Общая микробиология

541

происхождения. К ним относятся пептоны, кровь, отвары и экстракты, полученные из природных субстратов (мясо, рыба, крупы).

Полусинтетические среды кроме органических и неорганических веществ известного состава содержат продукты природного происхождения (картофельная среда с глюкозой, дрожжевая среда).

Синтетические питательные среды состоят из определенных количеств органических и неорганических химических соединений известного состава.

По набору питательных веществ выделяют:

-минимальные среды, которые содержат лишь источники питания, достаточные для роста;

-богатые среды, в состав которых входят многие дополнительные

вещества.

В зависимости от назначения питательных сред различают:

-основные среды;

-элективные (селективные) среды;

-дифференциально-диагностические среды;

-накопительные среды (среды обогащения).

К основным средам относятся мясо-пептонный агар и мясо-пептонный бульон. На этих средах растет большинство бактерий.

Дифференциально-диагностические среды - это сложные среды,

позволяющие изучать биохимические свойства бактерий. Эти среды используются для определения вида бактерий.

Элективные (селективные) питательные среды содержат вещества,

подавляющие рост одних бактерий, и не влияющие на рост других бактерий. Эти среды служат для выделения определенного вида бактерий из смешанных популяций.

Накопительные питательные среды (среды обогащения) - это среды, на которых определенные виды культур растут быстрее и интенсивнее сопутствующих.

Посев микроорганизмов на питательные среды. Техника посева зависит от характера исследуемого материала и консистенции питательной среды.

Жидкий материал для посева берут бактериологической петлей или стерильной пипеткой. Все манипуляции проводят вблизи пламени спиртовки. Бактериологическую петлю перед взятием материала и по окончании посева стерилизуют прокаливанием в пламени спиртовки. Пипетки после посева погружают в емкость с дезраствором.

При посеве в жидкую питательную среду петлю с материалом погружают в среду и легким покачиванием смывают материал. При использовании пипетки материал сливают в среду.

При посеве на скошенный питательный агар в пробирке петлю с материалом вносят вблизи пламени спиртовки в пробирку и материал штрихом распределяют по поверхности агара.

Посев материала на агар в чашке Петри проводят с помощью бактериологической петли, шпателя или тампона. Посев бактериологической петлей проводят штрихом по поверхности агара. С помощью шпателя или тампона исследуемый материал распределяется по поверхности среды круговыми движениями.

542

Для посева в толщу питательной среды материал вносят в стерильную чашку Петри или в пробирку, добавляют остуженный (40-45ОС) расплавленный агар и перемешивают.

Посев уколом в столбик питательной среды проводят с помощью бактериологической иглы или петли путем прокалывания столбика среды.

Самостоятельная работа.

Каждый студент проводит пересев бактерий из жидких и с агаровых культур на плотные и в жидкие питательные среды. Порядок пересевов студенты записывают в рабочую тетрадь.

Иллюстративный материал

Варианты посева штрихом.

Расположение петли при посеве штрихом.

543

Посев в чашку Петри.

Посев тампоном.

Посев по Дригальскому.

544

Посев из пробирки в пробирку.

546

По типу действия:

-микробоцидные (бактерицидные, фунгицидные), то есть губительно действующие на микроорганизмы;

-микробостатические (бактериостатические), то есть ингибирующие рост и размножение микроорганизмов.

Сульфаниламидные препараты (сульфаниламиды) - это химиотерапевтические препараты, являющиеся производными сульфаниловой кислоты. К ним относятся норсульфазол, сульфадимезин, сульфадиметоксин, фталазол и другие препараты.

Антибиотики - это препараты биологического (микробного, растительного, животного), полусинтетического или синтетического происхождения, которые в малых концентрациях вызывают торможение размножения или гибель чувствительных к ним микробов во внутренней среде организма. Основными источниками получения антибиотиков являются актиномицеты, плесневые грибы и некоторые бактерии.

Классы антибиотиков по химической структуре:

-бета-лактамы;

-гликопептиды;

-аминогликозиды;

-тетрациклины;

-макролиды;

-линкозамиды;

-левомицетин;

-рифамицины;

-полипептиды;

-полиены;

-разные антибиотики.

Механизмы действия сульфаниламидов и антибиотиков:

-ингибирование синтеза веществ, входящих в состав клеточной стенки (пенициллины, цефалоспорины, циклосерин, бацитрацин);

-ингибирование функций цитоплазматической мембраны - нарушение проницаемости клеточной мембраны (полимиксины, нистатин, колистин, амфотерицин В);

-ингибирование синтеза белка (тетрациклины, аминогликозиды, эритромицин, линкомицин, хлорамфеникол);

-ингибирование синтеза нуклеиновых кислот (налидиксовая кислота, рифампицин, фторхинолоны).

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

1.Метод серийных разведений в жидких средах. В жидкие среды с

серийными разведениями антибиотиков вносят исследуемую культуру, инкубируют посевы при 37ОС, и учитывают результаты визуально или нефелометрически. Этот метод позволяет установить минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) препарата для возбудителя. МИК соответствует наибольшему разведению препарата, тормозящему рост тест-культуры.

