Литусов Н.В. Общая микробиология

261

бесцветные колонии, а лактозоположительные бактерии (кишечная палочка) – темно-красные колонии (рисунок 8.43).

Рисунок 8.43 – Среда Плоскирева.

Накопительные среды (обогатительные среды, среды обогащения) - это среды, на которых определенные виды культур растут быстрее и интенсивнее сопутствующей микрофлоры. Такие среды могут содержать элективный фактор для подавления роста сопутствующей микрофлоры или факторы, способствующие росту требуемых бактерий, например, солевой бульон для стафилококков, селенитовый бульон для сальмонелл (рисунок 8.44).

а б Рисунок 8.44 – Накопительные среды: а - солевой бульон, б - селенитовый бульон.

Так, солевой бульон (обогатительная среда для стафилококков) в качестве элективного фактора содержит 10% хлорида натрия, селенитовый бульон (обогатительная среда для сальмонелл) в качестве элективного фактора содержит селенит натрия, а сахарный бульон (обогатительная среда для стрептококков) содержит глюкозу в качестве ростового фактора.

Для длительного хранения микроорганизмов применяют консервирующие среды - с глицерином, мелом и др.

Характер роста бактерий на питательных средах. В жидких питательных средах при размножении бактерий наблюдают равномерное помутнение среды, поверхностный рост в виде пленок, пристеночный, придонный рост в виде осадка. На плотных питательных средах отмечается сплошной рост культуры (в виде газона) или образование изолированных колоний (рисунок 8.45).

262

а б Рисунок 8.45 – Характер роста бактерий в жидких (а) и на плотных (б) питательных

средах.

Колонии характеризуют по форме, размеру, цвету, очертаниям края, характеру поверхности, прозрачности, структуре, консистенции (рисунок 8.46).

Форма

Профиль

Приподнятый Подушкообразный

Край

Рисунок 8.46 – Признаки колоний микроорганизмов.

Некоторые микроорганизмы имеют свои особенности размножения. Так, у грибов наблюдаются следующие типы размножения:

-вегетативное размножение (отделение от грибного мицелия частей, которые образуют новую грибницу). При этом типе размножения мицелий может фрагментироваться на артроспоры и хламидоспоры;

-бесполое размножение (созревшие конидии осыпаются, спорангии лопаются, споры из них высыпаются и прорастают в гифы);

-половое размножение (мужские и женские клетки сливаются, в результате образуется зигота с парным набором хромосом).

У дрожжей, в свою очередь, наблюдается вегетативное размножение (почкованием или делением) и половое размножение 9слияние клеток).

263

8.8. Вопросы для контроля усвоения материала

1.Охарактеризуйте химический состав микробных клеток.

2.Что такое эндо- и экзоферменты бактерий?

3.Расскажите о методах изучения ферментативной активности бактерий.

4.Охарактеризуйте механизмы транспорта веществ внутрь микробной

клетки.

5.Что такое дыхание бактерий?

6.Расскажите о процессах брожения.

7.Что такое энергетический метаболизм бактерий?

8. Что такое конструктивный метаболизм бактерий?

9. Расскажите о системах секреции веществ из микробных клеток. 10. Какие способы размножения бактерий Вы знаете?

11. Как классифицируются питательные среды?

12. Что такое элективные и дифференциально-диагностические среды?

8.9. Тренировочные тесты

1.Для определения сахаролитических свойств используют среду: - Клауберга - Кита-Тароцци + Гисса - Эндо

- Плоскирева

2.Фосфор необходим бактериям для синтеза:

- белка + нуклеиновых кислот

-полисахаридов

-углеводов

-липидов

3. Для выявления гемолизина используют среду:

-Эндо

-Плоскирева

+ кровяной агар

-МПЖ

-желточно-солевой агар

4. По типу питания выделяют следующие группы бактерий:

-психрофилы + гетеротрофы

-мезофиллы

-эукариоты

+ аутотрофы

264

5. По оптимальным температурным условиям роста различают:

+психрофилы - автотрофы

+мезофилы

- гетеротрофы + термофилы

6. Оптимальная температура для выращивания психрофильных бактерий: + менее 20ОС

-20-45ОС

-45-55ОС

-55-60ОС

-выше 60ОС

7. Оптимальная температура для выращивания мезофильных бактерий:

-менее 20ОС

+ 20-45ОС

-45-55ОС

-55-60ОС

-выше 60ОС

8. Оптимальная температура для выращивания термофильных бактерий:

-5-10ОС

-10-20ОС

-20-30ОС

-20-45ОС

+ выше 45ОС

9. Бактерии подразделяются на аутотрофы и гетеротрофы по источнику усвоения:

-водорода

-кислорода + углерода

-азота

-фосфора

10. Основными продуктами маслянокислого брожения являются: - этиловый спирт + масляная и уксусная кислоты

-молочная кислота

-молочная кислота и этиловый спирт

-метиловый спирт

11. Основными продуктами спиртового брожения являются: + этиловый спирт и углекислый газ

-масляная и уксусная кислоты

-молочная кислота

265

-молочная кислота и этиловый спирт

-метиловый спирт

12. Основными продуктами молочнокислого брожения являются:

-пропиловый спирт

-масляная и уксусная кислоты

-муравьиная кислота

+ молочная кислота, уксусная кислота и этиловый спирт - метиловый спирт

13. У бактерий выделяют следующие типы переноса веществ внутрь клетки:

+активный транспорт - фагоцитоз

+транслокация радикалов

+простая диффузия

+облегченная диффузия

14. Пермеазы - это:

