82. Стр. 5 санит микробиология

Методы контроля эффективности стерилизации

В комплексе мероприятий по стерилизации изделий медицинского назначения важное значение имеет организация и проведение контроля за ее эффективностью. Используемые до настоящего времени методы и средства контроля не всегда позволяют выявить дефекты стерилизации, что влечет за собой повышение уровня внутрибольничных инфекций.

Контроль эффективности работы стерилизационного оборудования осуществляется физическими, химическими и биологическим (бактериологическим) методами. Надежность этих методов неодинакова. Физические и химические методы предназначены для оперативного контроля и позволяют контролировать соблюдение параметров режимов паровой, газовой, воздушной стерилизации, температуру, давление, экспозицию. Недостаток этих методов заключается в том, что они не могут служить доказательством эффективной стерилизации. Достоверным для определения эффективности является только бактериологический метод.

Физические методы

Физические методы контроля осуществляются с помощью средств измерения температуры (термометры, термопары), давления (манометры, мановакуумметры) и времени (таймеры). Современные стерилизаторы оснащены также записывающими устройствами, фиксирующими отдельные параметры каждого цикла стерилизации.

Химические методы

В течение десятков лет для проведения химического контроля применялись химические вещества, изменяющие свое агрегатное состояние или цвет при температуре, близкой к температуре стерилизации (бензойная кислота для контроля паровой стерилизации, сахароза, гидрохинон и ряд других веществ - для контроля воздушной стерилизации).

В 70-х годах были разработаны химические индикаторы, изменение цвета которых происходит при воздействии температуры, принятой для данного режима, в течение времени, необходимого для стерилизации. По изменению окраски этих индикаторов можно судить о том, что основные параметры процесса стерилизации - температура и время - выдержаны. Длительное применение таких индикаторов показало их высокую надежность.

Биологический метод

Наряду с физическими и химическими применяется бактериологический метод контроля стерилизации. Он предназначается для контроля эффективности стерилизационного оборудования. До недавнего времени для контроля паровой и воздушной стерилизации использовались пробы садовой земли, содержащей микроорганизмы, высокорезистентные к воздействию стерилизующих факторов. Однако устойчивость микроорганизмов в различных пробах неодинакова, что не позволяет стандартизировать результаты контроля.

В настоящее время для проведения бактериологического контроля используются биотесты, имеющие дозированное количество спор тест-культуры. Контроль эффективности стерилизации с помощью биотестов рекомендуется проводить 1 раз в 2 недели. В зарубежной практике принято применять биологическое тестирование не реже 1 раза в неделю.

В ряде случаев возникает необходимость проведения контроля с помощью биотестов каждой загрузки стерилизатора. Прежде всего, речь идет о стерилизации инструментов, используемых для выполнения сложных оперативных вмешательств, требующих применения высоконадежных стерильных материалов. Каждая загрузка имплантируемых изделий также должна подвергаться бактериологическому контролю. При этом использование простерилизованных материалов задерживается до получения отрицательных результатов контроля. Тех же принципов при определении периодичности контроля рекомендуется придерживаться в отношении газовой стерилизации, являющейся по сравнению с другими методами более сложной.

№ 83 Вакцины. Определение. Современная классификация вакцин. Требования, предъявляемые к современным вакцинным препаратам.

Вакцина — медицинский препарат, предназначенный для создания иммунитета к инфекционным болезням.

Классификации вакцин:

1.Живые вакцины - препараты, действующим началом в которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие свою вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы патогенных бактерий. Примером таких вакцин являются БЦЖ и вакцина против натуральной оспы человека, в качестве которой используется непатогенный для человека вирус оспы коров.

2.Инактивированные (убитые) вакцины – препараты, в качестве действующего начала включающие убитые химическим или физическим способом культуры патогенных вирусов или бактерий, (клеточные, вирионные) или же извлечённые из патогенных микробов комплексы антигенов, содержащие в своём составе проективные антигены (субклеточные, субвирионные вакцины). В препараты иногда добавляют консерванты и адьюванты.

