Иммуноблоттинг
Иммуноблоттинг представляет собой метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА. Для этого метода предварительно готовятся стрипы, представляющие собой полоски нитроцеллюлозной мембраны с нанесенными белками (антигенами). Для получения стрипов антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на нитроцеллюлозную мембрану, которую разрезают на полоски (стрипы). В лаборатории обработку стрипов проводят как в ИФА: на полоски наносят сыворотку больного, затем несвязавшиеся антитела отмывают и наносят антииммуноглобулиновую сыворотку, меченую ферментом (конъюгат). Образовавшийся комплекс (антиген + антитело больного + антитело против иммуноглобулина человека) выявляют с помощью хромогенного субстрата, изменяющего окраску под влиянием фермента. При наличии комплекса антиген- антитело-антисыворотка на стрипе появляются окрашенные зоны.
Реакция иммунофлюоресценции
При люминесцентной (флюоресцентной) микроскопии препараты окрашивают специальными красителями (флюорохромами), которые связываются со специфическими клеточными структурами и под влиянием УФ-лучей обусловливают свечение объекта.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) предусматривает использование специфичных иммуноглобулинов, меченых флюорохромами (например, флюоросцеином изотиоцианатом). Комплекс “антитело+флюорохром” позволяет выявлять низкие концентрации антигенов.
Прямой метод РИФ основан на том, что микробы, обработанные антителами, мечеными флюорохромами, способны светиться в УФлучах.
Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса “антиген+антитело” с помощью антиглобулиновой сыворотки, меченой флюорохромом.
Люминесцентная микроскопия
M. tuberculosis
Бактерия
Бактерия
Флюорохром
Флюорохром
Иммунохроматографический анализ
Принцип метода состоит в том, что образец (цельная кровь, сыворотка крови, плазма крови, моча, экстракт тканей или фекалий), нанесенный на подложку, движется по мембране и доходит до зоны, где находятся специфически связывающиеся антитела. Здесь происходит специфическое связывание тестируемого белка (антигена), находящегося в образце, со специфическими антителами к нему. При наличии тестируемого белка в пробе на мембране появляются одна или две четко окрашенные полосы, свидетельствующие о негативном или позитивном результате теста. Для визуализации комплексов “антиген - антитело” используются конъюгированные красители на основе коллоидного золота.
Различают 2 варианта ИХА: прямой и конкурентный метод.
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования “Уральский государственный медицинский университет” Министерства здравоохранения Российской Федерации Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных заболеваний
Литусов Николай Васильевич доктор медицинских наук
профессор
Иммунобиологические препараты
Профилактические препараты: вакцины (живые, убитые, химические, генно-инженерные), анатоксины, сыворотки антитоксические, иммуноглобулины, бактериофаги, препараты нормальной микробиоты. Лечебные препараты: иммунные сыворотки, сыворотки антитоксические или антитоксины, иммуноглобулины, бактериофаги, пробиотики, антибиотики.
Диагностические препараты: диагностикумы из цельных бактериальных клеток, диагностикумы эритроцитарные (антигенные и антительные), диагностические сыворотки (агглютинирующие, преципитирующие, антитоксические, гемолитические), бактериофаги, комплемент. Иммуномодуляторы (пробиотики).
Иммунопрофилактика
Иммунопрофилактика - метод индивидуальной или массовой защиты населения от инфекционных заболеваний путем создания или усиления искусственного иммунитета при помощи вакцин.
Иммунопрофилактика
Неспецифическая |
|
|
|
Специфическая |
|
|
|
|
|
|
Правила ЗОЖ |
|
|
|
|
|
Активная |
|
Пассивная |
Иммуностимуляторы |
|
|
Сывороточные |
|
Вакцины |
|
|
|
|
препараты |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Неспецифическая иммунопрофилактика
Неспецифическая иммунопрофилактика предполагает:
–следование здоровому образу жизни (качественное полноценное питание, здоровый сон, режим труда и отдыха, двигательная активность, закаливание, отсутствие вредных привычек, благоприятное психоэмоциональное состояние);
–активацию иммунной системы с помощью иммуностимуляторов.
Особенности специфической иммунопрофилактики
Специфическая иммунопрофилактика направлена против конкретного заболевания. Она может быть активная и пассивная.
Активная специфическая иммунопрофилактика — создание искусственного активного иммунитета путем введения вакцин. Используется для профилактики инфекционных заболеваний до контакта организма с возбудителем. При инфекциях с длительным инкубационным периодом активная иммунизация позволяет предупредить заболевание даже после заражения (например, бешенством).
Пассивная специфическая иммунопрофилактика — создание искусственного пассивного иммунитета путём введения иммунных сывороток, γ-глобулинов или плазмы, содержащих антитела. Используется для экстренной профилактики инфекционных заболеваний с коротким инкубационным периодом у контактных лиц.
Активная иммунопрофилактика
Активная иммунопрофилактика предполагает использование вакцин, содержащих антигены микроорганизмов, индуцирующих развитие иммунного ответа в организме привитого. Используется для профилактики инфекционных заболеваний до контакта организма с возбудителем.
Иммунитет
Естественный |
|
|
|
Естественный |
|
Искусственный |
|
Искусственный |
|
|
(введение |
(перенесенная |
|
|
(материнские |
|
|
(иммунизация) |
|
|
иммуноглобу- |
инфекция) |
|
|
антитела) |
|
|
|
|
|
линов) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Препараты для иммунопрофилактики
Антигенные (вакцины, анатоксины)
Искусственный
активный
иммунитет
Антительные (иммунные сыворотки)
Искусственный
пассивный
иммунитет
Вакцины
Термин “вакцина” (франц. vacca – корова, vaccinia - коровья оспа) ввел в практику Л. Пастер в честь работ Э. Дженнера, впервые применившего для защиты от натуральной оспы материал из пузырьков коров, больных коровьей оспой. Спустя почти 100 лет после работ Э. Дженнера Л. Пастер сформулировал главный принцип вакцинации – применение ослабленных микробов для формирования иммунитета против вирулентных штаммов. Вакцина представляет собой препарат, предназначенный для создания искусственного активного иммунитета к инфекционным болезням.
|
Действующее начало вакцины – антигены микробной клетки. Вакцина |
|
|
|
изготавливается из живых ослабленных или убитых микроорганизмов, |
|
|
|
продуктов их жизнедеятельности (экзотоксинов), субклеточных фрагментов, |
|
|
|
отдельных микробных антигенов, полученных химическим или генно- |
|
|
|
инженерным путем. В состав вакцин входят также стабилизаторы |
|
|
|
(человеческий альбумин, сахароза, желатин, агар), консерванты (мертиолят |
|
|
|
натрия, формалин), адъюванты. |
|
|
|
Вакцины применяют парентерально (внутримышечно, подкожно, |
|
|
|
интраназально), перорально, ингаляционно (аэрогенно). |
|
|
|
Выделяют несколько типов вакцин: |
|
|
|
- живые вакцины; |
|
|
|
- инактивированные (убитые вакцины); |
Луи Пастер |
Эдвард Дженнер |
|
- химические вакцины; |
|
|
|
|
- рекомбинантные вакцины |
|
310 |
|
|
|
