4. Классификация и морфология актиномицетов.

Актиномицеты – это многочисленная группа бактерий, напоминающих по форме мицеллярные (плесневые) грибы.

Морфология. Как и бактерии являются прокариотами, имеют ядро, цитоплазму, мембрану, клеточную стенку. Похожи на грибы, имеют вид небольших или длинных разветвленных тонких несептированных нитей. На конце некоторых актиномицетов образуются одна или несколько экзоспор, которые являются органами плодоношения. Жгутиков, капсул и эндоспор не образуют, грамположительны. Размножаются простым поперечным делением, путем прорастания гиф и спор, почкованием.

По морфологии делятся на 3 группы:

• ПСЕВДОАКТИНОМИЦЕТЫ – включает некоторые бактериальные формы – Mycobecterium tbc, Bifidobacterium. Представители этой группы имеют х-ное деление: образуют структуру, похожую на мицелий гриба, но затем быстро дробится.

• ПРОАКТИНОМИЦЕТЫ – при делении также образуют структуру, похожую на мицелий гриба, к/й остаётся дольше, но затем т/же фрагментируется.

• ЭУАКТИНОМИЦЕТЫ – истинные лучистые грибки – род Streptomyces. Образуют устойчивый мицелий, размножаются спорами. Из представителей этого рода получают около 95% антибиотиков.

Методы выявления:

1. По Грамму (грамположительны). В пораженных тканях они образуют актиномикотическую друзу, которая представляет собой агрегаты переплетенного мицелия в центре с отдельными, отходящими наподобие лучей гифами с колбовидным утолщением на концах - по периферии. При окраске по Граму центр окрашивается позитивно, а поверхность негативно.

2. Микроскопические препараты из актиномицетов можно окрасить по методу Романовского-Гимзе и по Цилю–Нельсену (некоторые актиномицеты кислотоустойчивы).

3. Актиномицеты хорошо воспринимают анилиновые красители, например, метиленовый синий.

5. Классификация, морфология и ультраструктура спирохет. Методы исследования.

Методы выявления спирохет (Спирохеты плохо воспринимают красители).

• По методу Романовского-Гимзе

• Серебрением по Морозову,

• Негативное окрашивание по методу Бурри;

• В живом виде их исследуют с помощью фазово-котрастной и темнопольной микроскопии.

Метод Романовского-Гимзе. Краситель состоит из эозина, метиленового синего и азура растворенных в смеси метанола с глицерином. Базофильная зернистость окрашивается в синий цвет, эозинофильная - в красный, а нейтрофильная - в сиреневый цвет.

6. Принцип устройства темнопольного, фазово-контрастного, люминесцентного микроскопов и их использование в микробиологии.

Люминесцентная микроскопия основана на способности ряда веществ биологического происхождения или некоторых красителей светиться под действием падающего на них света. Микроорганизмы, содержащие хлорофилл, витамин В12, алкалоиды, некоторые антибиотики, обладают первичной люминесценцией. Клетки микроорганизмов, в которых люминесценция слабо выражена или отсутствует, обрабатывают специальными красителями - флуорохромами (акридиновый оранжевый, примулин, родамин и др.) в виде сильно разбавленных водных растворов: 1:500 -1:100000. Такие растворы слабо токсичны, что дает возможность изучать неповрежденную клетку.

Темнопольная микроскопия основана на освещении объекта косыми лучами света (эффект Тиндаля). При таком освещении лучи не попадают в объектив, поэтому поле зрения выглядит темным. Если в исследуемом препарате содержатся клетки микроорганизмов, то косые лучи отражаются от их поверхности, отклоняются от своего первоначального направления и попадают в объектив. На интенсивно черном фоне видны сияющие объекты. Такое освещение препарата достигается использованием специального темнопольного конденсора, которым заменяют обычный конденсор светлопольного микроскопа.

При микроскопировании в темном поле можно увидеть объекты, величина которых измеряется сотыми долями микрометра, что находится за пределами разрешающей способности обычного светлопольного микроскопа. Однако наблюдение за объектами в темном поле позволяет исследовать только контуры клеток и не дает возможности рассмотреть их внутреннюю структуру.

Фазово-контрастная микроскопия ценна прежде всего тем, что с ее помощью можно наблюдать живые объекты, которые имеют коэффициенты преломления, близкие к коэффициентам преломления среды. С точки зрения увеличения изображения объекта, никакого выигрыша не происходит, однако прозрачные объекты видны более четко, чем в проходящем свете обычного светлопольного микроскопа. При отсутствии специального микроскопа обычный световой может быть оснащен специальным фазово-контрастным устройством, которое переводит фазовые изменения световых волн, проходящих через объект в амплитудные. В результате этого живые прозрачные объекты становятся контрастными и видными в поле зрения.

С помощью фазово-контрастной микроскопии изучают форму, размеры, взаимное расположение клеток, их подвижность, размножение, прорастание спор микроорганизмов и т. д.

основанную на превращении невидимых фазовых изменений световых волн, вносимых объектом, в амплитудные, различимые глазом.