Настройка конденсора
Независимо от того, используете Вы сухой или масляный тип конденсора, для реализации его оптимальной работы сначала его необходимо должным образом центрировать относительно оптического пути микроскопа. С этой целью конденсоры темного поля оснащены двумя юстировочными винтами. Центровка выполняется, начиная с малых увеличений (объективы 10х/20х). Чтобы помочь в выполнении юстировки, на верхней линзе конденсора может быть специально расположен небольшой кружок.
Для работы в темном поле микроскоп должен быть оснащен мощным источником освещения, полевая и апертурные диафрагмы полностью раскрыты, никакие фильтры не должны быть установлены на оптическом пути.
При нанесении масла на линзу высокоапертурного конденсора следует быть максимально аккуратным, чтобы избежать образования маленьких пузырьков. Фактически, техника должна быть доведена до исключительного совершенства. Пузырьки воздуха приведут к появлению паразитных бликов и дисторсии, что, в свою очередь, станет причиной снижения контраста и ухудшения качества изображения в целом.
Также следует использовать предметные и покровные стекла соответствующей толщины. Слишком тонкие или слишком толстые стекла затруднят фокусировку конденсора.
Порядок работы
Для проведения наблюдений по методу темного поля необходимо:
Выбрать окуляр и объектив микроскопа, подходящие для наблюдения.
Настроить освещение.
Заменить штатный конденсор микроскопа на конденсор темного поля и убедиться, что он надежно закреплен стопорным винтом.
Нанести на верхнюю поверхность линзы конденсора 1–2 капли иммерсионной жидкости и проверить, что жидкость не содержит пузырьков воздуха.
Закрепить на предметном столике образец для исследований. Желательно использовать предметное стекло толщиной до 1,2 мм.
Переместить конденсор так, чтобы иммерсионная жидкость покрыла всю площадь контакта между предметным столиком и верхней линзой конденсора.
При помощи винтов отрегулировать положение конденсора относительно объектива таким образом, чтобы наблюдаемое в поле зрения микроскопа световое пятно стало минимальным или исчезло вовсе.
Сфокусировать микроскоп на исследуемом образце. Вы должны наблюдать эффект темного поля: светлые участки объекта на темном поле. При отсутствии образца на предметном столике в выходном зрачке
объектива не должно быть видно света.
Преимущества
Главное преимущество метода микроскопии в темном поле – это реальная возможность изучения прозрачных объектов, визуализация который просто невозможна путем применения способа светлопольной микроскопии. Это основная задача оборудования такого типа.
При наличии такой необходимости такой микроскоп доукомплектовывается видеоокуляром, а программное обеспечение с легкостью может позволить вывести изображение на экран монитора компьютера. Это дает возможность применения дополнительных фильтров, сохранения полученной информации на электронные носители.
Недостатки
Так как основной луч света не попадает в объектив, а используется рассеянный свет, то для его формирования требуется весьма мощный осветитель. А последний, в свою очередь, может значительно нарушить ее структуру или же и вовсе вызвать ее гибель.
При проведении такого исследования исключается возможность использовать толстые предметные и покровные стекла, так как фокусировка может происходить не на самом исследуемом объекта, а смещаться в толщину самого стекла.
Сам факт визуализации объекта в темном поле регистрируется, но вот получить дополнительную информацию в виде его прозрачности и преломления при помощи микроскопирования с применением темнопольного микроскопа просто невозможно.
Заключение
Темное поле позволяет обнаружить скрытые
всветлом поле очертания, грани, контуры, градиенты показателя преломления.
Темнопольная микроскопия продолжает играть очень важную роль в микробиологических исследованиях в области биологии, медицины, фармацевтики. Данный метод эффективно применяется для микрофотографии с большими увеличениями живых бактерий, а также для визуального наблюдения клеток, тканей и целых организмов (тотальных препаратов) при небольших увеличениях. Морские биологи используют темнопольное освещение для исследования на небольших кратностях и записи данных об организмах
вчистой и соленой воде, например, таких как морские водоросли и планктон.
