Иммунология. Занятие №6. Лабораторная диагностика иммунопатологических состояний у детей и взрослых

1. Лабораторная диагностика иммунопатологических состояний у детей и взрослых: методы, критерии оценки, интерпретация. _{вообще без понятия, что тут надо..}

Иммунодиагностика – раздел иммунологии, изучающий и разрабатывающий методы диагностики инфекционных и неинфекционных болезней, связанных с функцией иммунной системы.

Иммунный статус – структурное и функциональное состояние иммунной системы индивидуума, определяемое комплексом клинических и лабораторных иммунологических показателей.

Иммунный статус показывает, способна ли в данный момент иммунная система к иммунному ответу.

	Факторы, влияющие на иммунный статус:
	- климато-географические; - социальные; - экологические (физические, химические, биологические); - медицинские (лекарства, оперативные вмешательства, стресс) и т.д.
Иммунный статус характеризуют:
- концентрация Ig; - количество лимфоцитов и лейкоцитов;		- соотношение Т- и В- клеток; - функциональные показатели (например, способность ИК-клеток отвечать на стимуляцию)

2. Методы оценки иммунного статуса.

I. Общее клиническое обследование:

1. Жалобы пациента

2. сбор иммунологического анамнеза:

   Частота инфекционных заболеваний Характер течения заболеваний Выраженность температурной реакции Наличие очагов хронической инфекции Наличие признаков аллергизации

   Наследственная предрасположенность Профессиональные вредности Длительная терапия препаратами с иммуносупрессивными свойствами Принадлежность к группе риска Нарушение качества питания

3. Клиническое состояние

4. Оценка результатов клинического анализа крови:

• Содержание гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов

II. Состояние факторов неспецифической резистентности:

• Функциональная активность фагоцитов

• Оценка системы комплемента

• Содержание интерферона и лизоцима (если нужно)

III. Показатели гуморального иммунитета:

• Содержание Ig разных классов в сыворотке крови (по Манчини)

• Титр специфических антител (серологические реакции)

• Количество В-лимфоцитов в периферической крови (кластерный анализ, т.е. выявление специфических CD-молекул с помощью моноклональных антител)

• Бласттрансформация В-лимфоцитов (ответ на стимуляцию В-клеток митогенами*, например ЛПС-РБТЛ**)

*_{митогены – это вещества, стимулирующие митоз, **РБТЛ- реакция бласттрансформации}

IV. Показатели клеточного иммунитета:

• Число Т-лимфоцитов и их субпопуляций

• Бласттрансформация Т-лимфоцитов (ответ на стимуляцию Т-клеток митогенами – конканавалином А или фитогемагглютинином)

• Уровень гормонов тимуса и цитокинов, секретируемых Т-лимфоцитами (ИФА с моноклональными антителами)

+ Дополнительные тесты:

• Бактерицидность сыворотки крови

• Число С3 и С4 (это компоненты комплемента)

• Содержание ревматоидных факторов и др. аутоантител и т.д.

Определение количества Т-лимфоцитов:

Принцип метода:

1 этап. Центрифугирование => выделение лимфоцитов

2 этап. Реакция розеткообразования с эритроцитами барана => определение процента Т-лимфоцитов среди всех лимфоцитов

П ри добавлении к суспензии эритроциты барана адсорбируются на Т-лимфоцитов за счёт наличия на них рецепторов, фиксирующих эритроциты барана. Образуются розетки. Под микроскопом считают число розеток и общее количество лимфоцитов.

Определение количества В-лимфоцитов методом розеткообразования

Принцип метода аналогичен. Разница лишь в том, что используются эритроциты мыши, а не барана.

Оценка способности к пролиферации в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ)

П ринцип метода: Т-лимфоциты под воздействием митогенов, например, фитогемагглютинина (ФГА,) в культуре in vitro способны превращаться в большииие бластоподобные клетки с разрыхленным ядром и базофильной цитоплазмой, активно синтезирующие ДНК.

Определение концентрации иммуноглобулинов в реакции преципитации по Манчини

Принцип метода: образцы исследуемой сыворотки помещают в лунки

агаров геля, который содержит антитела против Ig определенного класса.

• Иммуноглобулины, диффундируют в агар.

• П ри взаимодействии с соответствующими антителами Ig образуют кольца преципитата

• Диаметр колец тем больше, чем выше концентрация Ig соответствующего класса в исследуемой сыворотке.

• Концентрацию иммуноглобулина определяют по калибровочной кривой (по заранее построенному с помощью эталонных сывороток графику).