Файловый архив студентов. Файловый архив студентов.
1301 вуз, 5089 предмет.
/ Регистрация
FAQ Обратная связь Вопросы и предложения
Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Пермский государственный медицинский университет им. ак. Е.А. Вагнера
Предмет:
Микробиология и иммунология
Файл:

Литусов Н.В. Общая микробиология

.pdf
Скачиваний:
1406
Добавлен:
20.11.2021
Размер:
19.74 Mб
Скачать
☆

501

Посев из пробирки в пробирку.

Тема 5: Антибиотики. Методы определения чувствительности бактерий

к антибиотикам.

Цели занятия: Изучить со студентами классификацию антибактериальных препаратов, механизмы действия антибиотиков на бактерии, методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

Задачи занятия:

1.Изучение классификации антибактериальных препаратов.

2.Изучение механизмов действия антибактериальных препаратов на микробную клетку.

3.Изучение методов определения чувствительности бактерий к антибиотикам.

После изучения темы студент должен:

знать:

- классификацию антибиотиков; - механизмы действия антибиотиков на бактерии;

уметь:

- определять чувствительность бактерий к антибиотикам методом дисков;

владеть:

- микробиологическим понятийным аппаратом.

Справочные материалы

Химиотерапевтические препараты: По спектру активности:

- действующие на клеточные формы микроорганизмов (антибактериальные, противогрибковые, противопротозойные). Антибактериальные препараты кроме того подразделяются на препараты широкого спектра действия (действуют на грамположительные и грамотрицательные бактерии) и препараты узкого спектра

502

действия (действуют только на грамположительные или только на грамотрицательные бактерии);

-действующие на неклеточные формы (противовирусные препараты).

По направленности действия (по объекту):

1. Противобактериальные препараты:

-бета-лактамные антибиотики (пенициллины, цефалоспорины);

-стрептомицины;

-макролиды (эритромицин, олеандомицин);

-аминогликозиды (канамицин, мономицин, неомицин, тобрамицин, сизомицин, гентамицин);

-тетрациклины;

-гликопептиды (ванкомицин, линкомицин);

-хлорамфеникол (левомицетин);

-противотуберкулезные препараты (ПАСК);

-фосфомицины;

-фторхинолоны.

2.Противовирусные препараты (амантадин, ремантадин).

3.Противогрибковые препараты.

По типу действия:

-микробоцидные (бактерицидные, фунгицидные), то есть губительно действующие на микроорганизмы;

-микробостатические (бактериостатические), то есть ингибирующие рост и размножение микроорганизмов.

Сульфаниламидные препараты (сульфаниламиды) - это химиотерапевтические препараты, являющиеся производными сульфаниловой кислоты. К ним относятся норсульфазол, сульфадимезин, сульфадиметоксин, фталазол и другие препараты.

Антибиотики - это препараты биологического (микробного, растительного, животного), полусинтетического или синтетического происхождения, которые в малых концентрациях вызывают торможение размножения или гибель чувствительных к ним микробов во внутренней среде организма. Основными источниками получения антибиотиков являются актиномицеты, плесневые грибы и некоторые бактерии.

Классы антибиотиков по химической структуре:

-бета-лактамы;

-гликопептиды;

-аминогликозиды;

-тетрациклины;

-макролиды;

-линкозамиды;

-левомицетин;

-рифамицины;

-полипептиды;

-полиены;

-разные антибиотики.

Механизмы действия сульфаниламидов и антибиотиков:

503

-ингибирование синтеза веществ, входящих в состав клеточной стенки (пенициллины, цефалоспорины, циклосерин, бацитрацин);

-ингибирование функций цитоплазматической мембраны - нарушение проницаемости клеточной мембраны (полимиксины, нистатин, колистин, амфотерицин В);

-ингибирование синтеза белка (тетрациклины, аминогликозиды, эритромицин, линкомицин, хлорамфеникол);

-ингибирование синтеза нуклеиновых кислот (налидиксовая кислота, рифампицин, фторхинолоны).

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

1.Метод серийных разведений в жидких средах. В жидкие среды с

серийными разведениями антибиотиков вносят исследуемую культуру, инкубируют посевы при 37ОС, и учитывают результаты визуально или нефелометрически. Этот метод позволяет установить минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) препарата для возбудителя. МИК соответствует наибольшему разведению препарата, тормозящему рост тест-культуры.