Молекулярные вакцины – в них антиген находится в молекулярной форме или даже в виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность т. е. в виде эпитопов, детерминант.

Корпускулярные вакцины – содержащие в своем составе протективный антиген

3.Анатоксины относятся к числу наиболее эффективных препаратов. Принцип получения – токсин соответствующей бактерии в молекулярном виде превращают в нетоксичную, но сохранившую свою антигенную специфичность форму путем воздействия 0.4% формальдегида при 37t в течение 3-4 недель, далее анатоксин концентрируют, очищают, добавляют адьюванты.

4.Синтетические вакцины. Молекулы эпитопов сами по себе не обладают высокой иммуногенностью для повышения их антигенных свойств эти молекулы сшиваются с полимерным крупномолекулярным безвредным веществом, иногда добавляют адьюванты.

5.Ассоциированные вакцины – препараты, включающие несколько разнородных антигенов.

Требования, предъявляемые к современным вакцинам:

Иммуногенность;

Низкая реактогенность (аллергенность);

Не должны обладать тератогенностью, онкогенностью;

Штаммы, из которых приготовлена вакцина, должны быть генетически стабильны;

Длительный срок хранения;

Технологичность производства;

Простота и доступность в применении.

84. По природе составляющих их компонентов вакцины разделяют на три основные группы — живые, убитые и химические, включая анатоксины.

Живые вакцины готовят из штаммов бактерий и вирусов с ослабленной (или утраченной) вирулентностью. Главное достоинство таких вакцин состоит в том, что живые микроорганизмы, размножающиеся в организме привитых, вызывают бессимптомную (латентную) инфекцию, аналогичную очень часто наблюдаемой в естественных условиях. Поэтому образующийся в этом случае искусственный приобретенный иммунитет ничем не отличается от естественно приобретенного активного иммунитета и, как правило, является прочным и продолжительным, нередко пожизненным. С большим успехом живые вакцины применяют для про¬филактики полиомиелита, кори, желтой лихорадки, туляремии, бруцеллеза, эпи¬демического паротита и других заболеваний. Однако у живых вакцин имеются существенные недостатки. Они могут вызывать сенсибилизацию организма, содержат большой набор антигенов. Живые вакцинные штаммы некоторых вирусов могут вызывать поражение генетического аппарата клеток.

Убитые вакцины представляют собой суспензии клеток или частиц вирулентных микробов - возбудителей инфекционных заболеваний, убитых посредством различных факторов, но не влияющих на свойства антигенов.

Для специфической профилактики брюшного тифа, паратифов А и В, дизентерии, холеры, коклюша и некоторых других инфекционных заболеваний применяют вакцины, приготовленные из микробов, убитых путем воздействия на них повышенной температурой (55-58°), формалином, спиртом, фенолом, мертиолятом и ультрафиолетовыми лучами. По своим антигенным свойствам и иммуногенной эффективности убитые вакцины значительно уступают живым, однако они способствуют снижению инфекционной заболеваемости.

Химические вакцины представляют собой препараты, которые состоят не из цельных клеток бактерий, а из химических комплексов (детерминантных групп антигенов), полученных путем обработки взвеси культуры специальными методами. Так, например, для профилактики брюшного тифа и столбняка людей применяют химическую сорбированную вакцину из О - и Vj- антигенов брюшно-тифозных бактерий и очищенного концентрированного столбнячного "анатоксина".

85. Эубиотики — микроорганизмы, участвующие в формировании естественного, исторически сложившегося микробиоценоза в кишечнике (главным образом в толстом). К ним относятся прежде всего лактобациллы и бифидумбактерии, мета¬болическая активность которых определяет положительное влияние микрофлоры кишечника на организм человека.

Пробиотики — эубиотики, добавляемые к молочным продуктам (йогурт, кефир, молоко и т. д.) или используемые в виде чистых культур, жидких или таблети- рованных (бифидумбактерии, лактобактерин,

колибактерин и др.), или в виде различных комбинаций (бификол — смесь бифидумбактерии + Е. coliM-17, обладающая выраженным антагонистическим действием в отношении ряда других бакте¬рий). В качестве пробиотиков используют также и некоторые споровые бактерии (Bacillus cereus, В. subtilis).