-адгезины

-ферменты агрессии + транспортные белки

-группа антибиотиков

-экзоферменты

15. Перенос веществ внутрь клетки без затраты энергии происходит при:

-активном транспорте

-транслокации радикалов + облегченной диффузии + пассивной диффузии

-экзоцитозе

16. Перенос веществ внутрь клетки с затратой энергии происходит при

+активном транспорте - пассивной диффузии - облегченной диффузии

+транслокации групп

- экзоцитозе

17.В факторах роста нуждаются: - аутотрофы - гетеротрофы + ауксотрофы - прототрофы - фототрофы

18.К факторам роста относятся:

266

+витамины

+пурины

+пиримидины

+аминокислоты - антибиотики

19.В какой фазе отсутствует прирост микробной популяции: - лаг-фаза - фаза экспоненциального роста

+ стационарная фаза + фаза ускоренного отмирания - лог-фаза

20.В какой фазе наблюдается максимальный прирост микробной популяции: - лаг-фаза + фаза экспоненциального роста

- стационарная фаза - фаза ускоренного отмирания + лог-фаза

21.Не растут в присутствии кислорода:

-облигатные аэробы

-факультативные анаэробы + облигатные анаэробы

-микроаэрофилы

-аэротолерантные бактерии

22.Растут в присутствии кислорода: + облигатные аэробы + факультативные анаэробы - облигатные анаэробы + микроаэрофилы + капнофилы

23.Сахаролитические свойства бактерий оценивают: - на мясо-пептонном агаре - в мясо-пептонном бульоне - в столбике желатина + на средах Гисса - в среде 199

24.О сахаролитической активности бактерий судят по образованию в среде: + кислоты - воды

+ кислоты и газа - сероводорода

267

- индола

25. “Пестрый ряд” используют для определения:

-морфологических свойств

-тинкториальных свойств + сахаролитических свойств

-протеолитических свойств

-липолитических свойств

Примечание: знаком + отмечены правильные ответы.

268

9. Бактериологическое исследование

Целью бактериологического исследования является выделение чистой культуры возбудителя и его идентификация путем изучения морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических свойств. При необходимости проводят фаготипирование и серотипирование возбудителя, определение чувствительности микроба к антибактериальным препаратам и вирулентности.

Бактериологический метод исследования включает 4 этапа:

I этап - посев исследуемого материала на питательные среды для получения изолированных колоний;

II этап – посев микробных клеток из отдельных колоний для накопления чистой культуры возбудителя;

III этап – проверка чистоты выделенной культуры и изучение биохимических свойств (в первую очередь - сахаролитических и протеолитических свойств) для идентификации возбудителя (определения вида бактерий);

IV этап - учет результатов и выдача заключения.

9.1. Отбор, хранение и транспортировка материала

Взятие материала для проведения бактериологического исследования, его хранение и транспортировку осуществляют с соблюдением определенных правил.

Материал для бактериологического исследования отбирается из мест локализации патологического процесса. Исследуемым материалом может служить кровь, моча, гной, мокрота, фекалии, желчь, отделяемое раны, рвотные массы, смывы с кожи и слизистых оболочек и др. Материал для исследования отбирается с соблюдением правил асептики. Для взятия крови используют вакуумные пробирки (вакуумные системы), для мочи и кала – специальные стерильные контейнеры (рисунок 9.1).

а б в Рисунок 9.1 – Вакуумные системы для забора крови (а), контейнеры для мочи и кала

(б), система для сбора и транспортировки образцов мочи на бакпосев с тампономгубкой (в).

Для отбора биологического материала часто используют тампоны (свабы). Для этих целей выпускаются тампоны в комплекте с транспортной средой – так называемые транспортные системы (рисунок 9.2).

269

Рисунок 9.2 – Стерильные транспортные системы.

При исследовании крови на наличие бактерий (получение гемокультуры) материал отбирают непосредственно во флаконы, содержащие одновременно плотную и жидкую питательные среды, так называемые двухфазные системы (рисунок 9.3).

Рисунок 9.3 – Флакон с двухфазной системой.

Биологический материал для бактериологического исследования отбирается до начала антибиотикотерапии или через определенный промежуток времени, достаточный до выведения антибиотика из организма.

При отборе материала исключают попадание в него антибиотиков, антисептиков, дезинфектантов.

Транспортировку биологического материала в лабораторию проводят в максимально короткие сроки при соблюдении температурного режима. При невозможности быстрой доставки пробы в лабораторию материал погружают в транспортные среды и хранят в холодильнике при температуре плюс 4ОС. Транспортировку биологического материала в лабораторию осуществляют в специальных пеналах или термоконтейнерах (рисунок 9.3).

270

Рисунок 9.3 – Медицинский термоконтейнер.

Материал, содержащий анаэробные бактерии, транспортируют в условиях, исключающих воздействие кислорода. Для взятия такого материала используют специальные флаконы, заполненные бескислородной газовой смесью и специальной транспортной средой (рисунок 9.5).

Рисунок 9.5 – Флаконы для культивирования анаэробов.

Материал для бактериологического исследования направляют в лабораторию с сопроводительным документом, в котором указывают фамилию, имя, отчество больного, возраст, вид материала, дата взятия, предполагаемый клинический диагноз и другие сведения.

В микробиологической лаборатории поступивший на исследование материал регистрируют в журнале, сохраняют до конца исследования, а по завершению исследования остатки материала уничтожают путем автоклавирования.

9.2. Посев материала на питательные среды и выделение чистой культуры аэробных бактерий

Поступивший в лабораторию материал подвергают бактериологическому исследованию в тот же день. На первом этапе из исследуемого материала готовят