2.Метод серийных разведений в плотных средах. Метод аналогичен предыдущей процедуре, но проводится на плотных питательных средах. При использовании этого метода готовят двойные серийные разведения антибиотика в расплавленном агаре, который затем вносят в чашки Петри и засевают исследуемой культурой. После инкубирования посевов определяют МИК по отсутствию роста на чашках, содержащих наименьшие концентрации препарата.

3.Диффузионные методы. Эти методы менее чувствительны, чем методы стандартных разведений, но проще по выполнению. На практике их применяют чаще.

3.1.Классический метод. На питательную среду в чашке Петри наносят исследуемую культуру и равномерно ее распределяют ее по поверхности среды. В агаре пробивают лунки и в каждую вносят по 0,1 мл раствора исследуемого антибиотика, после чего инкубируют при 37°С. После инкубирования в оптимальных условиях измеряют диаметр зоны подавления роста для каждого препарата.

3.2.Метод дисков (стандартный тест, чашечный или кольцевой метод, диско-диффузионный метод). После посева культуры на агар наносят диски из фильтровальной бумаги, пропитанные антибиотиками разной концентрации

(используют коммерческие образцы, содержащие определенные концентрации). После инкубации при 37ОС определяют диаметры зон торможения роста микроорганизмов и сравнивают с величинами зон задержки роста, указанными в инструкциях, прилагаемых к дискам. Вокруг дисков в зависимости от активности и концентрации антибиотика образуются разной величины зоны задержки роста микроба. Зоны точно измеряют с помощью циркуля и линейки.

Самостоятельная работа:

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных индикаторных дисков. В подсушенную чашку с МПА вносят 2-3 мл культуры исследуемого микроба (концентрация - 1 млрд., разведенная 1:1000). Культуру распределяют по всей поверхности среды путем покачивания чашки.

Избыток культуры удаляют пипеткой. На поверхность среды размещают

504

стандартные индикаторные диски, пропитанные антибиотиками. Расстояние дисков от края чашки должно быть не менее 1,5 см. Расстояние между дисками также должно быть не менее 1,5 см. На чашку помещают 5-6 дисков. Чашки инкубируют в термостате при 36ОС в течение 18-24 часов.

Учет результатов проводится путем измерения диаметров зон ингибирования роста бактерий.

Иллюстративный материал

Диски с антибиотиками.

Результат определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.

505

Измерение зон ингибирования роста бактерий.

Тема 6: Микрофлора почвы, воды, воздуха.

Цель занятия: Изучить со студентами микрофлору почвы, воды, воздуха.

Задачи занятия:

1.Изучение микрофлоры почвы и методов определения микробного загрязнения почвы.

2.Изучение микрофлоры воды и методов определения микробного загрязнения воды.

3.Изучение микрофлоры воздуха и методов определения микробного загрязнения воздуха.

4.Обучить студентов методике определения микробного загрязнения воздуха седиментационным методом.

После изучения темы студент должен:

знать:

- микрофлору воды, почвы, воздуха; - методы определения загрязненности микроорганизмами почвы, воды и

воздуха;

уметь:

- определять микробную загрязненность воздуха седиментационным методом;

владеть:

- микробиологическим понятийным аппаратом.

Справочные материалы

Микрофлора почвы

Находящиеся в почве микроорганизмы подразделяются на две группы:

- аутохтонные микроорганизмы (резидентные микроорганизмы,

резидентная микрофлора), то есть микробы, которые присутствуют только

вконкретном типе почвы;

-аллохтонные микроорганизмы (транзиторная микрофлора), то есть те микроорганизмы, которые в обычных условиях в почве не встречаются.

506

В плодородной почве общая биомасса бактерий достигает 500 кг/га и более. Наибольшее значение для почв имеют азотфиксирующие бактерии

(Azotobacter, Nitrobacter, Mycobacterium и другие). К типичным почвенным бактериям относятся актиномицеты и спорообразующие палочки родов Bacillus и Clostridium.

Наиболее многочисленны микроорганизмы в верхнем 5-15-сантиметровом слое, меньше их на глубине 20-30 см и минимальное количество на глубине 30-40 см. Однако бактерии найдены в почве даже на глубине 5 м.