Эубиотики оказывают воздействие на ЖКТ, стимулируя иммунные механизмы слизистой оболочки. Применяются при лечении инфекционных диарей и запоров. Участвуют в стабилизации барьерной функции желудка и уменьшении воспаления его слизистой. Ряд штаммов лактобактерий, бифидобактерий уменьшают побочные эффекты антибиотикотерапии, некоторые штаммы эффективны в снижении побочных действий некоторых других препаратов.

К лекарствам-пробиотикам (имеющих описание в данном справочнике) относятся: Ацилакт, Аципол, Бифиформ, Бифидумбактерин, Лактобактерин, Линекс, Энтерол и другие. Современные лекарства с пробиотическим действием обычно содержат несколько культур различных микроорганизмов. Например, в каждой капсуле Линекса имеется не менее 12 000 000 живых молочнокислых лиофилизированных (высушенных) клеток трех различных видов бактерий:

лактобактерии ацидофильные

бифидобактерии инфантис

энтерококки фэциум.

В настоящем справочнике имеются описания некоторых биологических активных добавок (БАДов) — пробиотиков: Бифиформ Бэби, Бифиформ Малыш и Бифиформ Комплекс.

БАДы могут отличаться от лекарств более простой системой испытаний и сертификации. БАДы-пробиотики, также как лекарства-пробиотики, обычно содержат пробиотические микроорганизмы нескольких типов, а также иные вещества. БАДа Бифиформ-комплекс содержит:

бифидобактерии— не менее 1 000 000 000 бактериальных клеток

лактобактерии— не менее 1 000 000 000 бактериальных клеток

— не менее 1 000 000 000 бактериальных клеток

инулин — не менее 720 мг.

86. «МИБП — лек ср-ва, которые предназначены для использования в медицинской практике с целью лечения, специфической профилактики инфекционных паразитарных заболеваний и аллергических состояний, а также которые получают путем культивирования штаммов микроорганизмов и клеток эукариот, экстракции веществ из биологических тканей, включая ткани человека, животных и растений (аллергены), внедрения технологии рекомбинантной ДНК, гибридомной технологии, репродукции живых агентов в эмбрионах или животных.

К МИБП относят аллергены, антигены, вакцины (анатоксины), цитокины, иммуномодуляторы бактериального происхождения и полученные на основе органов и тканей, препараты, полученные из крови и плазмы крови человека, животных, иммунные сыворотки, иммуноглобулины (включая моноклональные антитела), пробиотики, интерфероны, другие лекарственные средства, предназначенные для использования в медицинской практике с целью лечения, специфической профилактики, диагностики состояния иммунитета (in vivo)».

Виды иммунобиологических препаратов. Эффекты иммунобиологических препаратов.

Виды иммунобиологических препаратов:

• Профилактические и лечебные препараты микробного происхождения (например, вакцины, . бактериофаги, эубиотики, анатоксины)

• Лечебные иммунные препараты (например, Ig, цитокины)

• Диагностические иммунные препараты (например, антисыворотки), а также диагностические бактериофаги и аллергены

• Иммуномодуляторы (различные синтетические препараты, биостимуляторы природного происхождения).

Иммунобиологические препараты могут проявлять активное или пассивное, специфическое или неспецифическое действие.

Активное действие состоит в индуцировании препаратами иммунных реакций. Такими эффектами обладают вакцинные препараты, изготавливаемые на основе живых ослабленных • или убитых микроорганизмов, а также продуктов их жизнедеятельности.

Пассивное действие — эффекты препаратов, представляющих собой эффекторные продукты иммунокомпетентных клеток. Такими эффектами обладают Ig, цитокины и другие иммунобиологические препараты.

Специфическое действие проявляют препараты, обеспечивающие защиту от конкретного возбудителя (например, противокоревая вакцина, столбнячный анатоксин).

Неспецифическое действие оказывают препараты, неизбирательно стимулирующие функции иммунокомпетентных клеток. Такой эффект оказывают иммуномодуляторы, многие биостимуляторы и другие препараты.

