Презентации 2020 / 01-20-GP-DNA-tech
.pdf
Технологии рекомбинантных ДНК
Основные типы клонирующих векторов
II. Вирусные векторы: - бактериофаг лямбда и космиды
Космида – плазмида с cos-сайтами фага, способная паковаться в капсид Включает cos-участок (~200 bp) для упаковки + плазмида, размер 32-47 т.п.н.
(пакуется 78-105 % от генома фага => пакуются только рекомбинантые ДНК)
Геномика и протеомика
Технологии рекомбинантных ДНК
Основные типы клонирующих векторов
III. Искусственные хромосомы: бактериальные BAC, дрожжевые YAC, млекопитающих MAC, человека HAC
Схема YAC
Геномика и протеомика
Технологии рекомбинантных ДНК
Схема
экспрессионного
вектора
Пример:
экспрессионная
бактериальная
плазмида
Геномика и протеомика
Технологии рекомбинантных ДНК
Доставка рекомбинантной ДНК и РНК в клетку
Известно около 40 различных способов доставки
-Трансформация
-Коньюгация.
-С помощью вирусов
-Трансфекция: Са-фосфатный метод, полимерные катионы, катионные липиды и др.
-Липосомы
-Перфорационные методы: электропорация, микроинъекция, бомбардировка микрочастицами и др.
-Лиганд-опосредованная доставка
Геномика и протеомика
Технологии рекомбинантных ДНК
Доставка рекомбинантной ДНК и РНК в клетку
Трансфекция:
полимерные
катионы
ДНК
Катионные
липиды
Геномика и протеомика
Общие принципы конструирования новых организмов
Доставка рекомбинантной ДНК и РНК в клетку
Трансфекция:
Лигандопосредованная доставка
на примере комплекса с полимерными катионами
Геномика и протеомика
Доставка рекомбинантной ДНК и РНК в клетку
Бомбардировка микрочастицами (золото, вольфрам и т.п.) покрытыми ДНК, из «генного пистолета» («gene gun», Bio-Rad)
Геномика и протеомика