохимическим свойствам выделяют 21 вид. Большинство из них условно-патогенные. В 1933 Ребекка Лэнсфилд предложила метод серологического группирования стрептококков по специфическому полисахариду (С-вещество), который входит в состав клеточной стенки. Стрептококки, в связи с этой классификацией, были разделены на 21 серологическую группу. Данные серологические группы имеют различные антигенные свойства. Для их обозначения применяются латинские буквы (от А до Н и от К до Y).

Некоторые стрептококки не содержат полисахарид (С-вещество), и не могут быть идентифицированы по данной классификации (Str. pneumoniaе и др.). Другая классификация – Гриффита, основана на различных вариантах важного фактора патогенности – М-белка. Стрептококкоз может протекать как моноинфекция, так и в виде ассоциаций.

7

Таблица 2 – Серогрупповая принадлежность по Лансфильд

Резистентность стрептококков во внешней среде меньше, чем у стафилококков. В высушенном виде, особенно окруженные белковой оболочкой, они сохраняются несколько дней, но теряют вирулентность. При нагревании до 70°С погибают на протяжении 1 часа, наиболее употребляемые дезинфицирующие растворы вызывают их гибель через 15–20 мин.

Факторы патогенности. Адгезины – это липидный компонент комплекса липотейхоевой кислоты с белками клеточной стенки, обеспечивают взаимодействие с мембраной эпителия и колонизацию. Защиту от фагоцитоза обеспечивают:

1)антихемотаксический фактор;

2)Ig-новый Fc-рецептор (к IgG) – подавляет фагоцитоз, разрушает комплемент, вызывает дисбаланс иммуноглобулинов;

3)капсула (у серогрупп А и В) – защищает от фагоцитов;

4)М-белок, позволяет расти и размножаться в крови, лишенные М-белка клетки фагоцитируются без участия антител. М-белок обеспечивает так же способность проникать в клетки микроорганизмов и размножаться в них.

Ферменты: гиалуронидаза (фактор распространения) и стрептокиназа (фибринолизин), нейраминидаза, дезоксирибонуклеаза.

Str. pyogenеs, Str. dysagalactiae, Str. equisimilis имеют гиалу-

ронидазу, способствующую разрушению соединительной ткани и инвазии возбудителя. Фибринолизин обнаруживают у Str.

8