- •Структура бактериальной клетки
- •Химический состав бактериальной клетки
- •Спорообразование.
- •Действие физических факторов на микроорганизмы
- •Дезинфекция
- •Питание бактерий
- •Питательные среды
- •Дыхание бактерий
- •Бактериологический метод изучения микроорганизмов
- •Актиномицеты, их морфология
- •Спирохеты, их морфология и биологические свойства
- •Риккетсии, их морфология и биологические свойства
- •Морфология и ультраструктура микоплазм
Дыхание бактерий
Дыхание относится к реакциям катаболизма. В результате дыхания происходит расщепление сложных молекул до простых с выделением энергии, которая запасается в молекулах АТФ (КПД около 40%).
АДФ + Ф + Е = АТФ
Процесс дыхания – это реакция окисления углеводов, которая может происходить в бескислородных условиях – анаэробный тип дыхания или гликолиз, и в присутствии кислорода – аэробный тип дыхания или окислительное фосфорилирование.
По типу дыхания бактерии делятся на аэробные и анаэробные. Существуеют бактерии облигатные ааэробы – растут только в присутствии кислорода (например микобактерии туберкулеза). Облигатные анаэробы растут только в бескислородных условиях (например возбудитель ботулизма). Факультативные анаэробы могут расти как в кислородной, так и бескислородной среде (кишечная палочка). Микроаэрофилы – им требуется для своего роста низкая концентрация кислорода (гемофильная палочка).
Брожение не является в полном смысле дыханием – это субстратное фосфорилирование углеводов или гликолиз с образованием пирувата и последующим превращением его в конечные продукты брожения – органические кислоты и спирты.
В результате гликолиза из 1 молекулы глюкозы образуется 2 молекулы АТФ.
Аэробный тип дыхания или окислительное фосфорилирование
Схема Глюкоза- окислительное фисфирилирование- 38АТФ + 6СО2 + 6Н2О
Анаэробный тип дыхания. Схема та же, что при аэробном, но акцептором электронов служат нитриты, либо нитраты, либо фосфаты.
Факультативные анаэробы при отсутствии кислорода получают АТФ с помощью брожения.
Молекулы образовавшегося АТФ участвуют в синтезе органических соединений, отдавая свою энергию и првращаясь в АДФ
А + В + АТФсинтез АВ + АДФ + Ф
Факультативные анаэробы могут размножаться как в присутствии, так и в отсутствие молекулярного кислорода (большинство патогенных и сапрофитных микробов).
Облигатные анаэробы — бактерии, для которых наличие молекулярного кислорода является вредным, задерживающим рост фактором (кл остри дни столбняка, анаэробной инфекции, ботулизма и др.).
Бактериологический метод изучения микроорганизмов
Выделение отдельных видов бактерий из исследуемого материала, содержащего, как правило, смесь различных микроорганизмов, является одним иэ этапов любого бактериологического исследования, проводимого с различными целями: диагностики заболеваний, определения микробной обсеменен-ности окружающей среды и т.д. Для выделения чистой культуры применяют методи, основанные на: 1) 'механическом разобщении бактериальных клеток; 2) предварительной обработке исследуемого материала с помощью физических или химических факторов, оказывающих избирательное антибактериальное действие; 3) избирательном подавлении размножения сопутствующей микрофлоры физическими или химическими факторами во время инкубации посевов; 4) способности некоторых бактерий быстро размножаться в организме чувствительных к ним лабораторных животных (биопробы).
Для механического разобщения клеток бактерий исследуемый материал петлей или пипеткой наносят на поверхность питательного агара в чашку Петри и равномерно распределяют стерильным шпателем. Затем этим же шпателем (не прожигая его в пламени горелки) материал растирают по поверхности питательного агара во второй чашке.
Посев материала также делают бактериальной петлей. Для этого в верхней части чашки густо заштриховывают зигзагообразными движениями петли небольшой участок агаровой среды, освободив таким образом петлю от излишнего материала. Затем наносят параллельные штрихи по остальной части среды. Иногда применяют метод пластинчатых разводок, который заключается в перемешивании различных разведении исследуемого материала с расплавленным и остуженным питательным агаром в колбе или пробирке. После этого его разливают в чашки Петри и инкубируют в термостате. Для уничтожения сопутствующих неспорообразующих микроорганизмов иссле-
рриый материал прогревают при 80°С или подвергают крат-еменному кипячению. Споры микроорганизма при этом охраняются и при посеве прогретого материала на питательную еду прорастают, образуя чистую бактериальную культуру в Ш случае, если принадлежат только данному виду. Если в едуемом материале содержатся споры разных видов бак-ерий, то данный метод для получения чистой культуры непри-оден.
Подавление размножения посторонней микрофлоры при еве исследуемого материала на питательные среды достается воздействием на них каких-либо факторов, не препят-рпвующих размножению основного микроба: неодинаковой ьной температуры для роста разных бактерий, анти-этиковили других химических веществ, а такжефагов, первом случае посевы инкубируют при температуре, задер-вающей рост сопутствующей микрофлоры. Так, например, выделения чистой культуры бактерий чумы посевы инку-руют при температуре около 5°С. Во втором случае в пита-ьную среду вносят соответствующее вещество или фаг в рого определенной концентрации, препятствующей размно-внию сопутствующих бактерий, но не оказывающей выраженного ингибирующего действия на исследуемый микроб. Кроме упомянутых методов, в бактериологической практике адгда применяются и другие, например для выделения чистой ультуры бактерий протея (Рго1еш ушеапз) используют его юсобность к «ползучему» росту.
Для выделения чистых культурбольшинства бактерий рбычно затрачивается не более 2—3сут. Для выращивания кобактерий туберкулеза этот срок удлиняется до 4-6 нед. Процесс выделения чистой культуры можноразделить на Несколько этапов. Первый этап. Из исследуемого материала готовят мазок, |»крашивают по Траму или другим методом и микроскопируют. |Дляпосеваисследуемыйматериалвслучаенеобходиости разводят в пробирке со стерильным изотоническим раствором иорида натрия. Одну каплю приготовленного разведения на-аосят петлей на поверхностьпитательногоагара вчашку 1етри и тщательно втирают шпателем в среду, равномерно распределяя материал по всей ее поверхности. После посева ку переворачивают дном кверху, подписывают и помещают Ш термостат при 37°С на 18—24 ч. . р Второйэтап.Просматривают чашки и изучают изолированные колонии, обращая
их форму, величину, .консистенцию и другие признаки. Для определения морфологии рлеток и их тинкториальных свойств из части исследуемой колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопи-руют. Для выделения и накопления чистой культуры одну изолированную колонию или несколько различных изолированных колоний пересевают в отдельные пробирки со скошенным агаром или какой-либо другой питательной средой. Для этого часть колонии снимают петлей, не задевая соседние колонии. Третий этап. Отмечают характер^ роста выделенной чистой культуры. Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашенного мазка, приготовленного из такой культуры, в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки. Однако в случае выраженного полиморфизма, присущего некоторым видам бактерий, в мазках из чистой культуры наряду с типичными встречаются и другие формы клеток.