17. Нужно ли применять иммерсионное масло при микроскопии с объективом: х8, х40, х90?

Иммерсионным объективом пользуются следующим об­разом. Приготовленный прижизненный, или фиксирован­ный, препарат бактерий сначала рассматривают при помощи объектива сухой системы (х 10, х 20, х 30, х 40), найдя наибо­лее интересное место на нем. Препарат закрепляют на столи­ке зажимами, в центр его (на покровное стекло или на пред­метное в случае фиксированного препарата) наносят каплю иммерсионного масла и заменяют сухой объектив на иммер­сионный (х 90). Обычно этот объектив отмечен снаружи по периметру черной полосой и имеет подвижно закрепленную линзу. Объектив должен погрузиться линзой в каплю масла, но не касаться вплотную препарата, чтобы не получилось повреждения. Фокус уточняют с помощью микровинта, который используют для детального изучения препарата. При этом сле­дует увеличить освещение, открыв диафрагму конденсора.

18. Какие способы окраски называют простыми, а какие сложными?

Простой метод окраски. Является одноэтапным и заключается в окраске микропрепарата одним красителем. Используют основные анилиновые красители, такие как, фуксин, генцианвиолет, метиленовый синий в виде водных растворов или пропитанных красителем фильтровальных бумажек, которые помещают на мазок и смачивают водой. Продолжительность окраски составляет 3-5 минут, после чего микропрепарат промывают водой, высушивают и микроскопируют. В препаратах, окрашенных простым методом, можно получить представление о форме, расположении и размерах микробных клеток.

Сложные методы окраски. Сложные (дифференцирующие) методы окраски (по Граму, Цилю-Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и дополнительных способов обработки препаратов. Эти методы позволяют дифференцировать бактерии в зависимости от строения их структур, чаще всего поверхностных. Например, метод окраски по Граму позволяет дифференцировать бактерии по строению их клеточной стенки: грамположительные (фиолетовые) с толстой и грамотрицательные (красные) бактерии с тонкой клеточной стенкой.

Существуют специальные сложные методы окраски, которые используют для выявления структурных компонентов бактериальной клетки: капсул, цитоплазматических включений, спор, жгутиков.

19. В какие цвета окрашиваются грамположительные и грамотрицательные бактерии и почему?

Окрашивание по Граму или окрашивание по Граму , также называемое методом Грама , представляет собой метод окрашивания, используемый для различения и классификации видов бактерий на две большие группы: грамположительные бактерии и грамотрицательные бактерии . Название происходит от датского бактериолога Ганса Христиана Грама , который разработал эту технику. Окрашивание по Граму позволяет дифференцировать бактерии по химическим и физическим свойствам их клеточных стенок . Грамположительные клетки имеют толстый слой пептидогликана в клеточной стенке, который сохраняет первичное окрашивание - кристаллический фиолетовый . Грамотрицательные клетки имеют более тонкий слой пептидогликана, который позволяет кристаллическому фиолетовому вымываться при добавлении этанола. Они окрашиваются в розовый или красный цвет из-за контрастного красителя , обычно сафранина или фуксина . Раствор йода Люголя всегда добавляется после добавления кристаллического фиолетового, чтобы укрепить связи пятна с клеточной мембраной. Окрашивание по Граму почти всегда является первым шагом в предварительной идентификации бактериального организма. Хотя окрашивание по Граму является ценным диагностическим инструментом как в клинических, так и в исследовательских целях, не все бактерии могут быть окончательно классифицированы с помощью этого метода. Это дает начало группам с граммовой переменной и грамм-неопределенным.

20. Чем обусловлена способность бактерий различно окрашиваться по Граму?

Способность или неспособность бактерий к окрашиванию по Граму обусловлена строением их клеточной стенки. Осн. её компонентом является сложный биополимер пептидогликан (муреин).

21. Какие бактерии (кокки, палочки, извитые) красятся по Граму положительно и какие отрицательно?

Кокки окрашиваются по Граму положительно, за исключением гонококков и менингококков. Палочки, не образующие спор, грамотрицательны, за исключением палочек дифтерии, туберкулёза и проказы. Палочки, образующие споры (бациллы и клостридии), - грамположительны. Извитые формы (вибрионы и спириллы) грамотрицательны.

22. Из каких слоев состоит клеточная стенка грамположительных и грамотрицательных бактерий?

Клеточные стенки бактерий состоят из пептидогликана (муреина) и бывают двух типов: грамположительного и грамотрицательного. Клеточная стенка грамположительного типа состоит исключительно из толстого слоя пептидогликана, плотно прилегающего к клеточной мембране и пронизанного тейхоевыми и липотейхоевыми кислотами. При грамотрицательном типе слой пептидогликана существенно тоньше, между ним и плазматической мембраной находится периплазматическое пространство, а снаружи клетка окружена ещё одной мембраной, представленной т. н. липополисахаридом и являющаяся пирогенным эндотоксином грамотрицательных бактерий.

23. Какие бактерии более чувствительны: а) к пенициллину, детергентам, к основным красителям; б) к азидам, окислителям, стрептомицину, переваривающему действию протеаз?

А) грамположительные

Б) грамотрицательны

Грамотрицательные бактерии, в отличие от грамположительных бактерий, в дополнение к клеточной стенке и внутренней мембране имеют еще и внешнюю мембрану, что значительно затрудняет процесс проникновения молекулы антибиотика в бактериальную клетку.

24. Какие патогенные бактерии являются кислоустойчивыми?

Для клеточной стенки некоторых грамположительных бактерий (микобактерии нокардии и др.) характерна более сложная структура. Основу их клеточной стенки, также как и у других грамположительных бактерий, составляет муреиновый каркас, однако последний связан с полисахаридами и липидами. В состав липидов входит много жирных кислот (туберкулостеариновая, миколовая и др.), восков, фосфолипидов, которые придают клеточной поверхности гидрофобность. Гидрофобность, с одной стороны делает клетку устойчивой к действию различных химических веществ (такие бактерии называются кислотоустойчивыми), с другой стороны тормозит обмен клетки с окружающей средой и замедляет ее рост. Такие бактерии могут длительно сохраняться в окружающей среде и менее чувствительны к различным неблагоприятным факторам внешней среды и защитным факторам организма. Примером таких бактерий служит возбудитель туберкулеза – Mycobacteriumtuberculosis. Кислотоустойчивость микобактерий является важным диагностическим признаком, для ее определения пользуются окраской по методу Циля-Нильсена.