Почва населенных мест загрязняется твердыми и жидкими отбросами, выделениями людей и животных, остатками растений, хозяйственно-бытовыми и промышленными сточными водами. Особенно опасны сточные воды боен, мясокомбинатов, предприятий по переработке кожи, шерсти, которые могут содержать патогенные бактерии. В связи с этим почва может служить фактором передачи возбудителей инфекционных заболеваний. Наиболее длительно живут спорообразующие микробы – возбудители столбняка, ботулизма, сибирской язвы.

Микробиологическое исследование почвы проводят для ее санитарной оценки, характеристики процессов самоочищения, оценки методов обезвреживания отбросов, при определении пригодности участков для строительства, а также при эпидемиологических и эпизоотологических обследованиях с целью выяснения путей заражения почвы, продолжительности выживания в ней патогенных микробов и т. д.

Отбор проб почвы производят с квадратного участка (не менее 5x5 м) из 5 точек - из каждого угла и центра квадрата (“метод конверта”). Образцы забирают в условиях асептики с глубины 20-30 см. Объем образцов 1 кг.

Наличие в почве бактерий группы кишечной палочки свидетельствует о ее свежем фекальном загрязнении. Обнаружение Cl. perfringens в почве указывает на ее давнее фекальное загрязнение.

Микрофлора воды Микрофлору водоемов образуют две группы:

-аутохтонная микрофлора – совокупность микроорганизмов, постоянно живущих и размножающихся в воде;

-аллохтонная микрофлора – совокупность микроорганизмов, случайно попавших в воду и сохраняющихся в ней сравнительно короткое время.

Всоответствии с действующими нормативными документами обязательному микробиологическому контролю подлежит вода питьевая (центрального и местного водоснабжения).

Отбор проб. Для отбора проб питьевой воды используют стерильные флаконы ёмкостью 500 мл. Предварительно проводят обжигание водопроводных кранов пламенем и пропускают воду в течение 10-15 минут при полностью открытом кране.

Показатели загрязнения:

- E. coli – свежее фекальное загрязнение;

- Citrobacter, Enterobacter – давнее фекальное загрязнение;

- Cl. perfringens (sporogenes) – как свежее, так и давнее фекальное загрязнение;

- термофильные бактерии – загрязнение разлагающимися отбросами; - протей – гнилостный распад.

507

Микрофлора воздуха

Воздух – неблагоприятная среда для размножения микроорганизмов (отсутствие питательных веществ, солнечные лучи, высушивание). Состав микрофлоры воздуха – это пигментные сапрофитные бактерии (микрококки, сарцины), актиномицеты, плесневые, дрожжевые грибы и др.

Наибольшее количество микроорганизмов содержит воздух крупных промышленных городов. Воздух же полей, лесов, лугов, а также над водными пространствами, в удалении от населенных пунктов отличается сравнительной чистотой. Значительные изменения претерпевает микрофлора воздуха в зависимости от времени года. Максимальное количество микробов обнаруживают в летнее время, а минимальное – в зимнее время.

Микробиологическое исследование воздуха проводится с помощью седиментационного или фильтрационного методов.

Седиментационный метод Коха - спонтанное оседание бактериальных частиц и капель под действием силы тяжести на поверхность питательной среды открытой чашки Петри. При этом читается, что в соответствии с формулой В.Л. Омелянского на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри площадью 100 см2 за 5 минут оседает такое количество бактерий, которое содержится в 10 л воздуха.

Для определения чистоты воздуха при седиментационном методе чашки выдерживают открытыми в течение 60 минут, а затем инкубируют при 37ОС. Результаты оценивают следующим образом:

-менее 250 колоний – чистый воздух;

-250-500 колоний – средняя степень загрязненности;

-более 500 колоний – загрязненный воздух.

При фильтрационных методах отбор проб воздуха осуществляется с помощью различных приборов и аппаратов. В частности при использовании аппарата Кротова отбор проб воздуха (по 100 л ) производится над двумя чашками Петри с мясо-пептонным агаром. Посевы культивируют 48 часов при 37оС. После инкубирования подсчитывают число колоний на питательной среде и вычисляют количество бактерий в исследуемом воздухе.

Подсчет микробного числа для определения чистоты воздуха при использовании аспирационного метода (прибора Кротова) проводится по формуле:

Х = 1000а / V, где а – количество колоний на чашке; V – объем прокаченного воздуха.

Самостоятельная работа.

