Ход работы:
На компьютере запустить управляющую программу МИЛИХРОМ. Включить хроматограф. После включения проходит процесс самотестирования – автоматическая проверка работоспособности всех блоков. Ход тестирования отображается в специальном статусном окне. После полного прохождения теста в статусной строке основного окна появляется надпись ГОТОВ;
Убедиться, что резервуары для элюентов наполнены 100%ным ацетонитрилом. Погрузить капилляры насосов А и В в резервуары с элюентами. После опускания фильтра в сосуд аккуратно встряхнуть фильтр и сосуд для удаления воздушных пузырьков с поверхности фильтра;
Открыть меню Управление →Ручные операции…
Установить температуру анализа : 35°С;
Провести процедуру смены растворителей для обоих насосов;
Провести процедуру промывки иглы. Емкости с моющими растворами (обычно метанол и/или дистиллированная вода) устанавливаются в специальные гнезда на автодозаторе.
Провести процедуру промывки инжекционного порта. Необходимо задать: объем элюента – 100 мкл; концентрацию элюента (ацетонитрил) – 50%; скорость потока подвижной фазы 200 мкл/мин;
Провести регенерацию колонки. Данная процедура необходима для удаления пузырьков воздуха из колонки, которые могут возникнуть в гидравлической системе и колонке, пребывавшей без давления. В диалоговом окне задать параметры регенерации:
Объем элюента – 500 мкл
Концентрация элюента (ацетонитрила) – 50%
Скорость потока – 200 мкл/мин
Постоянная времени – 0,34 с
Длина волны 1 – 210 нм
Длина волны 2 – 360 нм
Хроматограф готов к работе.
Проверить правильность установок параметров анализа в меню Параметры/Конфигурация анализа:
Промывка иглы – вкл.; Промывка инжектора - вкл.; Объем буфера 5 мкл – откл. Фиксированная скорость потока – вкл. Мин. давление 0.0 МПа, Макс. давление – 7.0 МПа; Метод однолучевой; Режим нормальный; Кювета верхняя.
Провести хроматографирование смеси трех стандартных веществ (ПАУ), выданной преподавателем. Запуск хроматограммы производить в меню Управление/Анализ; на экране появится диалоговое окно хроматографического метода:
В поле Автодозатор указать номер расположения пробирки с пробой в каретке и набираемый объем: №1 и 2 мкл.
В таблице Детектора: постоянная времени – 0,18 с; длина волны 250 нм.
В таблице Градиента: поток – 150 мкл/мин; регенерация – 0 мкл 50%, шаг 0 – 0 мкл 50% Б; шаг 1 – 550 мкл 50% Б.
В поле Описание/образец указать оператора, описать пробу (н-р, смесь стандартов ПАУ).
Сохранить настройки анализа, выбрав Сохранить как, и задать номер подгруппы студентов (на латинице).
В пробирку налить 30 мкл анализируемой смеси, закрыть пробкой, установить в соответствующую позицию автосамплера.
запустить анализ - СТАРТ.
После окончания анализа данные автоматически запишутся в файлы с расширением *. chr в директории M-CHROM\DATA\имя анализа.
11. Через меню Обработка/Обработать данные или через иконку запустить обрабатывающую программу «МультиХром».
Убедиться, что размечено только три пика веществ-стандартов; убрать (если имеются) "грязевые" пики, открыв диалоговое окно через меню Обработка/переразметить, и подобрав минимальную высоту пика (н-р 0.02 AU).
Открыть диалоговое окно Опции отчета через меню Обработка/Выдать отчет.
В поле Метод расчета выбрать позицию Custom (Заказной).
Щелкнуть по кнопке << Столбцы.
В левой части окна выбрать столбцы, которые будут включены в таблицу пиков: номер пика, время выхода, высота, площадь.
Затем из поля Разделы отчета убрать избыточную информацию - колонка, элюент (убрать галочки).
Просмотреть общий вид отчета (кнопка Просмотр).
Напечатать отчет, щелкнув по кнопке Отчет.