Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

ФГБОУ ВО «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина»

Факультет ветеринарной медицины и биотехнологий Кафедра эпизоотологии и микробиологии

Реакция непрямой гемагглютинации

и ее использование в ветеринарии

Методические указания

к лабораторно-практическим занятиям по курсу «Ветеринарная микробиология и микология», «Иммунология» и

«Ветеринарная вирусология и биотехнология» для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологий,

направление подготовки 36.05.01Ветеринария

Вологда-Молочное 2015

УДК 619:57.083.331(071) ББК 48.73 р 30

Р31

Составитель - канд. вет. наук, доцент кафедры эпизоотологии и микробиологии

Е.Н. Закрепина

Рецензенты:

канд. вет. наук, доцент кафедры эпизоотологии и микробиологии

Ю.А. Воеводина

канд.вет.наук, доцент кафедры ВНБ, хирургии и акушерства

Е.А. Рыжакина

Р 31 Реакция непрямой гемагглютинации и ее использование в ветеринарии: Методические указания/ Сост. Е.Н. Закрепина. – Вологда – Молочное: ВГМХА, 2015. – 13 с.

В методических указаниях рассмотрена одна из часто применяемых диагностических серологических реакций – реакция непрямой гемагглютинации. Описаны основные методики подготовки компонентов, постановки реакции и учета ее результатов.

Методические указания рекомендованы для проведения лабораторнопрактических занятий по дисциплинам «Ветеринарная микробиология и микология», «Иммунология», «Ветеринарная вирусология и биотехнология» для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологий, направление подготовки 36.05.01 – Ветеринария.

Печатается по решению редакционно-издательского совета Вологодской государственной молочнохозяйственой академии имени Н.В. Верещагина.

УДК 619:57.083.331(071) ББК 48.73 р 30

©Закрепина Е.Н., 2015

©ВГМХА, 2015

Введение

Серологические методы исследований в настоящее время являются одними из наиболее специфических.

В основе всех серологических реакций лежит иммунологическое взаимодействие между антигенами и антителами, в результате чего образуется комплекс антигенантитело. В серологических реакциях, применяемых для диагностических целей, один из компонентов должен быть известен. Именно по нему, ввиду специфичности, и определяют наличие другого (неизвестного) компонента.

Серологические реакции очень широко используются в ветеринарной практике:

1.Для диагностики инфекционных болезней животных и птиц (по известному компоненту определяют неизвестный).

2.Для серологической оценки поствакцинального иммунитета (по нарастанию титра антител в сыворотках крови).

3.Для изучения иммунологического фона среди поголовья животных и птиц (по числу сероположительных особей).

4.Для изучения антигенной структуры возбудителей инфекционных болезней.

5.Для оценки активности диагностических препаратов и вакцин.

6.Для изучения антигенного родства вирусов и патогенеза вирусных болезней.

3

1 МАТЕРИАЛЬНО-ТЕХНИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ

Инструменты и оборудование: пробирки, плексигласовые панели с лунками, пипетки на 1 мл, аппараты Такачи, Титертек, Колор или автоматические пипетки с изменяющимися объемами.

Материалы: эритроцитарные антигенные диагностикумы (для диагностики аденовирусной инфекции крупного рогатого скота, инфекционного ринотрахеита или др.), исследуемые сыворотки крови крупного рогатого скота, разбавитель для РНГА (реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации), физиологический раствор, дистиллированная вода, фильтровальная бумага, сосуд с дезраствором.

2 СУЩНОСТЬ И КОМПОНЕНТЫ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ

Одной из групп антител, участвующих в осадочных реакциях и вызывающих склеивание корпускулярного антигена, являются агглютинины.

Реакция агглютинации (РА) проявляется в том, что при добавлении сыворотки крови, содержащей специфические антигену антитела, к равномерной взвеси клеток антигена происходит их склеивание, образование комочков, хлопьев, которые постепенно оседая на дно пробирки, формируют осадок характерной формы.

В серологических реакциях данного типа один из компонентов обязательно должен быть корпускулярным, например в виде цельных бактериальных клеток, или растворимый микробный антиген сорбируют на каком-либо носителе: эритроцитах, частицах полистиролового латекса, коллодия, каолина и др. В зависимости от типа сорбента и сорбируемого компонента (антиген, антитело) различают реакции пассивной (непрямой) гемагглютинации, латексагглютинации, коагглютинации и др.

4

Одним из широко применяемых методов РА является

реакция гемагглютинации (РГА). Она основана на том, что некоторые виды бактерий и вирусов обладают способностью адсорбироваться на поверхности нерастворимых носителей (например, эритроцитов разных видов животных и птиц), вызывая их склеивание. Однако адсорбция антигена на поверхности эритроцитов не всегда проявляется образованием видимого осадка. Кроме того, РГА неспецифична, потому что эритроциты одного и того же вида животного могут адсорбировать различные антигены. Специфической является

реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА).

Впервые принцип РНГА обоснован в конце 40-х годов 20 века, когда нативные эритроциты были использованы для адсорбции бактериальных антигенов полисахаридной природы. С вирусными антигенами РНГА впервые описали Бернет и Андерсен (1946 г.). Дальнейшее развитие этот метод получил после работ Бойдена (1951 г.), который установил, что антигены приобретают способность адсорбироваться на эритроцитах, предварительно обработанных танином.

Другой тип РНГА, в основу которого положена адсорбция антител на поверхности эритроцитов с последующей их агглютинацией в присутствии гомологичного антигена, предложен в 1956 году. С применением эритроцитов, сенсибилизированных антителами, открылась возможность быстрого обнаружения антигенов в различных субстратах.

Эритроциты, к поверхности которых прочно присоединены антигены, называют эритроцитарным антигенным

диагностикумом или эритроцитами, сенсибилизированными антигеном. Эритроциты, к поверхности которых прочно присоединены антитела, называют эритроцитарным

антительным диагностикумом или эритроцитами, сенсибилизированными антителами.

Таким образом, сущность реакции состоит в том, что эритроциты, на поверхности которых предварительно адсорбированы антигены или антитела, приобретают способность агглютинироваться (склеиваться) в присутствии гомологичных сывороток (антител) или антигенов. Эритроциты при этом выполняют роль носителей, агглютинация которых происходит

5