№ 87 Антитоксические сыворотки. Получение, очистка, титро­вание. Применение. Осложнения при использовании и их преду­преждение.

Антитоксические гетерогенные сыворотки получаются путем гипериммунизации различных животных. Они называются гетерогенными т.к. содержат чужеродные для человека сывороточные белки. Более предпочтительным является применение гомологичных антитоксических сывороток, для получения которых используется сыворотка переболевших людей (коревая, паротидная), или специально иммунизированных доноров(противостолбнячная, противоботулинистическая), сыворотка из плацентарной а так же абортивной крови, содержащие антитела к ряду возбудителей инфекционных болезней вследствие вакцинации или перенесенного заболевания.

Для очистки и концентрирования антитоксических сывороток используют методы: осаждение спиртом или ацетоном на холоде, обработка ферментами, аффинная хроматография, ультрафильтрация.

Активность иммунных антитоксических сывороток выражают в антитоксических единицах, т.е. тем наименьшим кол-вом антител, которое вызывает видимую или регистрируемую соответствующим способом реакцию с определённым кол-вом специфического антигена. активность антитоксической противостолбнячной сыворотки и соответствующего Ig выражается в антитоксических единицах.

Антитоксические сыворотки применяются для лечения токсинемических инфекций (столбняк, ботулизм, дифтерия, газовая гангрена).

После введения антитоксических сывороток возможны осложнения в виде анафилактического шока и сывороточной болезни, поэтому пред введением препаратов ставят аллергическую пробу на чувствительность к ним пациента, а вводят их дробно, по Безредке.

88. Иммуноглобулины (Ig) или антитела - это особый вид белков, которые вырабатываются под влиянием антигенов и обладают способностью специфически связываться с ними. Иммуноглобулины по своему строению и функции делятся на 4 вида: Ig A, Ig M, Ig G, Ig E Получение лечебно-профилактических сывороток и иммуноглобулинов.

Лечебно-профилактические сыворотки представляют собой иммунные сыворотки (т.е. содержат повышенную концентрацию специфических антител), иммуноглобулины получают из лечебно-профилактических сывороток путѐм удаления из них максимально возможного количества балластных веществ; все препараты для серотерапии бывают гетерологичные (получаемые из лошадиной сыворотки) и гомологичные, которые, в свою очередь подразделяются на донорские и плацентарные. Выделение антител и их очистка. Различают неспецифические и специфические методы выделения А. К неспецифическим относят методы фракционирования иммунных сывороток, в результате которых получают фракции, обогащенные А., чаще всего фракцию lgG-антител. К ним относятся высаливание иммуноглобулинов сернокислым аммонием или сернокислым натрием, осаждение иммуноглобулинов спиртом, методы препаративного электрофореза и ионообменной хроматографии и гель-хроматографии. Специфическая очистка основана на выделении А. из комплекса с антигеном и приводит к получению А. одной специфичности, но гетерогенных по физико-химическим свойствам. Процедура состоит из следующих этапов: получение специфического преципитата

(комплекса антиген — антитело) и отмывка его от остальных компонентов сыворотки; диссоциация преципитата; отделение А. от антигена на основе различий в их молекулярной массе, заряде и других физико-химических свойств. Для специфического выделения А. широко используют иммуносорбенты — нерастворимые носители, на которых фиксирован антиген. В этом случае процедура получения А. значительно упрощается и включает пропускание иммунной сыворотки через колонку с иммуносорбентом, отмывку иммуносорбента от несвязавшихся белков сыворотки, элюцию фиксированного на иммуносорбенте А. при низких значениях рН и удаление диссоциирующего агента путем диализа.

Применение антител в мед. Вследствие высокой специфичности и большой роли в защитных иммунных реакциях антитела используют для диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний, определение иммунного статуса организма, профилактики и терапии ряда инфекционных и неинфекционных болезней. Для этого сущ-ют соответствующие иммуннобиологические препараты, созданные на основе антител и имеющие целевое назначение.