Студенты определяют микробную загрязненность воздуха седиментационным методом Коха. Для этого открытую чашку с МПА на 5 минут оставляют в помещении на уровне рабочего стола, после чего убирают в термостат при 37ОС на 24 часа. Расчет микробного числа проводится по эмпирической формуле Омелянского: на поверхности среды в чашке Петри площадью 100 см2 в течение 5 минут оседает такое же количество бактерий, которое содержится в 10 л воздуха.

Иллюстративный материал

508

Прибор вакуумного фильтрования.

Аппарат Кротова.

Пробоотборник бактериологический Тайфун Р-40.

Прибор ПУ-1Б.

509

Пробоотборники.

Пробоотборник MAS-100.

Тема 7: Нормальная микрофлора тела человека.

Цель занятия: Изучить со студентами нормальную микрофлору тела человека и ее значение для организма.

Задачи занятия:

1.Изучение нормальной микрофлоры различных областей тела человека.

2.Изучение физиологического значения нормальной микрофлоры тела

человека.

3.Изучение роли дисбиотических состояний в развитии заболеваний.

После изучения темы студент должен:

знать:

-нормальную микрофлору тела человека;

-роль нормальной микрофлоры в жизнедеятельности организма;

уметь:

-готовить препараты зубного налета для микроскопического исследования;

владеть:

- микробиологическим понятийным аппаратом.

Справочные материалы

510

Ворганизме человека обитают примерно 500 видов микроорганизмов, составляющих его нормальную микрофлору. Макроорганизм и его микрофлора в нормальных условиях находятся в состоянии динамического равновесия (эубиоза), которое сложилось в процессе эволюции.

Открытыми биологическими системами (биотопами), которые сообщаются

свнешней средой, являются кожа, респираторный тракт, желудочно-кишечный тракт, наружные половые органы. Они заселяются микроорганизмами, среди которых доминируют бактерии. Простейшие и вирусы представлены значительно меньшим числом видов.

Внорме от микроорганизмов свободны кровь, ликвор, синовиальная жидкость, костный мозг, брюшная полость, плевральная полость, матка.

Естественную микрофлору любых биотопов подразделяют на резидентную (или постоянную) и транзиторную (или случайную). Если постоянная микрофлора содержит представителей, специфичных для данного биотопа, то случайная состоит из особей, занесенных извне. Так, в желудочно-кишечном тракте могут оказаться посторонние микроорганизмы, попавшие с пищей. Кожные покровы наиболее часто контаминируются случайной микрофлорой из окружающей среды. В трахее, бронхах, легких, пищеводе также может обнаруживаться транзиторная микрофлора.

Постоянная микрофлора конкретного биотопа относительно стабильна по составу. Вместе с тем состав и физиологическая роль составляющих ее микроорганизмов далеко не равнозначны. Поэтому в постоянной микрофлоре различают две фракции: облигатную и факультативную.

Облигатная микрофлора является главной составляющей любого микробиоценоза, она противодействует заселению биотопа случайными микроорганизмами, участвует в процессах ферментации, иммуностимуляции, то есть выполняет защитную функцию.

Факультативная микрофлора составляет меньшую часть постоянных обитателей биотопа. Если постоянная микрофлора проявляет себя преимущественно бродильной активностью (то есть расщеплением углеводов с образованием кислых продуктов), то факультативная фракция весьма активно участвует в гнилостных процессах (распаде белковых веществ с образованием щелочных продуктов).

Микрофлора кожи

Кожный покров является наиболее обширной областью человеческого тела, доступной для постоянных контактов с микроорганизмами окружающей среды.

Всостав резидентной микрофлоры кожи входят, в основном, грамположительные сапрофитные бактерии - непатогенные коринебактерии, стафилококки, микрококки.

К транзиторной микрофлоре относятся грамположительные сарцины, золотистый стафилококк, грибы рода Candida, плесневые грибы. По типу дыхания микроорганизмы, заселяющие кожу, относятся к факультативным анаэробам.

Основные зоны колонизации – поверхность ороговевших клеток эпидермиса, устья волосяных фолликулов, протоки сальных желез. На 1 см2 кожи может находиться от 10 тыс. до 1 млн. бактериальных клеток. Бактерии расщепляют секреты сальных желез до ненасыщенных жирных кислот, при этом происходит сдвиг рН в кислую

сторону. Кислая реакция среды и продукты метаболизма представителей

Соседние файлы в предмете Микробиология и иммунология
Помощь Обратная связь Вопросы и предложения Пользовательское соглашение Политика конфиденциальности