Насколько высока биохимическая активность сальмонелл? Какие продукты образуются при ферментации углеводов и белков возбудителями? с помощью каких сред можно проследить образование н2s?
Сальмонеллы ферментируют глюкозу до кислоты и газа (S. typhi при разложении углеводов не образует газа), не разлагают лактозу и сахарозу, продуцируют сероводород при ферментации белков, не разжижают желатин, не образуют индол.
Ферментацию углеводов и образование сероводорода можно выявить на среде Клиглера (двухсахарном агаре, содержащем глюкозу и лактозу) или среде Олькеницкого (трехсахарном агаре, содержащем глюкозу, лактозу и сахарозу).
Готовая среда Клиглера имеет оранжево-красный цвет. Разложение глюкозы и образование сероводорода сопровождается почернением столбика агара с сохранением красного цвета “язычка” среды;
готовая среда Олькеницкого также имеет красный цвет. Ферментация глюкозы проявляется изменением цвета столбика среды на желтый с сохранением красного цвета “язычка” среды. Наличие черного преципитата на границе столбика и скошенной части указывает на то, что сальмонеллы продуцируют сероводород
Что служит основой деления сальмонелл на группы и внутригруппового типирования? Какие реакции используют для изучения антигенной структуры этих бактерий?
Основой деления сальмонелл на группы и внутригруппового типирования являются антигенные свойства сальмонелл.
По строению О-антигена все сальмонеллы распределяются на серологические группы, которые обозначаются прописными буквами латинского алфавита (A, B, C, D и т. д.).
По строению Н-антигена сальмонеллы распределены на 2 фазы: 1 – специфическая, 2 – неспецифическая. Н-антигены первой фазы характерны для определенного вида сальмонелл, а антигены второй фазы встречаются у представителей разных видов. Это связано с тем, что синтез Н-антигена кодируется двумя независимыми генами. Функционирование одного гена исключает работу другого. Поэтому в каждой клетке может быть синтезирован только одна фаза Н-антигена. Первая фаза обоз- начается строчными латинскими буквами, вторая фаза - цифрами.
Для сероидентификации используют РА на стекле, РИФ.
Какие экспресс-методы лабораторной диагностики применяют при сальмонеллезах?
РИФ, ПЦР, РЛА, ИФА.
В каких случаях целесообразно использование серологических методов исследования и каким реакциям отдается предпочтение?
При тяжёлых формах заболевания. РНГА (которая считается положительной в титрах 1:160 и выше при однократном исследовании или при нарастании титров антител в 4 раза и более в динамике заболевания), ИФА.
Одним из основополагающих признаков при идентификации сальмонелл считается их антигенная структура. Для их сероидентификации используют реакцию агглютинации на стекле. Опишите последовательность действий бактериолога при расшифровке антигенной структуры и какие препараты (диагностические сыворотки) используют на каждом этапе исследования с учетом антигенных характеристик, представленных в схеме Ф. Кауфмана и П. Уайта:
Ответ. На предметное стекло наносится одна капля сыворотки и одна капля изотонического раствора хлорида натрия. С питательного агара берется полная петля культуры, выращенной в течение 18-24 часов при 37°С. Культура наносится на предметное стекло вблизи капли изотонического раствора хлорида натрия и эмульгируется (контроль на отсутствие спонтанной агглютинации). При отсутствии спонтанной агглютинации манипуляцию повторяют в капле сыворотки, формируя равномерную непрозрачную суспензию. Учет результатов проводят в течение 1-2 минут, мягко покачивая стекло. Гомогенная суспензия свидетельствует об отрицательном результате. Образование хлопьев агглютината внутри капли расценивается как положительный результат.
Агглютинация проявляется через несколько секунд (или 1 минуты) в виде хлопьев (зерен) агглютината формирующихся внутри капли на фоне ее просветления. Штаммы, находящиеся в R-форме, обладают самопроизвольной агглютинацией. Их дальнейшее серотипирование не представляется возможным без дополнительных манипуляций. Такие штаммы пересевают на слабощелочной агар для того, чтобы выбрать колонию с ровными краями и вернуть штамм в S (гладкую) форму и повторить агглютинацию. Если агглютинация с поливалентными антисыворотками не происходит, маловероятно, что штамм относится к роду Salmonella.
Препараты:
1. С адсорбированной поливалентной сывороткой (групповая)
2. С адсорбирвоанной О-сывороткой (для серогруппы)
3. С адсорбирвоанной Н-сывороткой (для серовара)
В диагностике сальмонеллезов, особенно при тяжелых формах заболевания, используют серологический метод. Для определения титра антител в сыворотке крови больных проводят РНГА и ИФА. Что из себя представляют поливалентные эритроцитарные диагностикумы для РНГА в этих случаях, антигены представителей каких серогрупп они содержат? Попытайтесь схематично изобразить такие диагностикумы, отметив на рисунке их составные части.
Рисунок 1. Схематичное изображение эритроцитарного диагностикума
Ответ. Поливалентные эритроцитарные диагностикумы для РНГА представляют собой эритроциты с адморбированными на них антигенами серогрупп A, b, c, d, e.