2.Метод серийных разведений в плотных средах. Метод аналогичен предыдущей процедуре, но проводится на плотных питательных средах. При

548

Результат определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.

Измерение зон ингибирования роста бактерий.

549

Тема 6: Микробиота почвы, воды, воздуха.

Цель занятия: Изучить со студентами микробиоту почвы, воды, воздуха.

Задачи занятия:

1.Изучение микробиоты почвы и методов определения микробного загрязнения почвы.

2.Изучение микробиоты воды и методов определения микробного загрязнения воды.

3.Изучение микробиоты воздуха и методов определения микробного загрязнения воздуха.

4.Обучить студентов методике определения микробного загрязнения воздуха седиментационным методом.

После изучения темы студент должен:

знать:

- микробиоту воды, почвы, воздуха; - методы определения загрязненности микроорганизмами почвы, воды и

воздуха;

уметь:

- определять микробную загрязненность воздуха седиментационным методом;

владеть:

- микробиологическим понятийным аппаратом.

Справочные материалы

Микробиота почвы

Находящиеся в почве микроорганизмы подразделяются на две группы:

-аутохтонные (резидентные) микроорганизмы - микробы, которые присутствуют только в конкретном типе почвы;

-аллохтонные (транзиторные) микроорганизмы - микроорганизмы,

которые в обычных условиях в почве не встречаются.

Вплодородной почве общая биомасса бактерий достигает 500 кг/га и более. Наибольшее значение для почв имеют азотфиксирующие бактерии (Azotobacter, Nitrobacter, Mycobacterium и другие). К типичным почвенным бактериям относятся актиномицеты и спорообразующие палочки родов Bacillus и Clostridium.

Наиболее многочисленны микроорганизмы в верхнем 5-15-сантиметровом слое, меньше их на глубине 20-30 см и минимальное количество на глубине 30-40 см. Однако бактерии обнаруживаются в почве даже на глубине 5 м.

Почва населенных мест загрязняется твердыми и жидкими отбросами, выделениями людей и животных, остатками растений, хозяйственно-бытовыми и промышленными сточными водами. Особенно опасны сточные воды боен, мясокомбинатов, предприятий по переработке кожи, шерсти, которые могут содержать патогенные бактерии. В связи с этим почва может служить фактором передачи возбудителей инфекционных заболеваний. Наиболее длительно живут спорообразующие микробы – возбудители столбняка, ботулизма, сибирской язвы.

Микробиологическое исследование почвы проводят для ее санитарной оценки, характеристики процессов самоочищения, оценки методов обезвреживания

550

отбросов, при определении пригодности участков для строительства, а также при эпидемиологических и эпизоотологических обследованиях с целью выяснения путей заражения почвы, продолжительности выживания в ней патогенных микробов и т. д.

Отбор проб почвы производят с квадратного участка (не менее 5x5 м) из 5 точек - из каждого угла и центра квадрата (“метод конверта”). Образцы забирают в условиях асептики с глубины 20-30 см. Объем образцов 1 кг.

Наличие в почве бактерий группы кишечной палочки свидетельствует о ее свежем фекальном загрязнении. Обнаружение Cl. perfringens в почве указывает на ее давнее фекальное загрязнение.

Микробиота воды Микробиоту водоемов образуют две группы:

-аутохтонная микробиота – совокупность микроорганизмов, постоянно живущих и размножающихся в воде;

-аллохтонная микробиота – совокупность микроорганизмов, случайно попавших в воду и сохраняющихся в ней сравнительно короткое время.

Всоответствии с действующими нормативными документами обязательному микробиологическому контролю подлежит вода питьевая (центрального и местного водоснабжения).

Отбор проб. Для отбора проб питьевой воды используют стерильные флаконы ёмкостью 500 мл. Предварительно обжигают выходное отверстие крана пламенем и пропускают воду в течение 10-15 минут при полностью открытом кране.

Показатели загрязнения:

- E. coli – свежее фекальное загрязнение;

- Citrobacter, Enterobacter – давнее фекальное загрязнение;

- Cl. perfringens (sporogenes) – как свежее, так и давнее фекальное загрязнение;

- термофильные бактерии – загрязнение разлагающимися отбросами; - протей – гнилостный распад.

Микробиота воздуха

Воздух – неблагоприятная среда для размножения микроорганизмов (отсутствие питательных веществ, солнечные лучи, высушивание). Состав микробиоты воздуха – это пигментные сапрофитные бактерии (микрококки, сарцины), актиномицеты, плесневые, дрожжевые грибы и др.

Наибольшее количество микроорганизмов содержит воздух крупных промышленных городов. Воздух же полей, лесов, лугов, а также над водными пространствами, в удалении от населенных пунктов отличается сравнительной чистотой. Значительные изменения претерпевает микробиота воздуха в зависимости от времени года. Максимальное количество микробов обнаруживают в летнее время, а минимальное – в зимнее время.

Микробиологическое исследование воздуха проводится с помощью седиментационного или фильтрационного методов.

Седиментационный метод Коха – определение количества микробов в воздухе в результате спонтанного оседания бактериальных частиц и капель под действием силы тяжести на поверхность питательной среды открытой чашки Петри. При этом читается, что в соответствии с формулой В.Л. Омелянского на