Билет №1.

1. Описать постановку реакции нейтрализации в цветной пробе.

Ответ: Клетки выращивают обычным способом в матрацах до обра­зования сплошного монослоя. Затем их снимают со стекла версеном, осаждают центрифугированием при 1000 об/мин 5—10 мин, ресуспендируют в питательной среде, контролируют на стериль­ность

Титрование вирусов в цветной реакции. Готовят 10-кратные разведения вирусной суспензии на пит среде, содержа­щей 2% бычьей сыворотки. Каждое разведение вируса вносят в объеме 0,25 мл в 2 пробирки. К ним добавляют по 1ой дозе кл в объеме 0,25 мл, 0,25 мл пит среды и 0,6—0,8 мл вазелинового масла.

В пробирках, содержащих вирус, клетки дегенерируют и цвет среды не изменяется или меняется лишь частично: остается красным или оранжевым. Желтый цвет среды в пробирках свидетель­ствует об отсутствии вируса и наличии живых клеток.

Результаты реакции оценивают по методу Рида — Менча, ус­танавливая то наибольшее разведение вирусной суспензии, кото­рое подавило метаболизм в 50% зараженных пробирок (среда со­хранила красный или оранжевый цвет), и принимая его за одну ЦПД₅о.

2. Алгоритм определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных дисков.

При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериал суспензию опред плотности и затем помещают диски, содержащие опред кол-во а/б. Диффузия а/б в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорг вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35^о-37^оС в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах.

Билет №2.

1. Описать принцип микроскопии с использованием фазово-контрастного микроскопа.

2. Реакция связывания комплемента. Ингредиенты. Механизм. Результат.

Ответ: Реакция связывания комплемента (РСК) относится к сложным серологическим реакциям. Для ее проведения необходимы 5 ингредиентов, а именно: АГ, AT и комплемент (первая система), эритроциты барана и гемолитическая сыворотка (вторая система).

Антигеном для РСК м б культуры различных убитых микроорг, их лизаты, компоненты бак, патологически измененных и норм органов, ткан липидов, вирусы и вирусосодержащие материалы.В кач-ве комплемента испол свежую или сухую сыворотку морской свинки.

(Для постановки РСК необходимы: сыворотка больного, комплемент, гемолитич сис-ма, состоящая из эритроцитов барана и гемолитич сыворотки, а также изотонич р-р хлорида натрия. Р-цию ставят в серологических пробирках).

Механизм реакции РСК проводят в 2 фазы: 1-я ф — инкубация смеси, содержащей 3 компонента антиген + антитело + комплемент; 2-я ф (индикаторная) — выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитич сис-мы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитич сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й ф р-ции при образовании комплекса антиген —антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й ф гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет; р-ция полож. Если антиген и антитело не соответ друг другу (в исслед образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й ф присоед к комплексу эритроцит — антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз; реакция отрицательная.

Результаты р-кции учитывают по наличию или отсут гемолиза эритроцитов в гемолитич сис-ме. РСК применяют при диагностике сифилиса (р-ция Вассермана), гонореи (р-ция Борде—Жангу), токсоплазмоза, риккетсиозных и вирусных заб.Эту р-цию применяют для обнаружения антител в сыворотке крови больных при бактериальных, вирусных, протозойных инфекциях, а также для определения и типирования вирусов, выделенных у больных.