- •2. Строение - какую форму чаще всего имеет, какие химические компоненты содержит; размеры - в каких единицах измеряется величина бактериофагов?
- •4. Как обнаружить действие бактериофага на бактерии в жидкой и на плотной питательной среде? Как будет выглядеть положительный результат?
- •5. Что такое титр бактериофага? Как его определяют и обозначают?
- •6. Что такое умеренный бактериофаг. Опишите взаимодействие умеренного бактериофага с бактериальной клеткой.
- •7. Применение бактериофагов в практической медицине, на каком свойстве оно основано? Лекарственные формы бактериофагов, каким требованиям они должны соответствовать? Условия хранения
- •8. Приведите примеры бактериофагов, применяющихся для лечения, для диагностики, для фаготипирования.
- •9. Дайте определение понятий «наследственность» и «изменчивость».
- •10. Основные этапы развития учения о наследственности и изменчивости у микроорганизмов.
- •11. Что такое генотип, фенотип? Особенности структуры генома прокариотов.
- •13. Какими символами обозначаются генотип и фенотип бактерий?
- •16. Что такое транспозоны, Is-последовательности?
- •17. Формы изменчивости микроорганизмов: генотипическая и фенотипическая.
- •18. Механизмы наследственной изменчивости бактерий: мутации и рекомбинации, виды рекомбинаций.
- •19. Укажите фамилию учёного, опыты которого с пневмококками наметили пути для поиска материальной основы наследственности.
- •20. Опишите механизм трансформации, трансдукции, конъюгации.
- •21. Применение генетических методов в диагностике инфекционных заболеваний.
- •22. Достижения генетической инженерии и биотехнологии: перечислите основные продукты, применяемые в медицине.
- •23. Геномная инженерия: методы, достижения. Значение изменчивости микроорганизмов для практической медицины
- •24. Значение изменчивости микроорганизмов для практической медицины.
4. Как обнаружить действие бактериофага на бактерии в жидкой и на плотной питательной среде? Как будет выглядеть положительный результат?
Метод титрования бактериофага по Аппельману (на жидкой питательной среде).
Готовят десятикратные разведения исследуемого бактериофага в питательном бульоне. Для этого в ряд пробирок разливают по 4,5 мл бульона. В 1-ю пробирку добавляют 0,5 мл исследуемого фага. Тщательно перемешивают и переносят в последующие пробирки (из пробирки в пробирку) по 0,5 мл соответствующего разведения фага с уменьшением его концентрации в десять раз. Получают разведения от 10-1 до 10-9 степени. Затем в пробирки вносят по 1 капле суточной культуры соответствующих бактерий. После инкубации в течение суток определяют титр фага. За титр бактериофага принимают то его максимальное разведение, при котором наблюдается полный лизис культуры (просветление среды).
Метод титрования бактериофага по Грациа (на плотной питательной среде) .
Питательный агар разливают в чашки Петри и подсушивают в термостате. Готовят полужидкий питательный агар по 3-4 мл в пробирке и растапливают его на водяной бане. Делают десятикратные разведения исследуемого бактериофага в изотоническом растворе хлорида натрия. Затем 0,5 мл каждого разведения бактериофага смешивают с таким же объёмом суточной бульонной культуры чувствительных к бактериофагу бактерий и выливают эту смесь в пробирку с полужидким агаром температурой 45°C. Приготовленную смесь быстро выливают на поверхность первого слоя агара в чашке Петри, где она застывает в виде тонкого слоя. После застывания второго слоя агара чашки инкубируют при 37°C в течение суток. Смеси бактериофага, культуры и полужидкого агара делают из разведений фага 102 -1010 в зависимости от предполагаемого титра фага. Не заражённые бактериофагом бактерии, размножаясь, образуют сплошной газон роста на поверхности питательного агара. Каждая инфицированная бактериофагом бактерия лизируется и освобождает потомство бактериофага, которое внедряется в интактные клетки бактерий, и весь цикл повторяется. В результате лизиса клеток на сплошном бактериальном газоне появляются «стерильные» пятна или негативные колонии бактериофага. Число этих пятен соответствует количеству фаговых частиц в засеянной смеси. 56 Количество пятнообразующих единиц в 1 мл исходной суспензии бактериофага называется его титром.
5. Что такое титр бактериофага? Как его определяют и обозначают?
Титр бактериофага - это количество активных фаговых частиц в единице объема исследуемого материала. Для определения титра бактериофага наиболее широко в практике работы с бактериофагами применяется метод агаровых слоев, предложенный А. Грациа (A. Gratia) в 1936 г. Этот метод отличается простотой выполнения и точностью получаемых результатов и с успехом используется также и для выделения бактериофагов. Сущность метода состоит в том, что суспензию бактериофага смешивают с культурой чувствительных бактерий, вносят в агар низкой концентрации («мягкий агар») и наслаивают на поверхность ранее подготовленного 1,5% питательного агара в чашке Петри.