Методы выявления сенсибилизации in vitro
Определение количества IgЕ определенной специфичности или их общего
количества с помощью радиоиммунного или иммуноферментного методов.
РЕАКЦИЯ
ДЕГРАНУЛЯЦИИ.
Принцип метода: при фиксации комплексов аллерген+Ат на наружных мембранах клеток-мишеней (базофилов, нейтрофилов) наблюдается
их повреждение. На их поверхности появляется «корона» из гранул, которые
можно выявить при микроскопии. Степень дегрануляции соответствует степени сенсибилизации.
Показатель повреждения нейтрофилов (ППН)
Принцип метода: под действием аллергена снижается подвижность нейтрофилов.
Наиболее распространённых методов оценки иммунного статуса:
Общий анализ крови;
определение соотношения нейтрофилы/лимфоциты/моноциты;
СОЭ, СРБ (С-реактивный белок)
белковые фракции сыворотки крови (γ-глобулины).
2. Определение количества Т-лимфоцитов (процент и абсолютное число)
методами с моноклональными антителами (мАТ)
антителами к CD2, CD3,CD4, CD8, CD25
отношения CD4/CD8.
3. Определение В-лимфоцитов — CD19, CD21, CD22, CD72 или Ig+B.
4. Определение иммуноглобулинов классов G, М, А, Е в сыворотке крови и sIgA в
слюне. Соотношения их количества (G/M/A).
5. Поглотительная активность нейтрофилов крови, частиц латекса и/или стафилококков, кандид (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс);
оценка киллинга кандид, бактерий.
6. НСТ-тест (показатель бактерицидности нейтрофилов)
7. Определение циркулирующих иммунных комплексов (методом ПЭГ-
осаждения). Другие тесты по показаниям.
8. Антитела против стрептококка, дифтерийного токсина, гемофильной палочки,
столбнячного токсина, стафилококка, его токсина и вирусов (кори, гриппа).
9. Определение гемолитической активности комплемента и/или его компонентов.
10. Внутрикожные пробы (после забора крови!) с распространенными антигенами
(туберкулин, стрептокиназа-стрептодерназа, антигены бактерий и грибов).
11. По показаниям – определение ферментов, отсутствующих при первичных иммунодефицитах
(аденозиндезаминаза АДА, пуриннуклеозидфосфорилазы, альфафетопротеин при
атаксии; гранулы лейкоцитов при гранулематозной болезни).
12. Оценка интерферонового статуса:
концентрация интерферона в сыворотке крови;
уровень интерферона-и в культуре лимфоцитов крови после стимуляции
вирусом болезни Ньюкастла и стафилококковым энтеротоксином
соответственно.
13. HLA-типирование (при необходимости). HLA-главный комплекс гистосовместимости
14. Выявление цитокинов (по показаниям), в крови методом иммуноферментного анализа (ИФА) и в клетках системы иммунитета (СИ) методами проточной
цитометрии.
15. Определение общей g-цепи рецепторов цитокинов при тяжелом комбинированном иммунодефиците (ТКИД) методом проточной цитометрии.
3. Уровни оценки иммунного статуса
I этап. Клинический, ориентировочный
иммунологический анамнез
клинический анализ крови
выявление бактерионосительства
II этап. Иммунологический анализ крови – иммунограмма.
Иммунограмма включает тесты I и II уровней:
I уровень. Выявление дефекта иммунной системы
клинический анализ:
Определение относительного и абсолютного кол-ва лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов, тромбоцитов периферической крови.
б/х анализ крови: уровень γ-глобулинов в протеинограмме
гуморальный и.: концентрация сывороточных IgA, M, G
клеточный и.: определение относительного и абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов, NK
Опр. функциональной активности фагоцитов (HCT-тест)
Опр. гемолитической активности комплемента
II уровень Уточнение характера дефекта, выявленного тестами первого уровня*.
*Тесты 2 уровня выполняют не по списку, а избирательно для выявления и уточнения уровня иммунопатологии.
определение функц. активности субпопуляций лимфоцитов – РБТЛ
цитотоксичности
уровня цитокинов
концентрации компонентов комплемента в сыворотке крови (с3, с4, с5, с1)
субпопуляций лимфоцитов СD3, CD4, CD8, CD16 и др.
оценка различных этапов фагоцитоза
опр. подклассов Ig
определение ЦИК (циркулирующих иммунных комплексов)
исследование интерферонового статуса
кожные пробы