
- •1. На чём основано практическое применение учения об иммунитете для профилактики и терапии? Что такое вакцины? Виды вакцин.
- •3. Контроль живых вакцин. Приведите примеры. Инактивированные вакцины: что содержат, из каких штаммов готовятся; этапы приготовления, консерванты; контроль инактивированных вакцин; что такое титр их?
- •5. Анатоксины : что содержат; получение, очистка; нативные и очищенные сорбированные препараты анатоксинов; перечислите применяемые на практике анатоксины.
- •7. Ассоциированные вакцины: что содержат? Приведите примеры. Лечебные вакцины: при каких заболеваниях применяются, на чём основано их лечебное действие; приведите примеры.
- •8. Иммунные сыворотки: что содержат, как их получают, для какой цели исп.? Как назыв. Сыворотки, полученные от животных? От человека?
- •9. Антитоксические сыворотки: получение, очистка, контроль, титрование; условия хранения, в каких единицах измеряется биологическая активность антитоксических сывороток?
5. Анатоксины : что содержат; получение, очистка; нативные и очищенные сорбированные препараты анатоксинов; перечислите применяемые на практике анатоксины.
Анатоксины - препараты, полученные из белковых бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные своих токсических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства.
Получение: Токсигенные бактерии выращивают на жидких средах, фильтруют с помощью бактериальных фильтров для удаления микробных тел, к фильтрату добавляют 0,4% формалина и выдерживают в термостате при температуре 30-40°С на 4 недели до полного исчезновения токсических свойств, проверяют на стерильность, токсигенность и иммуногенность. Эти препараты называются нативными анатоксинами, в настоящее время почти не используются, т. к. содержат большое количество балластных веществ, неблагоприятно влияющих на организм. Анатоксины подвергают физической и химической очистке, адсорбируют на адъювантах. Такие препараты называются адсорбированными высокоочищенными концентрированными анатоксинами.
Полученный анатоксин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Такие препараты получили название нативных анатоксинов, т. к. они содержат большое количество веществ питательной среды, которые являются балластными и могут способствовать развитию нежелательных реакций организма при введении препарата.
Нативные анатоксины необходимо вводить в больших дозах из-за их невысокой удельной активности. Поэтому в настоящее время применяются преимущественно очищенные анатоксины, для чего нативные анатоксины подвергают обработке различными физическими и химическими методами (ионнообменной хромотографии, кислотному осаждению и др.), чтобы освободить от всех балластных веществ и сконцентрировать препарат в меньшем объеме. Однако уменьшение размеров частиц анатоксина сделало необходимым адсорбировать препарат на адъютантах.
Для очистки анатоксинов от балластных белков применялось фракционное осаждение различными концентрациями сульфата аммония. В настоящее время этот метод используется лишь на отдельных этапах очистки и концентрации небольших объемов анатоксинов.
В зарубежных странах для очистки и концентрации дифтерийного и столбнячного анатоксина применяют метод ультрафильтрации через почкообразные фильтры, покрытые 8%парлодиновой оболочкой. Осадок после растворения в воде фракционируют сульфатом аммония при различных процентах насыщения. Очищенный дифтерийный анатоксин содержит 1800-2500 Lf на 1 мг общего азота (Lf - сокр. англ, limit of flocculation - порог флоккуляции).
В СССР для очистки и концентрации анатоксинов ботулинических, возбудителей газовой гангрены, дифтерийного и столбнячного анатоксинов применяют кислотное осаждение. Перед подкислением для усиления ионной силы раствора в анатоксины растворяют 10-30% хлорида натрия. Затем понижают рН анатоксинов до 3,5, добавляя НСl; выпавший осадок отделяют от жидкости и растворяют в 1/20 части изотонического раствора хлорида натрия от объема исходного анатоксина. Полученный концентрат анатоксинов подвергают дальнейшей очистке повторным осаждением ацетоном. При кислотном осаждении столбнячного и других анатоксинов в некоторых лабораториях для усиления ионной силы раствора анатоксина применяют гексаметофосфат. Бактериальные токсины и анатоксины можно очистить с помощью сорбции фосфатом алюминия, гидратом окиси алюминия, фосфатом кальция и другими неорганическими сорбентами с последующей элюцией; кроме того, все более широкое применение находят методы ионообменной хроматографии и гель-фильтрации через сефадексы различных марок
Анатоксины применяются для профилактики и реже, для лечения токсинемических инфекций (дифтерия, газовая гангрена, ботулизм, столбняк). Так же анатоксины применяются для получения антитоксических сывороток путем гипериммунизации животных. Примеры препаратов: АКДС, АДС, адсорбированный стафилококковый анатоксин, ботулинистический анатоксин, анатоксины из экзотоксинов возбудителей газовых инфекций.
6. Реакция флоккуляции: что является антигеном, что антителами, как проявляется взаимодействие между ними; что такое инициальная флоккуляция, и в каком случае она наступает; в каких единицах измеряется активность анатоксинов?
Тип реакции: частный случай реакции преципитации (нейтрализации).
Исследуемый материал: антитоксическая сыворотка.
Диагностический препарат: токсин или анатоксин в строго определенном количестве.
Принцип метода: к серийным разведениям антитоксической сыворотки добавляют одинаковое количество антигенных единиц токсина или анатоксина.
Положительный результат - образование хлопьев преципитата (флоккулята); отрицательный результат - прозрачная жидкость.
Применение: определение активности антитоксической сыворотки (количества ME - международных единиц в 1 мл сыворотки).
Трактовка результатов: первичная (инициальная) флоккуляция наступает в пробирке, где АГ (антиген) и АТ (антитело), находятся в эквивалентных количествах. Зная количества ингредиентов в пробирке, где произошла инициальная флоккуляция, можно рассчитать активности антитоксической сыворотки. Например, инициальная флоккуляция наступила в пробирке, где находится 0,02 мл сыворотки и 4 АЕ (антигенных единиц) токсина или анатоксина. Составляем пропорцию: 0,02 мл сыворотки эквивалентно 4 АЕ токсина или анатоксина.